柯氏艾美耳球虫发育史的研究

柯氏艾美耳球虫的内生发育包括２代无性繁殖和１代有性繁殖,第１代裂殖生殖阶段的时间为感染后至４８ｈ,第２代裂殖生殖阶段的时间为感染后４８￣８４ｈ,配子生殖阶段始于感染后７６ｈ。感染后９０￣１３８ｈ在肠绒毛中发现成熟的配子体,感染后９６ｈ在回肠肠腺中发现卵囊,至１３８ｈ仍可见。最短孢子化时间为９￣１２ｈ。柯氏艾美耳球虫的宿主特异性强,不感染虎皮鹦鹉、八哥、鹌鹑和雏鸡。     

柔嫩艾美耳球虫MIC4-N的真核表达

应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫的MIC4-N端基因并去掉信号肽,为了表达检测和纯化的方便,设计引物时改变了3＇端的终止密码子,使MIC4-N的C末端带有c-myc和6His抗原标签。通过双酶切,使加工好的MIC4-N基因连接到毕赤酵母表达载体pPICZαA上,转化JM109感受态细胞。再经EcoRⅠ与NotⅠ双酶切、菌落PCR及测序鉴定,证明目的基因与真核表达载体pPICZαA构建成功,单酶切重组表达载体、电转转入GS115酵母感受态细胞中。用含高浓度Zeocin的YPD平板筛选酵母菌落,菌落PCR法鉴定转化成功的阳性菌,在BMMY培养基中摇瓶培养,并用甲醇诱导,经SDS-PAGE及Western Blot鉴定,蛋白分泌表达成功。     

柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3在293T细胞中的表达研究

为构建柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3（Eimeda tenella calcium-dependent protein kinases3,EtCDPK3）基因的重组质粒pCAGGS-EtCDPK3,并转染293T细胞进行表达,以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增其含完整开放阅读框的序列,将其克隆至pGEM．Teasy载体,构建pGEM—Teasy-EtCDPK3重组质粒,双酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3。该重组质粒经酶切和测序鉴定正确后转染293T细胞进行表达,分别用免疫印迹和间接免疫荧光鉴定EtCDPK3基因的表达情况。结果显示所构建的真核重组表达质粒pCAGGS—EtCDPK3经过双酶切鉴定,可见1条大小约为1302by的目的条带,测序结果与实验室已获得的EtCDPK3序列完全一致;Western blot结果可见大小约为49kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光实验可以检测到红色荧光。这些研究结果表明已成功构建了EtCDPK3的真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3,并在真核细胞中获得表达,为深入研究EtCDPK3的功能和制备DNA疫苗奠定了基础。     

人工感染柔嫩艾美耳球虫对雏鸡盲肠正常菌群的影响

在对雏鸡人工感染柔嫩艾美耳球虫后6、8、13、20天,分别对感染雏与未感染雏盲肠内容物中梭杆菌、真杆菌、消化球菌、乳酸杆菌、类杆菌、肠球菌、葡萄球菌和肠杆菌等8种主要正常菌群进行定性、定量分析。结果发现在球虫感染第20天,感染组有益菌如乳酸杆菌的数量低于对照组,差异极显著(P<0.01),有害菌如梭杆菌、葡萄球菌数量感染组高于对照组,其中梭杆菌差异显著(P<0.05),葡萄球菌差异极显著(P<0.01)。     

柔嫩艾美球虫（Eimeria tenella）体外细胞培养

试验比较了玻璃珠层析法,ＤＥＡＥ纤维素层析法,Ｇ３漏斗过滤法３种提纯柔嫩艾美球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）子孢子的方法,柱高８ｃｍ,直径２００μｍ的玻璃株柱用ｐＨ８．０的Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ缓冲液作洗脱提纯子孢子,回收率为６４．１％,子孢子洗脱高峰期集中,且易于无菌操作,柱高５ｃｍ的ＤＥＡＥ纤维素柱用ｐＨ８．０的甘氨酸缓冲液作洗脱液,提纯子孢子回收率为６３．２％,但严格无菌操作困难,Ｇ３漏斗法易     

免疫调节剂对球虫感染鸡的免疫学指标的影响

为探讨免疫调节剂对鸡球虫病的免疫反应调节作用 ,设计并进行了免疫调节剂对球虫感染鸡的免疫学指标影响的研究。测定指标包括 :淋巴细胞玫瑰花环细胞形成率 ,淋巴细胞转化率 ,红细胞免疫复合物花环形成率 ,红细胞 C3b受体花环形成率 ,脾脏重 /体重相对重 ;血清中 Ig G,Ig M,Ig A的 EL ISA P/ N值。结果各项免疫学指标的差异显著。表明胸腺素、黄芪多糖和卡介苗等免疫调节剂可提高球虫感染鸡的淋巴细胞玫瑰花形成率、淋巴细胞转化率。     

复方中药制剂“球宁”对感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡红细胞免疫功能的影响

用青蒿、常山等组成复方中药制剂“球宁”,并对其进行超微粉碎加工成微粉制剂。按不同比例添加与饲料中,饲喂人工感染柔嫩艾美耳球虫的雏鸡,以磺胺喹啉钠为对照,在感染后8d剖杀,检测血浆中红细胞C3b受体(RBC-CR1)花环率和免疫复合物(RBC-IC)花环率,以观察“球宁”及其微粉制剂对人工感染柔嫩艾美耳球虫的雏鸡的红细胞免疫功能的影响。结果,粗粉组(2%)、微粉组(2%)、微粉组(1%)三组的红细胞C3b受体花环形成率比阳性对照组有明显提高(p<0.05);红细胞免疫复合物(RBC-IC)花环形成率比阳性对照组有所降低(p<0.01)。说明所试药物能改善红细胞的免疫粘附功能,显著降低血浆中免疫复合物的含量,降低球虫病对机体的损伤。     

生物技术在鸡球虫免疫研究中的应用

就近几年开发的球虫疫苗和球虫免疫中所涉及的分子细胞生物学、分子免疫学和功能基因组学的相关技术进行了阐述。     

雏鸡实验感染柔嫩艾美尔球虫的病理学研究

１１４只２３日龄无球虫罗斯小公鸡，分为三组，第１和第２每只鸡分别口服１．０８×１０＾５和５．４２×１０＾４个柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊，第３组对照。结果，第１、２组在感染后第４天呈现血便，第５天发性死亡，其死亡率分别为１３．６％５０和５．４％。尸体剖检，盲肠明显肿大，肠壁出血；后期，盲肠萎缩，并出现干酪样肠 芯。病理组织学变化特点，为出血一坏死性或出血一卡地他性盲肠炎，以及出血一卡他性直肠炎。第８天