用单抗研究T细胞与牛流行性白血病发生的关系

本试验对10头患流行性白血病病牛的不同器官的肿瘤组织，用8种单克隆抗体（McAb),TH14B、BAQ44A、PIg45A、BIg715A、PIg501E、cAct105、MM1A、AHCC125染色进行了观察。结果：病牛经临床病理学和免疫琼扩试验而诊断为EBL，通过免疫组织化学检测，在10个病例中发现有9个病例的肿瘤组织对B细胞属性的McAb有很强的染色反应，证明其来源于B细胞。仅有1个病例对B细胞属性的McAb着色很淡，而对T细胞属性的McAb着色很深，呈强阳性反应，说明其来源可能与T细胞有关。     

Development of a monoclonal antibody-based co-agglutination test to detect enterotoxigenic Escherichia coli isolated from diarrheic neonatal calves

Escherichia coli (E. coli) strains were collected from young diarrheic calves in farms and field. Strains that expressed the K99 (F5) antigen were identified by agglutination tests using reference antibodies to K99 antigen and electron microscopy. The K99 antigen from a selected field strain (SAR-14) was heat-extracted and fractionated on a Sepharose CL-4B column. Further purification was carried out by sodium deoxycholate treatment and/or ion-exchange chromatography. Monoclonal antibodies to purified K99 antigen were produced by the hybridoma technique, and a specific clone, NEK99-5.6.12, was selected for propagation in tissue culture. The antibodies, thus obtained, were affinity-purified, characterized and coated onto Giemsa-stained Cowan-I strain of Staphylococcus aureus (S. aureus). The antibody-coated S. aureus were used in a co-agglutination test to detect K99+ E. coli isolated from feces of diarrheic calves. The specificity of the test was validated against reference monoclonal antibodies used in co-agglutination tests, as well as in ELISA. Specificity of the monoclonal antibodies was also tested against various Gram negative bacteria. The developed antibodies specifically detected purified K99 antigen in immunoblots, as well as K99+ E. coli in ELISA and co-agglutination tests. The co-agglutination test was specific and convenient for large-scale screening of K99+ E. coli isolates.     

琼脂扩散试验检测附红细胞体抗体

采用琼脂扩散试验检测自然感染猪附红细胞体抗体和兔抗猪附红细胞体抗体,结果表明,猪附红细胞体抗原与自然感染附红细胞体猪血清、首免和二次免疫后收集的兔抗血清的琼脂扩散试验结果均呈阴性,第3次免疫后的血清效价为1∶16。     

脂肪细胞膜免疫技术研究进展

脂肪细胞膜免疫技术是从以动物脂肪细胞膜分离得到的膜蛋白作为抗原,通过被动免疫或主动免疫来破坏脂肪细胞,使脂肪组织中的细胞数量减少,限制其贮存脂肪的能力,从而达到调控动物生长和降低动物脂肪的目的。本文将对脂肪细胞膜蛋白抗体的制备、作用机制及在动物上的使用效果进行阐述,并对此技术尚需解决的问题和发展方向进行综述。     

倍他米松ELISA检测方法的建立

为建立倍他米松(BET)ELISA检测方法,先使BET与琥珀酸酐反应,再采用活化酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原;其次,利用免疫动物获得多克隆抗体,经Sephrose 4B-proteinA方法对抗体进行纯化;最后,建立倍他米松ELISA检测方法。结果表明,免疫抗原偶联成功,获得了亲和力较高的多克隆抗血清,间接竞争ELISA测定其滴度为102 400、IC15为6.60×10-5 ng/mL和IC50为0.97ng/mL。该方法适用于残留在动物性食品中的BET现场大批量检测。     

我国首例小反刍兽疫诊断报告

2007年7月我国西藏发生不明山羊疫情,国家外来动物病诊断中心对当地动物疫病控制中心送检的14只病死山羊病料和一批血清样品分别进行病原学和血清学检测。利用较敏感的小反刍兽疫病毒(PPRV)特异性荧光定量RT-PCR方法,在11只病羊组织中检测到小反刍兽疫病毒核酸。利用次敏感的PPRV普通RT-PCR方法,从8只病羊组织中检测到PPRV核酸。针对1号样本病原核酸N基因和F基因片段进行遗传发生分析,该病原属于4系。利用竞争ELISA试剂盒对送检的13份血清样本进行抗体检测,结果全部阳性。将1号组织样本接种Vero细胞分离病毒,透射电镜观察下,发现了500纳米左右的病毒粒子。对分离毒株进行PCR检测同样证实其为PPRV。     

家蚕微孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定

用家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)总蛋白为抗原,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,第1次融合率为13.3%,第2次融合率为55.4%。建立间接酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体。初检阳性率分别为4.68%和5.26%。经3次亚克隆筛选获得了2株能稳定分泌抗家蚕微孢子虫的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2G10和2B10。间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence test,IFAT)和Western-bloting分析证实所获得的单克隆抗体是特异针对家蚕微孢子虫蛋白的,将在孢子孢壁蛋白的研究中发挥重要作用。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体的调查

应用血凝和血凝抑制试验检测了从吉林省部分地区采集的猪血清中血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）抗体。结果，212份样品中有94份呈现HEV抗体阳性反应，阳性率高达44．3％。被采集血清的猪未表现临床症状，说明该地区的猪群中存在HEV隐性感染。     

应用FA及PPA-ELISA技术对猪瘟的检测

用免疫荧光抗体诊断技术及单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术对疑为猪瘟病毒感染猪进行了检测 ,重点阐述了 2种方法的技术原理和操作过程。通过用免疫荧光抗体诊断技术检测了 5份病料 ,其中有 2份为阳性 ,阳性率为 40 % ;用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术检测了猪瘟血清抗体 ,在 40头母猪血清样品中 ,猪瘟弱毒抗体效价 OD值较高 ,有 1 0 0 %的保护率 ,但是发现母猪群中有 1 0 %隐性猪瘟感染 ,其强毒抗体效价 OD值大于 0 .5,体内带有猪瘟病毒。结果及过程表明此两种诊断方法检测快速、鉴别准确、分辨率高     

禽副粘病毒2型(PMV-2)群特异性单克隆抗体的研究

禽副粘病毒2型（Yucaipa株）鸡胚成纤维细胞适应毒经差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯，免疫Balb/c小鼠，取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA方法筛选，有限稀释3次克隆，获得了两株分泌PMV-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株6E9和7E5。经鉴定两株单抗均为IgG1亚类，杂交瘤细胞的平均染色体分别为96条和98条。细胞培养上清及腹水效价分别为1：25600、1：25600、1：51200和1：10^5、1:10^7。6E9和7E5单抗能稳定分泌抗体且与NDV、AIV、EDSV无交叉反应。间接ELISA实验表明4株PMV-2（Yucaipa株、F4株、F6株和F8株）均含有单抗6E9和7E5所针对的位点。