大豆DNA提取基本原理的探讨

大豆 DNA提取是进行大豆分子生物学研究的基础。大量、高质量的 DNA提取一直是大豆科学研究者探讨的问题。根据实验经验和查阅有关文献总结了大豆 DNA提取各个步骤的基本原理     

柰基因组DNA的提取与纯化

以榇嫩芽为材料．对Dellaporta等用CTAB制备植物基因组DNA的方法进行改良，结果表明，加入质量分数ω=10％PVPP与材料充分研磨，将提取缓冲液的β-巯基乙醇体积分数降低为1％，能有效地去除材料中的多酚类物质；用氯仿／异戊醇(24：1)抽提裂解液2次所获得的上相．加入1／10体积的65℃的NaCl／CTAB溶液混匀，再用氯仿／异戊醇(24：1)连续抽提2次，并在DNA粗提液中加入适量高浓度NaCl和无水乙醇沉淀DNA，可以有效地去除多糖的干扰．获得比较纯净的DNA样品；PCR特异性扩增的结果表明，以改良法的DNA为模板可获得PPO基因保守区约600～800bp特异条带．且扩增条带较亮、无引物二聚体出现。     

砀山酥梨基因组DNA提取和RAPD条件优选

分别以砀山酥梨不同品系的成熟叶片、幼叶和芽为材料,采用SDS法提取基因组DNA,比较了不同材料的提取效果,并以此为模板进行RAPD反应,优化了RAPD反应条件。结果表明:用幼叶和芽均能提取高质量的基因组DNA,可直接用于RAPD分析,而用成熟叶片虽能提取到基因组DNA,但不能直接用于RAPD分析;优化的RAPD反应体系为:反应体积50μL,包含80ng左右模板DNA、5μL市售10×PCRBuffer、2.0mmol/LMgCl2、120μmol/LdNTPs、3U的Taq酶、0.5μmol/L随机引物;热循环程序为94℃预变性5min,使模板DNA充分变性,然后进入下列温度循环,94℃变性30s,36℃退火45s,72℃延伸90s,循环数40,最后72℃延伸7min。     

应用浸种法导入外源DNA转化烤烟遗传性状变异D_2代研究(Ⅰ)

提取抗赤星病烤烟 CV 87的总 DNA,采用浸种法导入感赤星病烤烟 NC89。 D_1 代筛选出的优良变异株收种并种植后得到 D_2代 ,对其活体接种赤星病菌 ,检测其抗病性 ,并于接菌前后测定叶片过氧化物酶活性。对其田间生长性状调查 ,对其成熟期烟叶总糖、蛋白质及烟碱分析。结果表明 ,浸种法直接导入外源 DNA ,在变异株 D_2代仍可有效转移株高、株型、叶型、叶面积及抗病性等性状 ,并获得较高的转化率 ,D_2代为 8.10 %。高抗赤星病 ,过氧化物酶活性高 ,总糖、蛋白质及烟碱含量基本保持了受体原有的优良品质 ,其变异株 D_2代有 C_10,A_9,B_6,D_3,A_13。     

枝角类RAPD条件优化和遗传多样性分析

以蒙古裸腹(MoinamongolicaDaday)和多刺裸腹(M.macrocopaStraus)为材料,对枝角类RAPD扩增条件进行了摸索和优化,结果表明,枝角类PCR扩增反应的最佳体系为:在25μL体积中,模板DNA25ng/μL,dNTPs0.1mmol/L,TaqDNA聚合酶1U,引物0.1μmol/L,Mg2+1.5mmol/L,10×PCR缓冲液2.5μL。按照优化的RAPD条件进行实验,重现性良好。2种裸腹在盐胁迫条件下的种群遗传多样性分析表明,同种裸腹不同生存盐度之间的种群遗传相似度较高,分别为0.9134和0.9038;而多刺裸腹和蒙古裸腹两个种间的遗传相似度相对较低,约为0.5～0.6。     

海带孢子体DNA随机扩增反应条件优化

从海带孢子体的酶解单细胞中提取的基因DNA,可用于随机扩增多态DNA（RAPD）的重复性研究。通过对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应体系为：0.2μmol/L引物,1.5mmol/LMg^2 ,100μmol/L dNTP,1.0U Taq DNA聚合酶,30ng模板DNA,优化反应程序为：94℃变性2min,接着45个循环包括94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延伸2min,最后72℃延伸10min。在此优化条件下得到的RAPD图谱的较好的特异性和重复性,为海带遗传多样性,种质鉴定,分子标记及辅助育种等研究提供了有用的手段。     

产蛋下降综合症H_（91）病毒基因组DNA的酶切分析

从发病鸡群中分离的产蛋下降综合症病毒（ＥＤＳ＿（－７６））Ｈ＿（９１）株接种鹅胚收获的尿囊液，用氯化铯密度梯度离心等方法纯化了ＥＤＳ病毒。电镜下观察到病毒无囊膜，大小为７０～８５ｎｍ。从纯化的病毒悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现一条分子量为３４ｋｂ、背景清晰的核酸带。用６种限制性内切酶对其基因组ＤＮＡ进行了酶切分析，各种酶消化分别产生４，４，９，９，１１和３条片段。将此结果与ＥＤＳ标准株ＡＶ＿（－１２７）株基因组ＤＮＡ由相同的内切酶消化的结果进行比较发现，由ＨｉｎｄⅢ和ＳｍａⅠ消化２个病毒基因组ＤＮＡ产生的片段数及大小有些差异。     

中国奠基群奥利亚罗非鱼遗传多态性的DNA指纹图谱

运用３３．６和３３．１５两种人源小卫星探针对中国奠基群奥利亚罗非鱼群体进行遗传多态性的ＤＮＡ指纹图谱研究。结果表明,在奥利亚罗非鱼群体中两种探针都能产生个体特异性的ＤＮＡ指纹图谱;两种探针平均检测出６２．５条条带,其中多态性条带占５８．５％,个体平均条带数为７．８１３;奥利亚罗非鱼种群内相似系数为０．７４０,遗传变异系数为０．２６０,证明奥利亚罗非鱼群体的遗传纯度极高,遗传多态性很低,但仍存在一定     

瓯江彩鲤线粒体DNA的限制性内切酶分析

用 13种限制性内切酶对瓯江彩鲤的线粒体DNA(mtDNA)进行RFLP分析 ,结果表明 :(1)共产生 18种限制性态型 ,其中 5种酶产生限制性片段长度多态性 (RFLPs) ,归结为 5种基因单倍型。 (2 )瓯江彩鲤mtDNA大小为 16 .6 0± 0 .15kb ,单倍型间的基因多样性指数和群体核苷酸多样性指数分别为 0 .75 17、0 .0 2 86 ,遗传多样性较丰富     

生物工程应用于作物育种的试验研究 第2报 外源DNA处理蚕豆的细胞学和同工酶的若干效应

以外源DNA处理蚕豆萌动种子,观察根尖,芽尖分裂细胞的染色体畸变,分析根芽的过氧化物酶同工酶(POD)和脂酯同工酶(EST).结果表明。DNA 处理能引起落后断片、染色体桥等染色体畸变,畸变率的多少与 DNA 的浓度无关。DNA 处理也使过氧化物酶同工酶带数及酶活性有增加的趋势,脂酶同工酶的活性却受到抑制。