中华绒螯蟹与合浦绒螯蟹线粒体细胞色素b基因片段的DGGE分析

[目的]探讨利用DGGE技术对中华绒螯蟹和合浦绒螯蟹遗传多样性进行分析的可能性。[方法]对中华绒螯蟹5个群体和合浦绒螯蟹1个群体共180个个体的线粒体细胞色素b（cytb）基因片段进行了PCR扩增和变性梯度凝胶电泳（DGGE）分析。[结果]所有PCR产物在DGGE电泳时共有2种迁移速率,合浦绒螯蟹所有个体的PCR产物的迁移速率相同,且中华绒螯蟹江都群体46.7%、仪征群体23.3%以及温州群体20.0%的个体与合浦绒螯蟹的迁移速率一致;而以上3个中华绒螯蟹群体的其他个体以及南京、盘锦群体所有个体的PCR产物在DGGE电泳时的迁移速率均相同,均快于合浦绒螯蟹,表明在中华绒螯蟹中混杂有合浦绒螯蟹的遗传标记类型。[结论]DGGE方法可用于绒螯蟹的遗传多样性分析。     

牙龈卟啉菌菌毛基因在转基因番茄果实中的特异表达及小鼠免疫实验

将编码牙龈卟啉菌菌毛蛋白（Fimbrillin,FimA）（第266-337Aa）与霍乱毒素B亚基（CTB）基因用农杆菌侵染法转入番茄植株,并利用番茄果实特异启动子E8使其在果实中实现特异表达,然后用特异表达的转基因番茄果实对实验小鼠进行口服免疫实验,研究转基因番茄果实的免疫原性。实验结果表明：获得的11株转化植株中,共有9株重组了CTB-FimA基因的植株在番茄果实中实现了特异表达;口服转基因番茄果实的免疫小鼠的血清中检测到抗FimA抗体;获得了以CTB为佐剂的在番茄果实中特异表达牙龈卟啉菌菌毛基因的植物口服疫苗候选植株。     

复方玄参口含片的制备及含量测定

[目的]制备复方玄参口含片并测定其主要有效成分的含量。[方法]以玄参地上部分提取物为主药,采用湿法制粒压片法,以口含片外观、口感和崩解时限等因素为指标,确定口含片的制备工艺路线,并筛选出最佳处方;以哈巴俄苷为指标,采用高效液相色谱法建立口含片的质量控制标准。[结果]最佳处方组成为玄参地上提取物（6.7%）、杜仲叶提取物（4%）、甘露醇与糖粉混合物（36.7%）（1∶1,V/V）、薄荷脑（0.95%）、硬脂酸镁（0.24%）。[结论]按照筛选的处方和研究的制备工艺,配制出了符合要求的口含片,并测定了其主要成分的含量。     

PSMB7基因与阿尔茨海默病的相关性研究

目的探讨蛋白酶体亚基-B7（PSMB7）基因多态性、载脂蛋白E（ApoE）基因多态性和阿尔茨海默病（AD）的相关性。方法 376例日本AD患者（324例迟发型和52例早发型AD）和378例非痴呆对照组中,用TaqMan-PCR法检测PSMB7基因rs7871785（＋561G/A）、rs3780199（＋26651C/T）及APOE基因的单核苷酸多态性,并分析与AD的相关性。结果 PSMB7基因rs7871785 A/A纯合子频率在早发型AD中明显高于对照组（0.75 vs 0.60,P=0.037）,而rs3780199 C/C纯合子频率在AD中明显高于对照组（0.23 vs 0.15,P=0.009）。在非APOE-ε4携带者中,AD患者rs3780199 C/C纯合子频率明显高于对照组（0.23 vs 0.16,P=0.005）。结论 PSMB7基因rs7871785多态位点A/A纯合子与早发型AD存在相关性,而rs3780199C/C纯合子独立于APOE-ε4基因与迟发型AD存在相关性。     

HAV表位抗原与HBV核心抗原融合基因的原核表达

为探讨甲肝DNA疫苗的可行性,利用DNA重组技术将甲肝病毒（HAV）复合多表位抗原基因VPx插入到乙肝病毒核心抗原（HBcAg）基因中,得到CVPx融合基因。将CVPx克隆到原核表达载体pET-28a（＋）中,并在大肠杆菌中进行表达,表达的蛋白进行Western Blot及ELISA检测,结果表明：融合蛋白具有甲肝病毒表位抗原的反应原性。     

含CpG序列PRRSV ORF5基因真核质粒构建及其免疫原性的研究

 【目的】提高猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。【方法】经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSV GP5蛋白。免疫SPF小鼠,检测鼠的特异性抗体滴度、脾T淋巴细胞亚群数量（CD4+和CD8+）以及淋巴细胞增殖反应（MTT法）水平。【结果】本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的体液免疫与细胞免疫。【结论】CpG-ODN可提高PRRSV基因疫苗的免疫效果。     

两种物理方法破碎大肠杆菌比较试验

采用超声波和反复冻融两种物理方法,对一定浓度的标准致病性大肠杆菌进行破碎率比较试验。结果表明:在试验条件下,超声波破碎法达到97%以上的破碎率所需时间为30~50min,尤其是菌液浓度为每毫升50亿,用Ф10变幅杆破碎,30min破碎率可达99.9%。而反复冻融破碎,无论液氮的低温冷冻人为速溶或自溶,还是采取冷冻箱的冻融,达到50%以上的破碎,要耗时数小时,且要经过预冷冻的过程。     

鸡源鲍氏志贺菌的RAPD分析

【目的】确定鸡源鲍氏志贺菌的进化地位。【方法】选用6条随机引物(P1~P6),采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对1株鸡源鲍氏志贺菌、2株鸡白痢沙门菌、2株鸡肠致病性大肠杆菌和2株痢疾志贺菌共7株菌的基因组DNA进行分析,同时对个别特殊序列进行克隆测序,并在此基础上分析了鸡源鲍氏志贺菌与其他15个相关菌株的进化关系。【结果】6条随机引物中有4条引物(P1,P2,P4和P6)能较好地在志贺菌、鸡白痢沙门氏菌和鸡致病性大肠杆菌3种菌中检测到多态性分子标记;这4条有效引物共扩增出了64个DNA片段,其中7个菌株共有的谱带有3条,多态性片段有61条,多态率达95.3%。引物P2可根据扩增图谱将志贺菌和大肠杆菌与沙门菌鉴别出来;用引物P6对上述7株细菌进行扩增,发现同种菌株间谱带特别相似,其中鸡鲍氏志贺菌与人痢疾志贺菌扩增条带的相同率达66.7%,与鸡肠致病性大肠杆菌扩增条带的相同率达44.4%,而鸡白痢沙门菌与志贺菌的扩增谱带相差甚远,可用于3种细菌的鉴别。对扩增片段进行的测序及进化分析结果显示,鸡源鲍氏志贺菌与人源志贺菌的进化距离最近。【结论】鸡源鲍氏志贺菌可能是人源志贺菌的一个变异株或新的亚种。     

维生素E对毒死蜱胁迫下斑马鱼血清CAT和SOD的保护作用

通过对斑马鱼肌肉注射不同浓度毒死蜱以及维生素E,研究斑马鱼血清中过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活力变化情况以及维生素E的抗氧化作用。试验分为5组,依次为对照组和低、中、高浓度毒死蜱组(0.002、0.02、0.2 mg/kg)以及高浓度联合维生素E(0.2 mg/kg+VE)治疗组。结果表明,毒死蜱不同浓度组短时间(24 h)作用均使两种酶活性升高(P﹤0.01),加维生素E组活性增高更显著;长时间(168 h)作用则明显抑制酶活性(P﹤0.01),维生素E组酶活性变化较平缓。表明毒死蜱对斑马鱼机体抗氧化系统损伤作用明显,维生素E对CAT和SOD活力有保护作用。     

鸡堆型艾美尔球虫3-1E抗原表位的生物信息学预测

应用生物信息学分析和预测鸡堆型艾美尔球虫3-1E蛋白二级结构和抗原表位,为确定和筛选优势表位,研制安全、高效表位疫苗奠定基础。以克隆获得的鸡堆型艾美尔球虫3-1E蛋白氨基酸一级结构为基础,采用DNAStar软件和生物信息学在线分析程序Prot Param、SOSUI、IEDB、SYFPEITHI等预测3-1E蛋白理化性质和二级结构,并分析其序列跨膜区、可溶性、亲水性、可及性、柔韧性参数以及抗原指数,预测B细胞表位和T细胞表位的可能区域。3-1E蛋白由170个氨基酸组成,分子式C818H1257N213O272S3,分子质量18.5234 ku,理论等电点为4.25,半衰期为10 h;无跨膜区均为膜外区,是一种可溶性蛋白。其二级结构中α螺旋占31.76%,β转角为12.35%。B细胞表位预测区域:44-49、65-67、86-87、111-116;分值较高的T细胞表位区域:52-60、94-102、97-105、154-162、157-165。运用生物信息学方法确定3-1E存在多个抗原表位,对进一步研究3-1E的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要意义。