烟草蚀纹病毒弱株系的选育及免疫效果研究

１９９１～１９９５年利用钴６０照射和亚硝酸处理进行了烟草蚀纹病毒（ＴＥＶ）弱株系的选择及防病效果试验。结果表明,钴６０照射病毒溶液能产生弱株突变体的适宜剂量是１．２９,２．５８Ｃ／ｋｇ,亚硝酸处理的适宜浓度和时间是１ｍｏｌ·Ｌ－１,３０～５０ｍｉｎ．经选择效果明显的弱株有Ｒ４和Ｈ３８,其室内交互保护试验的效果最高分别是８５．８％和４７．４％;田间防病效果分别为８１．６％和４０．３％．两个弱株免疫后接种强株,其烟株体内病毒含量均低于强株对照。试验还表明,亚硝酸处理较钴６０能产生较多的弱株突变体。     

H5亚型AIV的HA1基因与鸡IL-18成熟蛋白基因的杆状病毒共表达载体的构建

参考GenBank上发表的H5亚型禽流感(AIV)血凝素(HA)基因序列及鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)的cDNA基因序列,分别设计了HA1和mChIL-18的cDNA的2对引物。然后以pMD18-T-HA质粒和pGEX-mChIL-18质粒为模板,扩增出了H5亚型AIV的HA1基因和mChIL-18的cDNA片段。再以杆状病毒pFastBacTM dual为载体,将H5亚型AIV HA中的HA1基因和mChIL-18基因分别插入到双表达载体pFastBacTM dual的p10启动子(PP10)和多角体蛋白启动子(PPH)的下游,构建携带HA1基因和mChIL-18基因的重组pFastBacTM dualH-A1-mChIL-18真核表达质粒。最后将构建的真核表达质粒转座入大肠杆菌DH10Bac,为下一步进行昆虫细胞的转染奠定了基础。这个重组载体的构建为考察mChIL-18作为免疫增强剂的作用及下一步AIV疫苗的研究奠定了坚实的基础。     

烟草蚀纹病毒对玉米矮花叶病防治效果的研究

为了研究烟草蚀纹病毒(Tobaccoetch virus,TEV)对玉米矮花叶病(病原为甘蔗花叶病毒(SCMV))的预防效果,在防虫网室内,采用人工摩擦接种病毒的方法进行生物学试验,并用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术对预防效果进行了检测。结果表明,经过TEV保护接种后再接种SCMV的植株长势明显优于只接种SCMV的植株,其叶长、叶宽和株高的差异均达到显著水平(P<0.05);在只接种SCMV全部发病10 d后,有13.8%经保护接种的植株叶片开始轻微褪绿,极大地延迟了花叶症状的发生;攻击接种50 d后,经TEV保护接种后再接种SCMV的玉米植株,体内SCMV CP基因表达量为只接种SCMV玉米的0.113 4倍。说明,SCMV能够有效地减轻玉米矮花叶病的发生及危害。     

不同脱水程序在乙型病毒性肝炎患者肝穿刺组织中应用的比较

目的 探讨乙型病毒性肝炎患者肝穿刺组织最合适的快速石蜡脱水程序.方法 随机选取乙型病毒性肝炎肝穿刺标本50例,每一例穿刺标本随机取三份新鲜组织,取材固定后,分为三组,A组为快速石蜡处理3 min组、B组为快速石蜡处理5 min组、C组为快速石蜡处理10 min组.快速石蜡切片应用超声波技术结合水浴加温及应用BT生物组织透明剂代替二甲苯作为透明剂.三组所做切片同时进行HE染色.结果 快速石蜡处理3 min组所制的片优良率为0%,快速石蜡处理5 min组、10 min组所制的片优良率为100%,χ2=150,P〈0.001,三组的优良率差异有统计学意义.结论 应用JYCL-2 超声组织处理仪＋BT 生物组织透明剂处理肝组织5-10 min就能满足肝组织快速临床病理诊断的需要,缩短了发报告的时间,同时也符合实验室环保的要求.     

仙台病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

以纯化pQE31表达的融合蛋白仙台病毒EP（S）为诊断抗原、融合蛋白FP（S）免疫鼠血清为阳性抗体,建立了小鼠仙台病毒抗体检测的间接ELJSA诊断方法。该抗原FP（S）不与其他常见的小鼠病毒（小鼠肝炎病毒、鼠痘病毒、小鼠肺炎病毒和呼肠孤病毒Ⅲ型）的阳性缸清发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于7％,与中国药品生物制品检定所的试剂盒符合率为98％。本研究建立的检测仙台病毒抗体的间接ELISA诊断方法,有很好的特异性和敏感性,为仙台病毒的抗体的检测提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

干扰素刺激基因对羊口疮病毒在OFTu细胞中增殖的抑制效应

羊口疮病毒（ORFV）是重要的人兽共患病病原,不仅严重危害养羊业,而且威胁人类健康。干扰素刺激基因（stimulator of interferon genes,STING）作为细胞的DNA感受器,在机体天然免疫中起重要作用。为探索STING在ORFV感染中的作用及其对病毒复制的影响,本研究构建了ORFV感染羊胚胎鼻甲细胞（OFTu）的模型,分析了ORFV感染细胞后对STING及其相关基因的动态表达,探索了STING基因在干扰表达和过表达状态下对ORFV在细胞上增殖的影响。结果表明,ORFV感染OFTu细胞后,STING、cGAS、TBK1、IRF3、IRF7、IL-6、IFN-β、IL-1β和TNF-α的转录明显升高。OFTu细胞过表达STING可导致RIG-1、DDX41、IFI16、IRF3、IRF7、IL-6、TNF-α、IFN-α和IFN-β等基因转录上调。OFTu细胞在STING过表达状态下感染ORFV可介导TBK-1、IRF3、IFN-β和TNF-α的转录升高,抑制ORFV的复制;在STING表达干扰的状态下,ORFV感染OFTu细胞降低了TBK-1、IRF3、IFN-β和TNF-α的转录,增加了ORFV的复制。这表明STING蛋白能够增强抗病毒细胞因子的表达,抑制ORFV在OFTu细胞中的增殖,研究结果为深入理解STING在羊口疮病毒感染和复制中的作用提供了科学的理论依据,也为深入探索ORFV感染和致病的分子机制提供了基础数据。     

Effects of Latent Infection of Stock Plants and Abundance of Thrips on the Occurrence of <Emphasis Type="Italic">Tomato spotted wilt virus </Emphasis>in Chrysanthemum Fields

DAS-ELISA proved to be reliable enough to detect a latent infection by Tomato spotted wilt virus (TSWV) in asymptomatic stock plants of chrysanthemum. A high density of Frankliniella occidentalis, the predominant vector, in the presence of latently infected stock plants resulted in a high incidence of disease in the chrysanthemum production field. The incidence of disease was low when the vector thrips were not abundant in spite of the presence of latently infected stock plants. These results suggest that an infestation of the vector thrips causes severe secondary spread of TSWV originating from latently infected stock plants in chrysanthemum production fields. Received 27 July 2001/ Accepted in revised form 27 November 2001     

环洞庭湖区活禽批发市场和水禽场H6亚型禽流感监测

为了解环洞庭湖区活禽批发市场和水禽场H6亚型禽流感病毒的分布和流行情况,分别于2009—2011年对环洞庭湖地区活禽批发市场、2011—2013年对水禽场的H6亚型禽流感进行了系统监测。对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的尿囊液,对HA测定有滴度的再进行血凝抑制试验(HI),并与RT–PCT方法相结合鉴定病毒的亚型。检测结果显示:在环洞庭湖区的5个活禽批发市场上都分离到H6亚型禽流感,并且在鸡、鸭、鹅拭子中都分离到该病毒,总的分离率为6.49%;水禽场H6亚型禽流感病毒群体阳性率达3.6%,拭子的H6亚型病毒分离率为0.29%,活禽批发市场鸭拭子H6亚型禽流感病毒分离率为9.58%,表明市场环节水禽H6亚型禽流感的隐性带毒率比养殖环节高,在一定程度上说明禽流感在活禽批发市场存在水平传播的风险。     

Isolation and characterization of an Indian ORF virus from goats

Isolation and characterization of an orf virus has been described here. The virus was isolated from an outbreak of 'scabby mouth' in goats in Northern India. Viral morphology from the scab biopsy revealed typical ovoid-shaped particles characteristic of Parapoxvirus. Virus was isolated from sonicated scab suspension and characterized by restriction enzyme (RE) analysis and sequencing of full-length GM-CSF- and interleukin-2 inhibitory factor (GIF) gene. RE pattern of the virus did not show close resemblance to most of the orf viruses published earlier. However, it showed high sequence identity and closer phylogenetic relationship with previously published ORFV-SA00 strain, as evident from the nucleotide and deduced amino acid sequence of GIF gene.     

独占春种子非共生萌发和低温离体保存

独占春(Cymbidium eburneum Lindley)成熟种子无菌播种诱导原球茎,并以原球茎进行低温离体保存。结果表明:在培养基花宝1号3g/L LH(水解乳蛋白)1g/L BA(细胞分裂素)0.5 mg/L NAA(生长素)0.1 mg/L CM (椰子汁)100 ml/L AC 2 g/L 蔗糖25 g/L中种子萌发出原球茎;原球茎在培养基1/2 MS LH 0.5 g/L BA 0.5 mg/L NAA 0.1mg/L AC 2g/L 蔗糖20g/L中于6℃黑暗条件下连续保存了20个月,成活率达85%,并能在恢复培养基MS BA 3～5 mg/L NAA 0.2 mg/L AC 1g/L CM 100 ml/L 蔗糖25 g/L中进行恢复增殖培养。