AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢中的转录差异及DNA甲基化程度分析

试验旨在检测5-羟色胺-N-乙酰基转移酶（AANAT）基因在绵羊休情季节和繁殖季节（卵泡期和黄体期）卵巢组织中的转录差异,并分析转录差异是否由DNA甲基化修饰程度改变所导致。试验采用自然环境条件和饲养管理一致,且体重差异在0.5 kg范围内的空怀母滩羊作为试验动物,采集其休情期、卵泡期和黄体期（每个时期3只）的卵巢组织,采用SYBR染料法进行实时荧光定量PCR检测AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢组织中的转录水平。随后针对转录水平有差异的两个时期（休情期和卵泡期）的样本,利用MethPrimer 2.0在线软件预测AANAT基因启动子区和第一外显子区的CpG岛;用重亚硫酸盐测序法（BSP法）检测AANAT基因启动子区及第一外显子区的甲基化程度。试验结果显示,滩羊休情期卵巢组织中AANAT基因转录水平显著低于卵泡期的AANAT基因转录水平（P<0.05）,休情期与黄体期滩羊卵巢组织中AANAT基因的转录水平差异不显著（P>0.05）。滩羊卵巢组织中AANAT基因启动子区上存在着一个长度为173 bp的CpG岛,第一外显子区存在着一个长度为118 bp的CG岛。然而,两个甲基化岛区内的单个CpG位点甲基化程度在滩羊休情期和卵泡期之间均不存在显著差异,暗示AANAT基因的表达受甲基化修饰外的因素调控。本研究结果可为进一步探讨AANAT基因在季节性发情和卵泡成熟中的功能提供参考资料。     

基因芯片法鉴别饲料中猪、牛、鸡和鸭等动物源性成分分析

研究了基因芯片技术在动物源性成分检测中的应用,在研究过程中选择mtDNA 18S rRNA为目标基因,在通用引物扩增区间设计了质控探针、特异性探针。最终验证了基因芯片检测技术在动物源性成分检测中的应用效果。本次研究证实了基因芯片检测技术在特异性、灵敏度等方面可以达到较高检测水平,该方法成本较低,灵敏度和准确性较高,可用于高通量检测饲料中是否含有猪、牛、鸡和鸭等4种动物源性成分。     

鸡球虫DNA疫苗在生产推广过程中的安全性评价

鸡球虫病是鸡常见的一种急性流行性原虫病。以消瘦、贫血、血痢、生长发育受阻为特征;病原为艾美耳属的7种球虫,其中危害最大的有两种：柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫,前者寄生于盲肠中,后者寄生于小肠粘膜中,临床上往往表现为多种球虫混合感染。本病以湿热多雨的夏季多发,主要发生于3个月以内的幼鸡,其中以2～7周龄鸡最易感,10日龄以内雏鸡少发,成年鸡感染则不表现症状;1月龄左右鸡多患盲肠球虫,2月龄以上鸡多患小肠球虫。一旦发病,重则引起大面积的死亡,轻则导致生长发育受阴,影响其正常生产性能。目前生产实践中多采用在饲料中添加抗球虫药物预防和治疗,由于药物的长期使用,逐渐产生了抗药性,导致防控效果越来越差。如何找到一种更好的预防办法是当务之急,使用疫苗防疫可以起到事半功倍的效果。     

家蚕核型多角体病毒(BmNPV)lef-11基因在病毒感染宿主细胞中的表达特征

杆状病毒晚期表达因子(late expression factor,LEF)是参与病毒基因组DNA复制和病毒基因转录调控的一个重要家族,该家族成员LEF-11为13 k D的小分子蛋白质。通过比对目前已经测序的63种杆状病毒基因组序列,发现LEF-11的编码基因lef-11在除宿主为双翅目昆虫的Cuni NPV外的所有杆状病毒基因组中都存在,暗示lef-11基因可能在包括家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)在内的杆状病毒复制过程中行使重要功能。通过RT-PCR检测和Western blotting分析lef-11基因及其编码蛋白质在Bm NPV侵染的家蚕卵巢培养细胞Bm N中的转录与表达时相,其转录本从侵染后6h开始持续表达,蛋白质从侵染后12 h开始持续表达。当利用DNA聚合酶特异抑制剂阿非迪霉素(aphidicolin)阻断Bm NPV病毒基因组DNA复制之后检测LEF-11的表达受到抑制,暗示LEF-11的表达起始于病毒DNA复制之后。以上结果表明:BmNPV lef-11基因在杆状病毒中非常保守,是一个晚期表达基因,可能不直接参与病毒的起始复制,而是参与病毒的大规模复制过程。     

油菜蜂花粉总RNA(含小RNA)大量提取及RT-qPCR检测

大量提取含小RNA的油菜蜂花粉总RNA,为研究油菜蜂花粉所含外源性miRNA在动物和人体内发挥的生理和病理功能研究奠定基础。改良苯酚-氯仿法大量提取油菜蜂花粉总RNA,Nanodrop 2000检测浓度和质量,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性;所得的总RNA经过RT-qPCR扩增。提取的总RNA260/280为2.11,产量高于1‰。电泳条带清晰,完整性良好。可扩增出油菜基因组中的miR-159和miR-166a,且可进行丰度差异比较。本方法能大量提取包括油菜蜂花粉在内的植物RNA(含小RNA),为中草药和其他植物来源天然产物中功能性miRNA在动物和人体内发挥的生物学功能研究奠定基础。     

北京地区犬猫弓形虫和新孢子虫感染的检测与分析

了解犬、猫弓形虫和新孢子虫感染情况,应用SPA-ELISA和ICT对2008-2011年间收集的北京地区137份流浪猫、186份宠物猫和763份宠物犬及其他部分省市的57份乡村犬进行血清抗体检测;同时,提取猫及部分犬的血样DNA,分别扩增弓形虫和新孢子虫特异性基因片段。结果显示,流浪猫和宠物猫弓形虫抗体阳性率分别为24.1%(33/137)和13.4%(25/186),宠物犬和乡村犬分别为14.5%(111/763)和24.6%(14/57),不同来源的犬或猫抗体阳性率差异显著(P0.05);流浪猫和宠物猫的新孢子虫抗体阳性率分别为7.30%(10/137)和6.45%(12/186),宠物犬和乡村犬分别为6.06%(8/132)和10.5%(6/57),差异均不显著(P0.05)。宠物猫和流浪猫基因检测的阳性率分别为3.65%和2.15%,差异不显著(χ2=0.22,P0.05);132份宠物犬和29份乡村犬基因检测阳性率分别为18.2%和6.90%,差异显著(P0.05)。血液中虫体特异性基因检出率低于血清抗体检出率。宠物犬和宠物猫弓形虫和新孢子虫感染随着年龄增加呈上升趋势,但各年龄段差异不显著(P0.05)。     

不同保存方法对石榴成熟叶片基因组DNA提取效果的影响

以石榴(Punica granatum L.)成熟叶片为试材,设置6种保存方法,采用改良的CTAB法提取石榴基因组DNA,研究了不同保存方法对石榴叶片基因组DNA提取效果的影响。结果表明:采用改良的CTAB法,新鲜叶片、-70℃保存6个月、4℃保存5d的样品均能得到浓度较高的DNA;-20℃保存7d和14d的样品均能得到完整DNA,但浓度略低;硅胶干燥常温保存5个月的样品用同样的方法未能提取到DNA,在对提取方法进行优化后,可提取纯度较高的基因组DNA,但其浓度仅约为鲜叶的50%。上述方法保存的样品提取的基因组DNA均能得到清晰、稳定的SRAP-PCR扩增图谱。     

基于叶绿体ndhA基因内含子序列的DNA条形码在秋海棠属物种鉴定中的应用

以18种秋海棠属植物为试材,基于叶绿体ndhA基因内含子片段,利用Codon Code Aligner软件拼接序列后,通过MEGA软件进行比对并计算19个秋海棠属植物种间及种内遗传距离,最后利用邻接法构建分子系统树,研究了该片段作为DNA条形码对秋海棠属植物进行物种鉴定的可行性。结果表明:秋海棠属19个种类共59个个体的ndhA基因内含子序列长度为1 182bp,在所考察的候选秋海棠属植物中具有最大的种间变异和较小的种内变异,且二者存在极显著差异。在系统树中,秋海棠属植物每一物种能够分别形成各自独立的分支,表现出良好单系性。基于ndhA基因内含子的DNA条形码在识别秋海棠属植物物种方面和传统形态学基本一致。该研究表明,以ndhA基因内含子作为秋海棠属植物DNA条形码进行物种鉴定具有一定的可行性。     

葡萄皮渣原花青素酶法提取工艺优化及抗氧化性研究

以葡萄皮渣为试材,在单因素试验的基础上,采用L9(43)正交实验对葡萄皮渣原花青素的提取工艺进行了优化,并对纯化后的葡萄皮渣原花青素的抗氧化性进行了研究。结果表明:葡萄皮渣原花青素提取的最佳工艺参数为纤维素酶添加量0.4%,果胶酶添加量0.8%,酶解时间90min,酶解温度70℃。在此条件下,葡萄皮渣原花青素的得率为11.08mg·g-1。体外抗氧化试验结果表明,紫甘蓝原花青素表现出明显的抗氧化能力,对DPPH自由基和羟基自由基具有较好的清除能力,抗氧化能力优于维生素C。     

黑豆色素的研究进展

本文综述了近年来黑豆色素的研究进展.提出了综合开发利用的前景.