猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

用PCV2 Cap蛋白单克隆抗体预包被酶标板,将杆状病毒表达系统表达的PCV2 Cap蛋白作为检测用抗原,利用捕获包被法建立了间接ELISA法用于猪圆环病毒2型抗体的检测.通过优化ELISA条件,研制试剂盒并应用于圆环病毒2型疫苗的免疫效果检验.利用研制的试剂盒与IFA、商品化进口和国产同类试剂盒对178份猪血清进行平行检测,总符合率分别为96.63％、97.75％和84.27％,与其他几种常见猪病毒抗体阳性血清无交叉反应.试剂盒批内、批间变异系数分别为2.35％ ～4.06％和4.87％ ～ 6.54％,2～8℃保存15个月稳定,适合于对不同来源猪圆环病毒2型疫苗人工免疫猪血清抗体进行检测.     

油菜内生生防菌BY-2在油菜体内的定殖与对油菜菌核病的防治作用

 从油菜植株体内分离出的内生细菌BY-2,经过生物学鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。用BY-2回接油菜,重新分离到具有BY-2相同形态特征和抑制病原真菌能力的内生菌株。油菜接种后的第10 d,体内的BY-2菌数达(2.24~9.02)×10³ cfu/g鲜植株,25 d仍然保持在(3.13~8.59)×10³ cfu/g鲜植株。BY-2与油菜核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.) de Bary]对峙培养可以形成直径为3.1 cm的抑菌圈;可使油菜核盘菌菌丝细胞浓缩变短,细胞壁破裂,原生质外溢,从而抑制真菌生长发育;同时还能抑制菌核的萌发,抑制率达60%~70%;在油菜离体叶片试验中,BY-2对菌核病的防治效果达100%。     

梨火疫细菌实时荧光PCR和诱捕PCR-ELISA检测方法的建立

根据梨火疫细菌中独特而保守存在的质粒pEA29，设计了1对引物和3条探针，建立了实时荧光PCR检测方法和诱捕PCR-ELISA检测方法。实时荧光PCR采用带荧光标记的核酸杂交探针，边扩增边检测，步骤简单，不需PCR后处理，可避免假阳性和交叉污染；诱捕PCR-ELISA检测方法只需简单处理的样品就能检测，减少了核酸不纯出现的漏检，由于增加了核酸杂交探针，可不需凝胶电泳EB染色检测，不会出现假阳性问题。     

氧气对低地鸡蛋胚胎死亡和孵化率的影响

通过模拟常压低氧和高海拔增氧孵化试验，研究了氧气浓度对低地良种鸡蛋胚胎死亡率和孵化率的影响。死亡胚胎的分布用2阶段增长模型分析。模拟2900m海拔常压低氧孵化增加了胚胎后期死亡率，使孵化率降低到接近2900m海拔实际孵化率水平；2900m海拔全期增氧孵化可以有效降低前期和后期胚胎死亡率，大大提高孵化率；阶段增氧孵化也能不同程度提高孵化率，改变胚胎死亡分布，其中效果最好的为前期增氧组。结果说明低氧是影响2900m海拔鸡蛋孵化的最主要因素。     

Effect of storage duration on egg quality,embryo mortality and hatchability in FUNAAB-ɑ chickens

Effect of extended storage on egg quality, embryo mortality and hatchability in FUNAAB-ɑ chickens was determined. Hatchable eggs (n = 288; weighing 53.2 ± 4.67 g) collected from a flock of FUNAAB-ɑ layer breeder hens aged 32 weeks were stored in egg tray with broad end up under 16 ± 1.5°C for either 0, 4, 8, 12, 16 or 20 d. Before incubation, eight eggs from each group were evaluated for internal and external quality traits. Remaining eggs were set in an incubator and transferred into hatcher on embryonic day 18. Data collected were subjected to one-way analysis of variance. Egg weight loss (EWL; p < .001), surface area (p < .001), yolk diameter (p < .001), inner and outer blastoderm diameters (p < .05) and dead in germ (DIG; p < .001) increased with storage duration while yolk height (p < .001), yolk index (p < .001), albumen weight (p < .05), albumen height (p < .05), albumen index (p < .01), Haugh's unit (HU; p < .05), fertility (p < .001), hatchability of set (HATCHS; p < .001) and fertile eggs (p < .05) decreased. Weight losses of 0, 1.2, 2.2, 3.4, 4.6 and 6.1% were recorded in egg stored for 0, 4, 8, 12, 16 and 20 days respectively. Eggs stored beyond 8 days exhibited higher DIG and lower HATCHS. Shell percentage in 4 days storage (11.4%) was lower (p < .05) than in 16 days storage (13.4%). Shell thickness was similar in eggs stored for 0 to 12 days, but 8 days storage (0.60 mm) had thinner (p < .01) shell than day 16 (0.71 mm) and day 20 (0.73 mm) storage. Internal quality unit (IQU) was higher (p < .05) in fresh eggs (180.4) than in 12 days (167.8) and 20 days (167.8) stored eggs. Extended storage of FUNAAB-ɑ eggs caused EWL, surface area shrinkage, lowered HU and IQU, loss of yolk and albumen quality, increased blastoderm diameters and DIG, and decreased egg fertility and HATCHS from day 8 forward. Storing FUNAAB-ɑ eggs beyond 8 days reduced quality parameters; therefore, other mitigating factors are recommended when storing beyond 8 days.     

绿僵菌无纺布菌条制作工艺

在接种优良液体种子的基础上，以单位面积的产孢量为指标，筛选了制作多种蛀干害虫的病原——绿僵菌无纺布菌条的最佳营养组合及培养条件。结果表明，最佳营养条件为（g／L）：白砂糖20g、黄豆粉40g、蛋白胨6g；琼脂含量对产孢量无显著影响；最佳培养条件为：25℃下，相对湿度（RH）95％，产孢量可达3．6×10^8～3．7×10^8孢子／cm^2。     

猪副粘病毒感染的电镜诊断及病毒的分离

采用电镜负染技术对长春市某猪场病死仔猪的肠道内容物、肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、脑等组织进行了观察.结果在肠道内容物中发现大量副粘病毒,同时在肾脏、肝脏和肺脏中也发现数量不等的副粘病毒,在脾脏和脑组织中未发现病毒粒子.取肾脏为病料,采用同步培养方法接种于PK细胞系进行病毒的分离培养.结果表明,电镜负染技术可对猪感染副粘病毒进行快速诊断,该方法操作程序简便,速度快,从取样到结果判定在1h之内即可完成.细胞分离培养结果证实此病例中的猪副粘病毒可在PK细胞中克隆增殖,并引起细胞典型的病变(CPE).     

鸡胚胎期及生长发育早期对孵化绿光强度的反应

试验旨在探究孵化期单色绿光不同光照强度对鸡孵化和早期生长发育的影响。选用810个大小均匀的新浦东鸡种蛋,随机分为3组（n=270）,孵化期1~18.5 d分别在黑暗、低照度（20~50 lux）和高照度（200~300 lux）的LED单色绿光（λ=525 nm）条件下孵化,每天光照24 h,各组种蛋于第18.5天转至同一台无光出雏器中,各组温度和湿度等其他孵化条件始终保持一致。检测各组受精蛋孵化率、死胚率、初生重、10周龄体重、初生雏鸡及3周龄公鸡的血清激素浓度（甲状腺素、降钙素、生长激素、褪黑激素和骨钙素等）和血液生理生化指标（碱性磷酸酶、胰岛素样生长因子和钙等含量）。结果表明：各组种蛋的死胚数和死胚率差异较小;孵化的20.5 d低照度组和高照度组的受精蛋孵化率分别为黑暗组的2.3倍和5.2倍;孵化的21.5 d黑暗组的受精蛋孵化率为82.8%,低照度组和高照度组的孵化率分别比黑暗组高6.5%和1.9%;黑暗组的健雏率为98.6%,低照度组的健雏率比黑暗组低0.4%,而高照度组与黑暗组的健雏率接近;高照度组公雏初生重显著低于黑暗组（P<0.05）,而低照度组与黑暗组无显著差异（P>0.05）。母雏初生重趋势与公雏基本一致,高照度组母雏初生重显著低于其他两组（P<0.05）,其他两组之间无显著差异（P>0.05）;在10周龄,各组公鸡和母鸡体重无显著差异（P<0.05）;各组1日龄公雏血液生理生化和激素指标无显著差异（P>0.05）,3周龄公鸡高照度组和低照度组褪黑激素含量显著高于黑暗组（P<0.05）,其他指标无显著差异（P>0.05）。综上,在种蛋的孵化过程中,与黑暗条件下相比,给予适宜强度的单色绿光能够促进鸡胚发育,在不影响雏鸡健康的前提下使出雏时间提前,孵化期光照对后期生长发育影响较小。     

多堆柄锈菌潜育期侵染量实时荧光定量PCR检测体系的建立

为快速及时诊断并定量监测玉米内多堆柄锈菌Puccinia polysora潜育期的侵染量,根据多堆柄锈菌的ITS序列和玉米Actin2基因序列,分别设计多堆柄锈菌特异性引物PpoF/PpoR和Taq Man探针PpoP以及玉米特异性引物ZmF/ZmR和Taq Man探针ZmP,对引物和探针的特异性和灵敏度进行测定,并用这2对引物和探针建立多堆柄锈菌潜育期的实时荧光定量PCR检测体系,定量监测接种后玉米叶片中多堆柄锈菌DNA量随时间的变化。结果表明,多堆柄锈菌和玉米的特异性引物和探针对各自靶标片段均具有良好的特异性,灵敏度分别为10^-3ng/μL和10^-2ng/μL;在接种后24 h,利用所建实时荧光定量PCR检测体系即可在玉米叶片中检测到多堆柄锈菌,且潜育期内多堆柄锈菌的侵染量随时间呈指数增长。表明所建实时荧光定量PCR检测体系可用于多堆柄锈菌潜育期侵染量的定量检测和监测。