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101.
根据已发表的猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,CSFV)Alfort株和Brescia株的全基因组序列,设计2对引物P1/P2和B1/B2,在B1和B2的5''端分别加上XhoI和ApaI位点,以CSFVShimen株细胞毒为材料一步法提取总RNA,并以此为模板采用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR),成功地扩增到约2.0kb的片段,将此PCR产物回收后与pMD18-T连接、转化,获得重组质粒,经PCR扩增,限制性酶切(BamhI/HindШ)和序列部分测定鉴定为阳性重组质粒P80-T。将P80-T分别经XhoI和ApaI酶切消化、回收后,与经XhoI/ApaI酶解的真核表达载体PEGPF-C1连接、转化,获得重组质粒,经PCR,XhoI和ApaI限制性酶切和序列测定鉴定为真核表达质粒P80-P,目的基因的插入位置、方向和读码框完全正确。为下一步在哺乳动物细胞中表达猪瘟病毒p80蛋白奠定了基础。 相似文献
102.
以中国四大名园之一的扬州个园作为实例,分析中国古典园林中意境的表达方式。提出了意 境表达可以通过感觉器官和文学艺术形式为线索,诱发游赏者对园林空间景物产生情感激动和理念 联想的观点,进而使园林意境得以顺利、准确的表达。并在此基础得出意境在中国园林中的主要美学 特征,以便对今后的园林造景提供历史借鉴。 相似文献
103.
本研究采用PCR法扩增得到重组UK114 cDNA序列,将其克隆于T-easy载体并进行了序列测定与分析。结果表明该序列全长1 017 bp,有一个开放的阅读框(40 nt~450 nt),可编码137个氨基酸(14.2 kDa),与UK114的序列比较,同源性为91%,突变的86个核苷酸中都为无义突变,开放阅读框中仅有一个核苷酸突变。此外,本实验构建了pBV114表达载体,选择阳性克隆提取质粒进行酶切,琼脂糖检测获得约1 kb和3.7 kb的两个片段。 相似文献
104.
植物病毒载体介导的可溶性甲烷单加氧酶B亚单位在蚕豆植物中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
用基因操作技术将编码可溶性甲烷单加氧酶B亚单位(Soluble Methane Monoxygermse-B component:SMMO-B)的基因全长序列导入来自三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus;CIYVV)侵染性全长cDNA克隆的侵染性植物病毒表达载体pCIYVV/CP/W基因组的NIb/CP基因之间,构建了重组病毒克隆pCV—mmoB。用上述重组病毒克隆接种该病毒的自然寄主植物蚕豆,表现了与野生型CIYVV相同的症状。RT—PCR检测结果表明,子代病毒基因组中的外源基因获得了转录。蛋白质杂交(Western blotting;WB)检测结果表明,sMMO—B亚单位蛋白在被重组病毒克隆侵染的寄主植物中获得了表达。 相似文献
105.
利用DD-PCR技术分析水稻铝诱导基因的表达差异 总被引:38,自引:2,他引:38
利用差异显示(Differential Display PCR,简称为DD-PCR)技术比较了水稻对铝极敏感的品种pp2462-11和极抗品种Pedel在铝胁迫条件下基因的表达差异。结果表明:抗性品种和敏感品种在铝胁迫下其苗期mRNA存在明显差异,实验共发现25个差别cDNA,铝既可诱导抗性品种和敏感品种的基因表达,又可抑制其基因表达。本研究推测抗性品种特异表达的片段可能与合成抗性蛋白有关,敏感品种基因的特异表达可能产生一些毒害蛋白,抑制根的生长。 相似文献
106.
107.
108.
对茄子单性结实抑制差减文库中的1 248个差异表达unigenes在GeneBank数据库中进行BLAST比对分析,结果表明1 109个unigenes具有同源序列,其编码的蛋白包括甲硫氨酸亚砜还原酶、MADS-box转录因子、组蛋白和隐花色素等,涉及到果实发育的多个方面,139个unigenes没有同源序列,可能为新基因。利用荧光定量PCR研究10个差异表达unigenes在茄子单性结实果实和非单性结实果实发育过程中的表达模式,分析表明,在低温条件下,unigenes Z569和Z707在单性结实果实发育中特异表达,可能与单性结实果实的形成有关,可作为研究单性结实的候选基因。 相似文献
109.
毛竹液泡膜Na+/H+逆向运输蛋白基因克隆及表达分析 总被引:3,自引:1,他引:2
植物Na+/H+逆向转运蛋白具有稳定细胞质内Na+浓度和调节pH值的功能,对植物的耐盐性具有重要的作用。利用RT-PCR和RACE技术分离出毛竹(Phyllostachys pubescens)Na+/H+逆向转运蛋白编码基因PpNHX1的cDNA序列,全长2290bp(GenBank登录号为GU295174)。该基因的编码蛋白PpNHX1包含545个氨基酸残基,进行BLASTp比对,发现其与芦苇(Phragmites communis)PcNHX1、水稻(Oryza sativa)OsNHX1的序列同源性分别为89%和88%。系统发育分析表明,PpNHX1蛋白与禾本科植物液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白的亲缘关系较近,与质膜型Na+/H+逆向转运蛋白亲缘关系较远。以半定量RT-PCR检测PpNHX1基因的表达情况,发现PpNHX1受到200mmol/L NaCl胁迫的诱导,在4h内的表达量随NaCl处理时间延长持续增强,其中根部的表达增强幅度明显高于茎和叶;但4h后,PpNHX1在根与叶中的表达量均有所下降。推断PpNHX1基因在盐胁迫下的表达调控与毛竹耐盐能力密切相关。 相似文献
110.