种公猪精子活力与mtDNA拷贝数的关联

为探讨猪精子线粒体DNA拷贝数和精子活力高低关系,选取长白猪、大约克猪和杜洛克猪新鲜精液,采用上游法分离高、低活力精子,对其进行活力检测,后提取上、下游精子DNA,采用实时荧光定量PCR技术测定精子线粒体DNA(mtDNA)拷贝数。结果表明,上、下游精子活力差异显著(P0.05),活力高的精子mtDNA拷贝数显著低于活力低的mtDNA拷贝数(P0.05),长白猪的mtDNA拷贝数与杜洛克猪、大约克猪差异显著(P0.05)。由此可见,mtDNA拷贝数可能影响猪精子活力,不同品种猪mtDNA拷贝数差异显著。     

保存方法对牧草DNA提取效果的影响

为从野外采集的禾本科牧草样品中获得优质DNA,在有限的试验条件下找到最合适的样品保存方法。本研究在野外试验站采集了8种禾本科牧草,分别采用变色硅胶、-20℃、4℃、自然风干和45℃烘干等5种方法进行保存,保存一个月后进行DNA的提取。通过琼脂糖凝胶电泳、ISSR-PCR以及DNA的浓度和纯度对比,对几种保存方法下保存的牧草样品中所提取DNA的效果和质量进行鉴别。此外,为了解样品中多糖和多酚含量对DNA提取效果的影响,本研究还对采集样品多糖和多酚含量与DNA浓度和纯度进行了相关性分析。结果显示变色硅胶的保存效果最佳,烘干的保存效果最差,其他3种保存方法对不同植物的保存效果不能确定。多糖和多酚含量与DNA的提取效果、提取质量无明显关系,与DNA的浓度和纯度也无显著相关性,二者不是影响本研究DNA提取效果的主要因素,本研究中DNA提取效果的差异性是由于保存方法的不同造成的。在野外试验采集禾本科牧草样品时,如需要获得优质的DNA进行深入的试验,用变色硅胶保存样品,是一种便捷、效果优越的保存方法。     

三七素提取工艺及检测方法的优化

本研究以三七（Panax notoginseng）植株及其产品和近缘种为研究对象,采用L₉(3 ⁴)正交试验对三七素的提取工艺进行了优化,然后利用HPLC法检测三七素含量,并对各样品中的三七素含量进行了比较分析。结果表明：优化后的三七素提取条件为超纯水、料液比1∶20（g/mL）,提取1次（10 min）;三七素在三七花蕾中的含量最高,其次是根状茎和主根,但是三七茎叶中也有较高含量的三七素,说明三七花蕾和茎叶均可作为三七素的提取原料;在三七产品中三七花的三七素含量最高,达到3.33%,其次是剪口（根状茎）、筋条（侧根）和须根;但三七素的含量与三七个头大小（头数）并无明显的相关性;在三七近缘种姜状三七（P. zingiberensis）和野三七（P. vienamensis var. fuscidiscus）主根、珠子参（P. japonicus var. major）根状茎中的三七素含量显著低于三七主根三七素含量,也显著低于三七其他部位的三七素含量,说明三七是最佳的三七素来源植物。三七素的含量主要受到物种和部位的影响,与产品规格无关。本文所建立的三七素提取方法和HPLC检测方法,能够快速简便、稳定可靠测定样品中三七素含量;并可为三七素相关标准的建立奠定基础,为三七的综合利用开发提供依据。     

响应面法优化湖北海棠果实多酚提取工艺

以湖北海棠[Malus hupehensis(Pamp.)Rehd]果实为原料,采取醇提法提取多酚,在单因素试验的基础上,对提取工艺进行响应面优化,响应面模型R2=0.990 4,P0.001,模型对试验实际情况拟合较好,显著性高。结果表明,优化后的提取工艺参数为提取溶剂乙醇浓度61%,提取时间3.0 h,液料比21∶1,提取温度85℃,并在此工艺参数条件下,湖北海棠果实提取液中多酚含量平均值为11.89 mg/g。     

我国玉米品种标准DNA指纹库构建研究及应用进展

介绍了我国玉米品种标准DNA指纹库构建的进展及应用情况。我国玉米品种标准DNA指纹库规模已达到22 089份,经与国内外作物品种DNA指纹库比较,是全球品种数量和建库规模最大的DNA指纹库,并且在区域试验、品种权保护及种子质量管理等方面都得到了广泛应用。至今已开展玉米品种真实性鉴定等达40 000多份次。同时,对DNA指纹库构建未来发展进行预测,建议继续发挥SSR标记的作用、加快推进SNP标记的研发、发掘In Del标记的应用潜力并持续关注测序技术的发展。     

虫草参多糖提取工艺研究

研究探讨虫草参多糖的提取工艺,通过在单因素实验的基础上进行正交实验研究,实验结果表明:各因素对虫草参多糖提取率的影响从大到小依次为B>A>C,提取温度>料液比>提取时间.虫草参多糖提取工艺的最优组合条件为A2B2C3,即料液比1:30,提取温度60℃,提取时间4 h,在此条件下虫草参多糖提取率54.45%.     

大樱桃基因组DNA提取及RAPD分析

以大樱桃8个品种为研究对象,利用改进CTAB法进行DNA提取,使用10碱基随机引物,通过PCR进行RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)扩增,建立了鉴定大樱桃品种的分子鉴定图谱。结果表明:较高质量的DNA和理想的RAPD反应体系能够保证RAPD技术具有较好的稳定性;筛选出的不同引物的RAPD扩增谱带组合可用于大樱桃栽培品种的分子鉴定,具有在生产应用的潜在性。     

用于构建双价禽流感DNA疫苗的双目的基因表达质粒的构建及鉴定

为探索构建禽流感双价或多价DNA疫苗的可行性,本研究以本实验室前期研制的禽流感DNA疫苗p CAGGopti HA5为基础[其中含有禽流感病毒(AIV)A/Goose/Guang Dong/1/96(H5N1)的HA基因],将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因作为第二个目的基因,利用双启动子启动、内部核糖体进入位点(IRES)介导以及通过蛋白Linker编码序列连接融合表达两个目的基因的形式,构建了双启动子重组表达质粒pH5-eGFP、IRES介导的重组表达质粒pHIE以及融合表达重组质粒pH6E。并采用脂质体介导将这3种重组质粒分别转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验和western blot方法检测HA和eGFP这两种目的蛋白的瞬时表达情况。结果显示,这3种重组质粒均能够正确表达AIV的HA蛋白和eGFP。其中pH5-eGFP表达出两个独立的目的蛋白,而且互相不影响各自的表达和细胞定位;pH6E则以融合形式表达两种目的蛋白,由于HA蛋白具有膜定位信号,所以融合蛋白主要定位于细胞膜上。本研究结果表明,双启动子表达质粒和双目的蛋白融合表达质粒适合用于构建AIV以及其他相关病原的双价DNA疫苗。     

鼠曲草花中黄酮的提取及抗氧化活性研究

鼠曲草是一年生草本植物,在我国均有分布,民间清明前后采食。本文检测了鼠曲草茎叶及花中总黄酮含量,对比了提取方法。总黄酮用醋酸铅沉淀、柱层析纯化。结果表明,鼠曲草茎叶及花中的黄酮含量分别为7.37、38.14 mg/g;最佳提取条件为乙醇浓度40%、料液比1∶40,温度70℃,时间2 h;黄酮(A)的含量最多,还原能力和清除DPPH自由基能力高于芦丁,有明显的抗猪油氧化能力,但抗氧化持续性不及BHT。黄酮(B)的抗氧化活性与芦丁相当。