酶法辅助提取金柑皮总黄酮的工艺优化研究

采用纤维素酶辅助提取技术进行金柑皮总黄酮提取工艺研究。以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH可见光分光光度显色法测定总黄酮含量,选用单因素试验探索料液比、温度、乙醇浓度、酶量和提取时间对金柑黄酮提取率的影响,并在此基础上开展正交试验对工艺条件进行优化。结果表明,各因素对提取效果影响由大到小依次为：乙醇浓度>温度>料液比> 酶用量>提取时间,最佳提取工艺条件为：乙醇浓度是70%,料液比1:35,酶用量75 U/mL、温度50℃,提取时间100 min,提取率为1.39%,平均回收率103%。.     

金柑LEAFY同源基因克隆与全序列分析

通过PCR扩增，从融安金柑基因组DNA中克隆出一条2361bp的DNA片段，该DNA克隆含有1个2081bp的LEAFY同源基因全长序列（FcLFY）。金柑LEAFY同源基因包含2个内含子和3个外显子，编码398个氨基酸。比对结果表明，金柑LEAFY同源基因与甜橙、枳的LEAFY同源基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性均为98％。该研究为今后从分子水平上研究金柑开花调控机理打下了坚实的基础。     

金橘皮中黄酮类物质的提取及其体外抗氧化活性研究

为了确定金橘皮中黄酮类物质的提取工艺和初步鉴定该类物质的活性,该文以黄酮得率为考察指标,比较了不同溶剂对金橘皮黄酮类物质的提取效果,并采用正交试验,研究了提取溶剂浓度、提取温度、时间和料液比对金橘皮黄酮类化合物提取的影响.同时,以粗黄酮类物质的还原能力、对超氧阴离子自由基(O2·)、羟基自由基(·OH)的清除率作为考查指标,研究了金橘皮黄酮类物质的体外抗氧化活性.确定了最佳提取工艺条件为:最佳提取溶剂为甲醇,甲醇浓度为60%,料液比为1:40,温度80℃,提取时间4 h.粗黄酮具有较强的还原能力,高于同浓度下的抗氧化剂2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和没食子酸丙酯(PG);对O2-、·OH均具有良好的清除作用,但对O2·的清除效果更好.     

金柑属ISSR反应体系的建立及优化

以融安金弹（F．crassifolia Swingle）为试材,利用正交设计和单因素试验相结合的方法,对ISSR反应体系中各个主要影响因子进行了优化筛选,结果表明,20μL的ISSR反应体系中各组分的最适浓度分别为：Mg^2＋1．60mmol／L,dNTPs0．15mmol／L,TaqDNA酶1．0U,引物0．2μmol／L模板1．2ng／μL．并利用该优化对金弹等21份金柑属材料进行了ISSR扩增,证实了该体系稳定和可靠性．     

金柑高效再生体系的建立

以金柑实生苗为试材进行试验,研究不同再生培养基和苗龄及不同暗培养时间对金柑不定茅再生的影响,建立一套高效稳定的金柑组织培养再生体系.结果表明:采用55 d苗龄的无菌苗上胚轴茎段在Ms+6-苄氨基嘌呤(6-BA)2.0 mg/L+а-萘乙酸(NM)1.0mg/L+激动素(KT)1.0 mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂(DH值5.7)再生培养基上,不经过暗培养直接转移至光/暗周期1 6 h/8 h条件下,为诱导金柑不定芽再生的最佳条件,再生率高达90%.     

金柑组织培养与快速繁殖体系的建立

为了建立金柑(Fortunella japonica (Thunb.) Swingle)组织培养与快速繁殖体系,本研究以金柑胚根、子叶、茎段、叶片等不同外植体为材料,采用器官发生型以及短枝扦插型为主要培养途径,进行金柑的组织培养,研究不同浓度的植物生长调节剂对金柑快速繁殖体系建立的影响以及愈伤组织诱导和分化的最适条件,筛选出诱导愈伤组织形成不定芽的最佳外植体与最适培养基。研究结果表明,金柑诱导愈伤组织形成不定芽的最佳外植体为幼嫩的茎段,诱导金柑子叶形成愈伤组织的最佳培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA +1.0 mg/L NAA+3% 蔗糖+0.7% 琼脂,诱导子叶愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+3% 蔗糖+0.7% 琼脂。由此证明上述组织培养途径是可行的。     

辐照降解壳聚糖涂膜对沙糖桔、圣女果和金桔的保鲜作用

研究了经辐照降解后的不同分子量壳聚糖对沙糖桔、圣女果、金桔在贮存过程中失重率、腐烂率、总酸、可溶性固形物以及抗坏血酸的影响。结果表明:降解壳聚糖处理可显著降低3种果实的失重率和腐烂率,延缓总酸、可溶性固形物以及抗坏血酸含量的下降;其中,分子量为6.6×104Da的壳聚糖对3种水果的保鲜效果最佳,贮存18d的腐烂率较对照组分别降低71.11%、66.01%和70.22%,总酸提高55.60%3、6.75%和36.68%,可溶性固形物提高49.06%、25.75%和49.46%,抗坏血酸提高42.80%、41.65%和51.70%。因此,辐照降解壳聚糖能有效降低3种水果的腐烂率,延长贮存期至18d,并保持其营养品质。     

金柑CDDP-PCR反应体系优化研究

构建优化金柑CDDP-PCR反应体系并筛选适用于金柑CDDP-PCR分析的理想引物,为利用CDDP标记技术辅助种质鉴定以及分子育种等提供参考依据。以金柑基因组DNA为模板,采用正交优化试验设计方案,对dNTPs浓度、引物浓度、模板DNA用量、Mg²⁺浓度、Taq DNA聚合酶浓度设计5因素4水平试验,采用极差分析法、方差分析法和Duncan多重比较法对试验结果进行分析。结果表明:利用供试的5个金柑品种验证试验效果,21条CDDP通用引物均可扩增出多态性条带。最佳反应体系为:dNTPs浓度为0.15 mmol·L^-1,引物浓度为1.0 μmol·L^-1,模板DNA用量为120 ng,Mg²⁺浓度为1.5 mmol·L^-1,Taq DNA聚合酶浓度为0.25 U,剩余体积用ddH₂O补足至20 μL。各因素对反应体系影响从大到小依次为dNTPs>引物>模板DNA>Mg²⁺>Taq DNA聚合酶。     

金橘脚腐病病原菌鉴定

金橘[ Fortunella margarita( Lout.)Swingle]为芸香科( Rutaceae)柑橘亚科(Aurantioideae)金柑属(Fortunella)多年生常绿木本植物,原产于我国,全国各柑橘产区均有栽培.广西桂林阳朔地区盛产金橘,随着金橘树栽培面积的扩大,病害逐渐加重.其中,尤以金橘脚腐病最为突出.金橘脚腐病主要发生在近地面的根茎部,表现为皮层组织腐烂、流胶;轻者植株生长衰退、果小、产量降低、品质变劣,重者全株枯死,给当地果农造成巨大经济损失.脚腐病在世界各柑橘产区均有发生,一般认为引起柑橘脚腐的病原是疫霉属(Phytophthora spp.)真菌,在不同国家或地区,种类有所不同.