苹果RAPD分析体系的建立

对富士苹果（Ｍａｌｕｓ　ｐｕｍｉｌａ　Ｍｉｌｌ．ｃｖ．Ｆｕｊｉ）ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ　Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＤＮＡ）分析体系的优化研究表明,ＲＡＰＤ反应体系中,ＤＮＡ、Ｔａｑ酶、引物和Ｍｇ２＋４种主要成分的最适用量分别为：２０ｎｇ、１．０ Ｕ、０．２ｕｍｏｌ·Ｌ－１和３．０ｕｍｏｌ·Ｌ－１。采用该优化体系,以 ＯＰＪ０３为引物,构建了我国及世界范围内苹果生产中重要的２８个品种的ＲＡＰＤ指纹图谱,分析了其遗传多样性,区分了供试的２８个苹果品种中的１５个,区分率达５３．６％。讨论了ＲＡＰＤ鉴定苹果品种的应用及其主要影响因素。     

大豆对大豆胞囊线虫侵染的应答机制研究

大豆胞囊线虫病(Heterodera glycines,soybean cyst nematode,SCN)是大豆生产上的重要病害,其特点为危害重、分布广、难防治,每年对大豆生产造成极大的损失。种植大豆抗性新品种是防治SCN目前最为有效的措施,研究大豆对SCN侵染的应答机制,是培育大豆持久抗病品种的前提,对加快抗线虫品种选育及SCN的防控具有重要的意义。本文综述了大豆对SCN侵染的组织细胞学应答机制;介绍了大豆在SCN侵染后酶系变化及酚类代谢的生理生化应答机制;从分子水平阐明了SCN侵染后大豆的基因转录变化,差异蛋白及DNA甲基化的应答机制,以期为大豆胞囊线虫病害的进一步研究与防治提供参考。     

甜菜DAMD-PCR体系的建立及优化

为了建立甜菜DAMD扩增体系,以期利用DAMD引物应用于甜菜品种指纹图谱的构建及分子标记辅助育种。本实验利用单因素变量的方法对甜菜DAMD体系进行优化。同时选用12个甜菜品种,利用优化的体系对25条DAMD引物进行扩增。获得甜菜的最适DAMD体系:总体积为20μL,包含模板DNA 10~80 ng、0.75 U的DNA聚合酶、0.2μL的d NTPs(2.5 mmol/L each)以及2.0μL的引物(10μmol/L)。同时25条引物均扩增出了清晰条带,除了个别引物多态性较差外,其余引物多态性都非常的丰富,其中引物62H(-)就可以把实验中用到的12个甜菜品种全部区分开。由此可见,DAMD引物的扩增效率很高,并且扩增结果稳定,条带清晰,非常适合甜菜品种指纹图谱的构建及遗传多样性分析。     

粮食污染物残留免疫分析技术研究与示范

随着人们对粮食安全问题的重视,政府部门不断加强对粮食安全的监测工作。针对粮食生产、加工、储运过程中的化学污染物安全性问题,研究粮食污染物快速监测技术,研究污染物免疫分析方法通过利用抗原、抗体的特异性反应来检测农药含量,设计并筛选吡虫啉、多溴联苯醚、功夫菊酯、氰戊菊酯4种半抗原,制备相关高特异性的抗体,分析吡虫啉、多溴联苯醚、功夫菊酯与气相色谱法(GC)相比,稻谷、大米、玉米样品通过相关性分析均高度相关,操作简便、快速。     

不同发育时期菊芋块茎DNA提取效果比较研究

为筛选菊芋块茎DNA提取的适宜生育时期,以“青芋1号”菊芋品种为试材,用改良CTAB法对不同发育时期菊芋块茎DNA进行提取,经琼脂糖凝胶电泳及全波长分光光度计检测总DNA的纯度、浓度及质量,选用4条ISSR引物进行PCR验证.结果表明:不同发育时期提取菊芋块茎DNA效果较好,DNA浓度呈现单峰曲线变化,峰值出现在第9周,与琼脂糖凝胶电泳检测呈现的亮度结果一致,PCR验证结果显示,提取的DNA能够满足后续相关分子生物学的要求.     

红富士苹果芽变系DNA甲基化研究

以35份富士苹果(Malus×domestica Borkh.‘Fuji’)芽变材料为试材,利用甲基化敏感扩增多态性(Methylation Sensitive Amplified Polymorphism,MSAP)分析和UPGMA聚类方法,对其基因组甲基化修饰水平、变异模式以及表观遗传变异关系进行研究。结果表明:(1)不同富士系得到不同的MSAP扩增,总DNA甲基化水平27.90%～36.16%,平均32.87%,双链全甲基化为主要甲基化方式;(2)富士芽变材料绝大多数位点保持了原有甲基化模式;(3)绝大多数芽变(68.57%)检测到全部的甲基化变异模式(12种),去甲基化频率极显著高于甲基化频率(P <0.01),且CG去甲基化极显著高于CHG;(4)36份种质遗传相似系数平均值0.89(0.79～0.92),在聚类图上,富士原种分布在芽变系集中区外,新近发生的芽变系更倾向于聚在一起,着色系片红型和条红型芽变呈分散排布状态。总的来看,富士芽变的甲基化变异模式丰富,超甲基化和去甲基化相伴发生,但以去甲基化为主;‘富士’着色芽变与其最原始品种富士,以及芽变之间发生了较大表观遗传变异;片红和条红型芽变聚类未表现明显偏好性。本研究将为进一步开展富士着色系芽变机理研究提供指导,可以CG去甲基化为切入点展开深入研究。     

CUDC-907 induces DNA damage and autophagy in glioma cells

AIM:To investigate the effect of CUDC-907, a dual histone deacetylase (HDAC) and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitor, on the DNA damage, cell cycle distribution and autophagy in human glioma U251 cells. METHODS:U251 cells were treated with CUDC-907 of different concentrations, and the cell viability was detected by MTT assay. The quantitative γ-H2AX foci were determined by laser scanning confocal microscopy. The cell cycle distribution of U251 cells was examined by flow cytometry. The protein expression was determined by Western blot analysis. RESULTS:CUDC-907 inhibited the cell viability and the phosphorylation of Akt and p70 ribosomal protein S6 kinase (p70s6K) in the U251 cells (P<0.05). In CUDC-907-treated cells, the number of γ-H2AX foci and protein expression of γ-H2AX were increased significantly (P<0.05). CUDC-907 also induced cell arrest in the G₂/M phase by up-regulating the expression of p21, and inhibiting the protein level of cyclin B1 and the phosphorylation of cell division cycle protein 2 (Cdc2). In addition, CUDC-907 triggered cell autophagy, and inhibition of autophagy increased CUDC-907-induced DNA damage of U251 cells. CONCLUSION:CUDC-907 significantly inhibits PI3K/Akt signaling pathway, induces DNA damage and arrests cell cycle in G₂/M phase. Blockage of autophagy promotes CUDC-907-induced DNA damage of U251 cells.     

核桃叶片基因组DNA的4种提取方法比较

以核桃叶片为材料,比较了高盐低pH法、SDS法、改良CTAB法和适合酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法提取基因组DNA的效果;通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、RAPD、ISSR等方法进行PCR扩增和用EcoRI、PstI内切酶酶切对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的产量和质量.结果表明,4种提取方法从叶片中得到的DNA产量和质量有所不同,其中酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法产量最高,纯度适中.4种方法提取的DNA对以后的PCR和酶切均没有影响.     

"自杀性"DNA疫苗研究进展

DNA疫苗作为第三代全新的疫苗,具有传统疫苗和其他基因工程苗不可比拟的优点.但由于其安全性方面存在着一些尚待解决的问题,使得实际应用受到限制."自杀性"DNA疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗.由于其制备原理和过程与常规DNA疫苗相类似,所以它具备常规DNA疫苗在制作、运输储存以及免疫等各方面的优点.同时由于它以甲病毒复制子为基础能诱导转染细胞自主凋亡,故比常规DNA疫苗更为安全有效.文章针对"自杀性"DNA疫苗载体的构建、作用机理、优点以及国内外研究情况作一介绍.     

一种土壤微生物总DNA的高效提取方法

获得高浓度、大片段、多样性程度高的土壤微生物总DNA 是研究土壤微生物群落结构的分子生态学基础。本文采用间接法(菌体细胞回收法)提取红壤地区两种土壤类型的土壤微生物总DNA,定量计算其回收率,并与直接法(细胞原位裂解法)比较了提取效率和纯度。结果表明:红壤地区2种土壤每克干土的总DNA提取量,间接法约为0.34和0.53礸/g干土,直接法约为13.62和24.32礸/g干土;间接法的提取效率低于直接法,但所得DNA片段较大,且Sau 3AⅠ 酶切和16 S rDNA通用引物PCR扩增结果显示,间接法比直接法更能有效地去除土壤中的某些抑制剂,所得总DNA的纯度更高,有利于后续操作。