重庆市山羊博尔纳病病毒P24基因的检测

为了解重庆市山羊博尔纳病隐性带毒情况，分析博尔纳病病毒（BDV）的种系来源。采用巢式逆转录酶PCR结合荧光定量PCR（FQ—nRT—PCR）技术对重庆市60只山羊外周血单核细胞（PBMCs）及脑组织中的BDVP24基因片段进行了检测，将阳性产物测序，并与国外BDV毒株进行了比较。结果，山羊外周血检测阳性率为8．3％（5／60），脑组织检测阳性率为10％（6／60）。该BDVP24片段核苷酸序列与马源BDVH1766株同源性最高，达96．519／6，与标准株Strain V和He／80同源性为95．35％，并且编码的氨基酸序列也相同。表明，重庆市山羊中存在动物源性博尔纳病隐性带毒，该BDVP24核苷酸序列与Strain V和He／80株具有高度同源性。     

Determination of nucleotide sequence of SRY gene in sika deer (Cervus nippon)

The aim of the present study was to determine the whole nucleotide sequence of the open reading frame of the sex‐determining region Y (SRY‐ORF) in wild sika deer. The SRY gene of wild sika deer was obtained by polymerase chain reaction (PCR) with DNA from blood samples. The whole nucleotide sequence of the SRY‐ORF in wild sika deer consisted of 687 bp and encoded 229 deduced amino acids. In comparison with the bovine SRY gene, the percentage of nucleotide sequence homology was 91.0% in the overall ORF, and those of the N‐terminal, high mobility group (HMG) box, and C‐terminal regions within ORF were 88.9%, 96.2% and 87.9%, respectively. The nucleotide sequences of sika deer SRY‐ORF characterized in the present study can be used for phylogenetic analysis or sexing in wild sika deer.     

DIPHOSPHONATE TREATMENT OF A PRIMARY OSTEOSARCOMA IN A DOG: A CASE REPORT

The following sequence of treatments was administered to a Saint Bernard dog with a primary distal right radius osteosarcoma: 54 days of daily disodium 1-hydroxyethylidenediphosphonate (HEDP) subcutaneous injections; 53 days of HEDP per os ; one ³²P-HEDP intravenous injection. During the pretreatment period, there was an extensive increase in calcific tumor growth and osteoblastic proliferation. After the subcutaneous HEDP treatment, almost complete tumor necrosis was seen. After the oral HEDP treatment, only the deepest tumor portion contained active osteoblasts, calcific growth of the tumor was completely blocked, and uptake of ^99mTc-Sn-HEDP was reduced to one fourth of the pretreatment uptake. After a single ³²P-HEDP dose, large areas of tumor necrosis were evident histopathologically. However, subsequent resumption of cellular activity occurred in the tumor, and the uptake of ^99mTc-Sn-HEDP increased to pretreatment values. These data suggest that systemically administered HEDP should be studied further for its possible therapeutic potential in the treatment of osteosarcoma and indicate a need for further study of ³²P-HEDP or possibly ³³P-HEDP.     

高寒牧区碱茅＋杂花苜蓿混播试验初报

为选择适合在高海拔，寒冷地区推广的多年生混播牧草品种，采用近年培育出的甘农１号杂花苜蓿与碱茅，在肃南县进行了混播试验，结果表明，高寒地区碱茅与甘农１号杂花苜蓿混播有较强的抗寒性和越冬能力，碱茅与苜蓿以７：４比例混播，可获得最佳产草量和牧草品质。     

CnAβ基因对大鼠RBL-2H3细胞脱颗粒的影响

过敏是人和养殖动物常见的疾病,而且发生的频率呈现逐渐增加的趋势.为了深入了解过敏反应的机制,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建钙调磷酸酶A beta(calcineurin A beta,CnAβ)基因敲除的大鼠RBL-2H3细胞株,并探讨CnAβ基因对RBL-2H3细胞生长及脱颗粒的影响.选取大鼠Cn...     

NDV融合蛋白裂解位点基因的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建与鉴定

将新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株和ＬａＳｏｔａＥ４株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因从本实验室构建的重组质粒ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ中用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ切出。将这２个毒株的Ｆｃ基因定向克隆入昆虫杆状病毒表达载体ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株的Ｆｃ基因克隆ｐＸ３Ｆ４６Ｆｃ和ｐＸ３ＬａＦｃ。重组质粒用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ、ＰｓｔⅠ酶切法、ＰＣＲ和核酸探针法进行了鉴定，证明插入的基因来自ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵ－ＣＬａＦｃ，插入的位置和方向都正确。这２个载体的构建为Ｆｃ基因在昆虫细胞系统的表达创造了条件。     

家蚕P450基因CYP305B1的基因组序列克隆及结构分析

为了研究家蚕P450基因CYP305B1的结构,采用反向PCR技术克隆了家蚕CYP305B1基因的基因组序列,经序列测定,拼接得到家蚕CYP305B1全基因序列,发现家蚕CYP305B1的第1内含子位于5′端非翻译区序列(5′-UTR)中间。将家蚕CYP305B1与野桑蚕P450基因CYP305B1V1序列进行同源性比较的结果表明,二者在5′-UTR上游-400～-770 bp序列间的同源性只有40.4%,序列差异最大的是第1内含子和第6内含子。在第1内含子中,野桑蚕CYP305B1V1在翻译起始密码ATG上游-340之前存在330 bp的插入序列,在-110～-340 bp间二者的同源性也只有46.9%;在第6内含子中,家蚕CYP305B1比野桑蚕CYP305B1V1多了一段约300 bp的插入序列。研究结果有助于进一步探究该基因的转录和调控机制。     

中国华东地区猪生殖-呼吸道综合征病毒(S_1株)ORF_(5～7)基因特征研究

本研究对我国华东地区猪生殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）分离株Ｓ１主要结构蛋白基因（ＯＲＦ５～７）进行了ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ测序分析。结果表明，长度为１５２０ｂｐＤＮＡ序列含有３个阅读框ＯＲＦｓ，即ＯＲＦ５、ＯＲＦ６和ＯＲＦ７，ＯＲＦ５和ＯＲＦ６及ＯＲＦ６和ＯＲＦ７间有部分碱基重叠，且与欧洲型和美洲型ＰＲＲＳＶ相似。ＯＲＦｓ推导的氨基酸序列与美国ＶＲ２３３２和欧洲ＬＶ毒株同源性分析为９９％～１００％和５９％～７８％。ＯＲＦｓ预测的蛋白质分子量、等电点、糖基化位点、亲水性分布图及跨膜螺旋区与ＶＲ２３３２毒株相似。     

通过雏鸡MDV攻毒试验选择抗马立克氏病亲本

对F0、F1、F2亲本经继代No.614血型基因选择后繁殖的F2、F3雏鸡,10日龄以马立克氏病强毒（MDV）攻击至60日龄的死亡率,其父母亲对No.614抗血清呈阳性反应的试验组显著低于其父母亲对此抗血清呈阴性反应的对照组。试验组25个家系中,有14个家系的F2雏鸡死亡率显著低于对照组;F3雏鸡有21个家系的死亡率低于对照组,其中8个家系具有统计意义。肿瘤发生率,以肾脏和腺胃最高,肺脏和神经组织最低。综合血型抗原检测和MDV攻毒结果,从试验组25个家系中选留强MDV抗性家系留种繁殖,继代选育。     

链球菌Gapc基因检测及其序列分析

根据已发表的猪链球菌2型3-磷酸甘油醛脱氢酶(Gapc)基因保守区域设计并合成1对特异性引物,对10株不同来源链球菌Gapc基因进行PCR扩增,并选择PCR产物进行克隆并测序分析,结果在10株不同来源链球菌菌株中有8株可扩增出与预期大小(1011 bp)相一致的DNA片段;选取4株细菌PCR产物进行克隆测序,发现其片段大小为1009或1012 bp,与GenBank参考菌株Gapc基因序列的核苷酸同源性为85.3%~98.3%,氨基酸同源性为87.2%~99.4%;生物学软件分析结果显示Gapc基因在链球菌属细菌中相对保守,且具有较多的潜在抗原表位。本研究为链球菌检测技术和核酸疫苗的研究奠定了基础。