基因打靶备乳腺生物反应器研究进展

基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上,可对基因组进行定点修饰的实验方法。用基因打靶技术制备乳腺生物反应器,克服了显微注射法的众多缺陷。本文简述了制备乳腺生物反应器过程中基因打靶的策略、靶细胞、打靶位点及国内外研究进展和展望等。     

昆虫性别决定的分子机制研究进展

模式昆虫果蝇的性别决定是由一系列基因通过级联形式调控的,其中Sxl是果蝇性别决定的关键基因,调控体细胞性别决定、剂量补偿和种系分化。目前的研究表明,果蝇性别决定级联X∶A>Sxl>tra>dsx在昆虫中是部分保守的。性别决定的研究是人们进行昆虫性别控制的基础,阐明其分子机制将使人们更有效地防治害虫和利用益虫。     

家蚕G蛋白γ1亚基(BmGγ1)的克隆及其谷胱甘肽硫转移酶融合蛋白的表达与纯化

异三元G蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,参与生物体广泛的信号转导。为了研究家蚕体内G蛋白的生理功能及其作用机制,运用生物信息学方法预测了家蚕G蛋白γ1亚基(Gγ1)的序列,设计引物验证预测序列后,克隆了家蚕Gγ1的序列,再通过酶切克隆至表达载体pET-41b(+)后,导入E.coliBL21宿主菌中,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组谷胱甘肽硫转移酶(glutathione s-transferase,GST)融合蛋白,并亲和层析纯化表达产物。家蚕Gγ1重组GST融合蛋白经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,在分子质量约36 kD处出现特异性蛋白条带,重组蛋白经GST亲和层析柱纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,说明已经成功克隆到家蚕Gγ1基因,并在E.coliBL21中高效表达。     

国内商品化猪圆环病毒疫苗的现状及展望

截至2013年12月份,已有16家企业6种不同的猪圆环病毒2型灭活疫苗获得了农业部的注册,其中有批签发的企业14家。整理了猪圆环病毒疫苗在我国的商品化情况,分类总结了该类疫苗工艺核心等基本情况,同时分析了猪圆环疫苗的优缺点,并对猪圆环病毒疫苗的发展前景进行了展望。     

五指山猪小群体遗传学检测

本研究利用26个微卫星基因座对中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所保种场的五指山猪小群体58个样本进行了遗传学检测,用非变性(中性)聚丙烯酰胺凝胶电泳检测微卫星的PCR扩增产物,统计了群体平均基因纯合率、等位基因数,利用等位基因频率计算出各群体的平均遗传杂合度(H)、多态信息含量(PIC)。统计结果:全群平均基因纯合率为66.5%;平均多态信息含量、平均观测杂合度为、平均期望杂合度分别为0.807、0.338、0.835;每个位点平均等位基因数为11.92,此结果说明该群体虽然近交程度较高,但仍具有丰富的遗传多样性,遗传变异较大。     

家蚕泛素结合酶新基因的克隆与基因组结构及5′调控区分析

在家蚕丝腺cDNA文库测序过程中,发现一个编码家蚕泛素结合酶的EST序列,利用3′RACE方法克隆了一个新的家蚕泛素结合酶基因cDNA全长序列,命名为BmUCE2 I(GenBank登录号为DQ219874)。家蚕BmUCE2 I基因全长cDNA由465 bp的开放阅读框序列(ORF)、97 bp的5′端非翻译区序列(5-′UTR)和237 bp的3′端非编码区序列(3-′UTR)组成,其编码的154个氨基酸与其他真核生物间具有较高的同源性。利用BmUCE2 I的EST片断作探针,通过筛选家蚕噬菌体基因组文库,获得了家蚕BmUCE2 I基因组序列和5′调控序列。BmUCE2 I基因由4个外显子和3个内含子组成,在5′端上游调控区域没有类似TATA盒元件,但在-219~-268 bp的区域存在一个50bp的启动子序列,此外还存在CF2-Ⅱ、FTZ、DFD、BRCZ2、DL、STAT、PRD-HD等多个转录因子结合位点。家蚕泛素结合酶新基因的克隆、基因结构及5′调控区的分析为进一步研究泛素蛋白水解酶复合通路相关基因的调控规律提供了重要依据。     

采用根滤去污工艺的污水净化植物补救系统决策支持软件

为了开发利用植物去除因吸收污染水而产生的重金属的商业化根滤系统和植物去污补救工艺,研究开发了微型计算机软件,以便为该系统的设计与运行提供参考。建立了一个基于Michaelis-Menton方程的工艺模型,可以定量确定在根滤系统中的植物积累和去除毒素物质的能力。采用一系列的算法处理信息并编入一个根滤设施的系统模型内。该系统模型将植物补救系统的物理元件——植物苗圃、根过滤系统、水的前处理与后处理、植物生物质的产后处理等与系统设计的工程方面包括工艺、运行、设施和系统集成结合起来。该软件内含的工程经济分析工具可用于分析主要设计变量对系统效率的影响     

四个家鸡群体血液蛋白质多态性分析

本实验采用醋酸纤维薄膜电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定了新兴黄鸡，矮脚鸡，竹丝鸡，粤黄鸡麻羽系血液蛋白质多态性，观察了以上群体多态性血液蛋白质基因频率的区别，根据基因频率计算出４个群体的平均杂合度，用主分量分析方法对它们之间的区别与联系进行了研究。主要分析表明竹丝鸡与新兴黄鸡的关系相对新兴鸡与矮脚鸡，竹丝鸡与矮脚鸡之间的关系更为疏远：矮脚鸡则与粤黄鸡麻羽系关系密切。     

对家蚕多星纹基因ms的SSR标记定位分析

对家蚕幼虫斑纹突变多星纹基因ms进行分子标记定位,有益于对多星纹性状的分子标记辅助选择和对该基因的定位克隆研究。利用家蚕雌性染色体在减数分裂过程中不发生交换的特点,采用幼虫斑纹为素斑(p)的家蚕品系C108,幼虫斑纹为多星纹(ms)的家蚕品系g02,组配正反交群体(g02×C108)F1♀×g02♂和g02♀×(g02×C108)F1♂,分别记作BC1F和BC1M,利用已经构建的家蚕SSR分子标记连锁图谱中第12连锁群上的18对SSR标记引物在亲本间进行多态性筛选。BC1F群体中的普通斑个体均表现出与(g02×C108)F1相同的杂合型带型;而所有多星纹个体的带型与亲本g02一致,为纯合型。结果筛选出S1206、S1208、S1210、C5553S3共4个与家蚕ms连锁的SSR标记。利用BC1M群体构建家蚕ms及其连锁的SSR标记遗传连锁图,连锁图的图距为34.5 cM,4个SSR标记及ms的排列次序为S1206—S1208—S1210—C5553S3—ms,ms位于34.5 cM处,与ms最近的标记为C5553S3,遗传距离为12.4 cM。依据该SSR标记遗传连锁图谱可对ms进一步精确定位。     

Lactogenic hormones stimulate expression of lipogenic genes but not glucose transporters in bovine mammary gland

During the onset of lactation, there is a dramatic increase in the expression of glucose transporters (GLUT) and a group of enzymes involved in milk fat synthesis in the bovine mammary gland. The objective of this study was to investigate whether the lactogenic hormones mediate both of these increases. Bovine mammary explants were cultured for 48, 72, or 96 h with the following hormone treatments: no hormone (control), IGF-I, insulin (Ins), Ins + hydrocortisone + ovine prolactin (InsHPrl), or Ins + hydrocortisone + prolactin + 17β-estradiol (InsHPrlE). The relative expression of β-casein, α-lactalbumin, sterol regulatory element binding factor 1 (SREBF1), fatty acid synthase (FASN), acetyl-CoA carboxylase α (ACACA), stearyol-CoA desaturase (SCD), GLUT1, GLUT8, and GLUT12 were measured by real-time PCR. Exposure to the lactogenic hormone combinations InsHPrl and InsHPrlE for 96 h stimulated expression of β-casein and α-lactalbumin mRNA by several hundred-fold and also increased the expression of SREBF1, FASN, ACACA, and SCD genes in mammary explants (P < 0.01). However, those hormone combinations had no effect on GLUT1 or GLUT8 expression and inhibited GLUT12 expression by 50% after 72 h of treatment (P < 0.05). In separate experiments, the expression of GLUTs in the mouse mammary epithelial cell line HC11 or in bovine primary mammary epithelial cells was not increased by lactogenic hormone treatments. Moreover, treatment of dairy cows with bovine prolactin had no effect on GLUT expression in the mammary gland. In conclusion, lactogenic hormones clearly stimulate expression of milk protein and lipogenic genes, but they do not appear to mediate the marked up-regulation of GLUT expression in the mammary gland during the onset of lactation.