高CO2浓度对春兰叶片叶绿素·叶绿素蛋白质复合物含量的影响

[目的]为了研究春兰适应环境变化的方法。[方法]对自然状态（正常组,CO2浓度（370±50）μl/L）和高CO2浓度（试验组,CO2浓度（700±50）μl/L）春兰叶片的叶绿素及叶绿素蛋白质复合物含量进行研究。[结果]与正常组相比,试验组春兰叶片的叶绿素含量增高,叶绿素a/b降低;叶绿素蛋白质复合物的含量增加,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得到6条叶绿素蛋白质复合物带和1条游离色素带,表明叶绿素蛋白质复合物种类未发生变化。从电泳结果可以看出,叶绿素蛋白质复合物聚合态如LHCⅡ3的量增多,单体态LHCⅡ1和LHCⅡ2的量减少。[结论]叶绿素、叶绿素蛋白质复合物含量的变化是春兰对高CO2浓度的一种适应效应,有利于提高其在光合作用中光能的吸收、传递和转换的效率,并且支持高效的光合碳素同化作用。     

春兰根内生细菌分离培养方法的初步研究

探讨了春兰根表面灭菌的最佳条件,以及改良察氏琼脂、淀粉铵营养琼脂、YG、R2A、LB、金氏、TSA和根系分泌物8种培养基对春兰根内生细菌的分离效果。结果表明:春兰根的最佳表面灭菌条件为:75%乙醇浸泡3 min,3%次氯酸钠溶液处理2 min,75%乙醇浸泡30 s,最后用无菌水冲洗。不同培养基对内生细菌的分离存在一定差异,R2A培养基和根系分泌物培养基分离出的内生细菌数量较多,而YG培养基和R2A培养基分离出的内生细菌种类总数最多。此8种培养基对春兰根内生细菌的优势菌群的分离效果是相同的。研究结果可为选择合适的表面灭菌条件及培养基分离兰花内生细菌提供参考。     

春兰根状茎增殖的影响因素

以春兰（Cymbidium goeringii）继代的根状茎为材料,研究植物激素组合和活性炭用量对春兰根状茎增殖的影响。结果表明：1.0 mg/L的6-BA和0.2 mg/L的NAA的浓度组合有利于春兰根状茎的增殖;添加1.0-3.0 g/L的活性炭能显著促进春兰根状茎的增殖。     

秦岭野生春兰组织培养过程中的褐化控制研究

以秦岭野生春兰为材料,选花梗和花萼作为外植体,以1/2MS作为基本培养基,运用L9(34)正交实验研究处理对褐化的影响。结果表明:处理4是控制春兰外植体褐化的最佳的方法,即1/2MS+活性炭(AC)1 g/L+PVP 5 g/L+暗培养10 d。     

春兰炭疽病致病菌Colletotrichum boninense的鉴定及生物学特性分析

以湖南野生春兰(Cymbidium goeringii)引种驯化过程中发生的炭疽病病株为试验材料,分离、鉴定病原菌,分析营养因子和非营养因子对病原菌生长的影响。结果表明:春兰炭疽病病原菌为博宁炭疽菌(Colletotrichum boninense Moriwaki,SatoTsukiboshi);适合生长的培养基有PDA、PSA和CSA;能有效利用多种碳源,最适合的为葡萄糖,有利生长的有机氮为酵母膏和蛋白胨,无机氮为硝酸钾;光照与黑暗对菌丝生长的影响无显著性差异;适宜p H 5.0~8.0;在10~35℃均能生长,最适温度为25℃;处理20 min,菌丝和孢子的致死温度分别为48和50℃。     

广西乐业野生春兰表型遗传多样性及利用评价

为了解广西乐业野生春兰种质间的亲缘关系,提高其利用效率,对66份春兰种质资源的43个表型性状（13个数量性状和30个质量性状）进行多样性和相关性分析,对乐业县各来源的春兰资源进行聚类分析,并从表型性状主成分分析的基础上对其进行综合评价。结果表明：春兰种质表型多样性丰富。数量性状变异程度较高,变异系数（CV）为11.62%~41.56%,其中花梗长的CV值最高。质量性状变异系数为9.26%~55.7%,以开花习性、唇瓣主色和花瓣形状的CV值居高。说明花梗长、开花习性、唇瓣主色和瓣形都是春兰观赏性状的重点选育方向。相关性分析结果表明,花侧萼片宽（SSW）和花中萼片宽（SMW)、花侧萼片长（SSL）和花中萼片长（MSL）、花侧萼片形状（SSS）和花中萼片形状（MSS）、花瓣内侧主色（PIMC）和花萼片主色（SMC）之间呈显著正相关,相关系数分别为0.7951、0.7648、0.771、0.741;花侧萼片夹角（SSA）和侧萼片先端形状（SSPS）、唇瓣形状（LS）和中萼片先端形状（SSPS）、唇瓣色斑数量（LSN）和叶色（LC）之间则呈显著负相关,相关系数分别是-0.4557、-0.4316、-0.4181。数量性状和质量性状主成分分析分别提取5个和11个主成分,共10个因子,累计贡献率分别为78.193%和73.023%,可反映乐业春兰的总体形态表现;聚类分析结果显示,在欧氏距离为18.77处可将66份春兰种质划分为4组,其中第Ⅰ组只有一个55号品种,第Ⅱ组包含9个品种,主要以来源地相同为主,第Ⅲ组28份种质以红色花为主,第Ⅳ组28份种质,主要特征是花朵较大。研究筛选出19138-38、19138-40、18011、18007、19134-1共5份种质综合评价较高。该结果为了解广西野生春兰种质间亲缘关系及其评价与利用提供理论依据。     

寄生台湾春兰的短体线虫种类鉴定

厦门国际邮轮港口岸检疫部门在检验1批来自台湾的春兰（Cymbidium goeringii）花苗时,发现部分花苗根部腐烂。经分离检验和组织染色,从中发现1个形态特征一致的寄生线虫种群。该线虫经进一步形态学观察和测量,鉴定为最短尾短体线虫（Pratylenchus brachyurus）。此种线虫寄主范围广、危害大,是我国对外公布的检疫性有害生物。春兰是最短尾短体线虫新纪录寄主。     

春兰基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

以春兰为研究材料,对春兰基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化.结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量春兰基因组DNA.电泳检测表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足RAPD等分子标记分析的需要.同时对春兰RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合春兰RAPD分子标记的最佳反应体系,即20μl反应体系中含1UTaqDNA聚合酶,60μmol/L dNTPs,2.25mmol/L Mg2+,1.0μmol/L引物,1.5ng/μl模板DNA.     

植物生长调节物质及有机添加物对春兰根状茎增殖与分化的影响

以春兰‘宋梅’为试验材料,研究了植物生长调节物质及有机添加物对春兰根状茎的增殖与分化的影响,结果表明适合春兰根状茎增殖的培养基为:1/2MS+3~5 mg/L NAA+0.1 mg/L BA+10%椰子汁+30 g/L蔗糖+6.8 g/L琼脂;最适合根状茎芽分化的培养基为:1/2MS+0.5 mg/L NAA+3 mg/L BA+10%椰子汁+30 g/L蔗糖+6.8 g/L琼脂。     

建兰ISSR-PCR反应体系的建立和优化（摘要）（英文）

[目的]研究建兰[Cymbidium ensifolium（Linn.） Sw]总基因组DNA的提取方法,并对建兰ISSR-PCR反应体系进行优化,建立更为完善的反应体系。[方法]用改良的CTAB法提取叶片的基因组DNA,用1.0%琼脂糖电泳检测DNA质量;用分光光度计测定其纯度和浓度,DNA纯度以OD260/OD280的比值来估算,浓度估算法为：DNA浓度（ng/μl） =OD260×50×稀释倍数。计算DNA获得率（DNA量/所用叶片量×100%）。对建兰ISSR-PCR反应的4项影响因素（DNA模板、TaqDNA聚合酶、Mg2 ＋和dNTPs）逐个作5水平进行研究,以筛选最优的建兰ISSR-PCR反应体系。[结果]获得高质量的建兰基因组DNA,以及优化了的建兰ISSR-PCR反应体系,即25μl PCR反应体积中,2.5μl 10×PCR buffer,2.5 mmol/LMgCl2,240 ng模板DNA,160μmol/LdNTPs,1.25 UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物,双蒸水15.78μl。最佳扩增程序为：94℃预变性5min,然后进行40个循环：94℃变性30 s,50 ～60℃退火（退火温度随引物不同而定） 30 s,72℃延伸50 s,72℃延伸7 min。[结论]建立了建兰ISSR-PCR反应体系最适合的条件,为进一步利用ISSR分子标记技术进行建兰遗传多样性研究提供了基础。