梅山猪和香猪Prop-1基因的初步比较

Prop-1基因编码一种影响垂体前叶发生的转录因子,在人和动物均已发现由于该基因突变而引起的综合性垂体功能障碍,进而影响生长和繁殖。梅山猪和香猪的繁殖力和生长性能差异非常显著,为了了解这些差异的遗传基础,对两种猪的Prop-1基因进行了测序和比较。梅山猪Prop-1基因第198密码子为TTG,编码亮氨酸,而香猪为GTG,编码缬氨酸,即两种猪的Prop-1基因产物不同;在Prop-1基因终止密码下游250bp左右有一个腺苷酸丰富区,梅山猪有14个腺苷酸串联,香猪有11个腺苷酸串联。上述结果为进一步研究梅山猪和香猪之间生产性能差异的遗传基础提供了新线索。     

从江香猪γ干扰素基因克隆与序列分析

试验旨在研究从江香猪γ干扰素（interferon gamma,IFN-γ）基因克隆与序列分析。试验提取贵州从江香猪肝脏组织总RNA,反转录生成cDNA,采用2对特异性引物进行巢式PCR扩增从江香猪IFN-γ（CJ-poIFN-γ）基因编码区,将其克隆至pUCm-T载体上,获得重组质粒pUCm-CJpoIFN-γ,并测序鉴定;利用NCBI、SOPMA、SignalP-4.1等在线服务器软件、DNAStar软件对CJ-poIFN-γ进行序列分析。结果表明,CJ-poIFN-γ基因编码区长501 bp,编码166个氨基酸;核苷酸序列比对结果显示,CJ-poIFN-γ与梅山猪、剑白猪、藏猪、成华猪、荣昌猪、印度猪、长白猪、内江猪同源性为99.4%~100.0%;进化树分析结果显示,CJ-poIFN-γ与梅山猪、剑白猪、藏猪、成华猪亲缘关系较近;CJ-poIFN-γ基因编码蛋白不存在跨膜结构,为分泌蛋白,前23个氨基酸为信号肽序列;CJ-poIFN-γ基因编码蛋白二级结构主要以α-螺旋（50.60%）和无规则卷曲（33.14%）为主,B细胞表位主要位于62-65、84-87、113-115、144-156和162-166位氨基酸。试验结果为进一步研究IFN-γ的生物活性、加快从江香猪品种资源的有效利用奠定基础。     

MAPK信号通路2个结构变异多态性及其与香猪生长性状的关联分析

试验旨在探究丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路中MAPK10、MEF2C基因结构变异的遗传多样性及其与香猪生长性状的关联性,以期为贵州香猪的育种改良提供理论依据。采用PCR技术对233头香猪2个结构变异（structure variation,SV）位点（MAPK10-I₈-sv273和MEF2C-I₁-sv71）进行群体基因变异研究,利用Origin软件绘制香猪的生长曲线,利用在线软件计算出多态信息含量（PIC）、杂合度（He）、纯合度（Ho）及有效等位基因数（Ne）,并利用SPSS 26.0软件分析基因分型结果与香猪生长性状的关联性。结果显示,2个结构变异位点在香猪群体中存在多态性,均有3种基因型：DD、ID和II,2种等位基因：D和I。其中,MAPK10-I₈-sv273的D等位基因频率明显高于I等位基因,DD基因型频率最高（0.65）,且DD基因型个体的平均日增重、体高和生长速度均大于II基因型个体,表明该位点D等位基因具有提高香猪生长性能的遗传效应;MEF2C-I₁-sv71的I等位基因频率高于D等位基因,II基因型频率最高（0.51）,II基因型个体的平均日增重、胸围、总体生长速度均大于DD基因型个体,表明该位点的I等位基因可提高香猪的生长性能。综上,结构变异MAPK10-I₈-sv273和MEF2C-I₁-sv71与香猪的生长发育相关,可作为生长性状选育的候选分子标记。     

ADCY3和IGF1基因结构变异与香猪繁殖性状的关联分析

试验旨在研究卵巢类固醇生成信号通路中腺苷酸环化酶3（adenylatecyclase 3,ADCY3）、胰岛素样生长因子1（insulin like growth factor 1,IGF1）基因结构变异的遗传多样性及其与香猪母猪繁殖性状的相关性。采用PCR技术对269头香猪进行ADCY3和IGF1基因结构变异研究,利用在线软件计算遗传杂合度（He）、遗传纯合度（Ho）、有效等位基因数（Ne）及多态信息含量（PIC）,并利用单因素方差分析、LSD法分析不同基因型与初产和经产香猪的总产仔数、产活仔数、初生重及乳头数等繁殖性状的关联性。结果显示,2个结构变异ADCY3-I₁-sv506和IGF1-I₃-sv302在香猪群体中均存在多态性,均有3种基因型：DD、DI和II,2种等位基因：D和I。其中,ADCY3-I₁-sv506中DI基因型为优势基因型（0.569）,D为优势等位基因（0.601）;IGF1-I₃-sv302中II基因型为优势基因型（0.717）,I为优势等位基因（0.816）。ADCY3-I₁-sv506和IGF1-I₃-sv302多态信息含量（PIC）均为中度多态（0.25<PIC<0.5）,杂合度分别为0.479和0.300。关联性分析结果发现,ADCY3-I₁-sv506位点DD基因型个体的初产和经产母猪总产仔数显著高于II基因型个体（P<0.05）;IGF1-I₃-sv302位点II基因型个体的初产、经产母猪总产仔数和经产母猪产活仔数均显著高于DI基因型型个体（P<0.05）。结果表明,2个结构变异位点ADCY3-I₁-sv506和IGF1-I₃-sv302与香猪母猪的繁殖性能有直接关联,可作为香猪母猪繁殖性能选育的候选分子标记。     

巴马香猪CIDEa基因克隆及组织表达分析

本试验旨在对巴马香猪CIDEa基因序列进行克隆,预测其蛋白结构和功能,并进行组织表达分析。根据NCBI已经公布猪的CIDEa基因序列(登录号:NM_001112696.2),利用Oligo 7.0软件设计引物,采用RT-PCR法扩增并克隆巴马香猪CIDEa基因序列,利用生物信息学软件分析其核苷酸序列及编码蛋白的疏水性、理化性质、跨膜结构域、二级结构、三级结构及互作蛋白,并采用实时荧光定量PCR方法检测CIDEa基因在巴马香猪皮下脂肪、肝脏、肾脏、肺脏、脾脏、背最长肌及心脏的表达规律。结果显示,试验成功获得巴马香猪CIDEa基因CDS区序列,全长660 bp,编码219个氨基酸,与GenBank中猪、牛、马、犬、人、猕猴和家鼠的核苷酸相似性分别为99.4%、84.7%、81.5%、80.9%、79.7%、78.9%和76.1%。与GenBank中野猪CIDEa基因核苷酸序列比对发现,发生4处碱基突变,其中A609G和T627C位点为同义突变,C173T(Pro→Leu)和C631T(Arg→Cys)位点为错义突变。巴马香猪CIDEa蛋白分子质量为24 483.57 u,等电点为9.48,不稳定指数为52.86,属于不稳定蛋白;该蛋白中亮氨酸(Leu)含量最高(13.2%),色氨酸(Trp)含量最低(0.5%)。巴马香猪CIDEa蛋白为膜外亲水性蛋白,包含1个超家族结构域(CIDE-N)。二级结构预测发现,巴马香猪CIDEa蛋白包含α-螺旋(45.66%)、β-转角(5.94%)、延伸链(14.61%)和无规则卷曲(33.79%),三级结构预测结果与二级结构一致。蛋白互作分析结果表明,巴马香猪CIDEa蛋白与PPARG、PPARGC-1、COX8H、PRDM16、DIO2、TMEM26、ELOVL3、COX7A1、CIDEC、DFFB蛋白存在相互作用。实时荧光定量PCR结果显示,CIDEa基因在巴马香猪皮下脂肪中表达量最高,且显著高于其他组织(P<0.05),心脏中表达量最低。研究结果为进一步探讨CIDEa基因对巴马香猪脂肪沉积的调控机制提供理论依据。     

蔡襄《荔枝谱》研究

从七个方面简要论述了宋代蔡襄《荔枝谱》的科学价值：古代对荔枝进行系统研究的重要标志、我国荔枝谱的方法论范例、提高荔枝的社会和科学地位、广泛流行于国内外、反映并推广荔枝加工技术、最早揭示核种导致荔枝品种变异现象以及荔枝品种的命名方法、证明蔡襄《荔枝谱》是我国古代农业科技的一个重要成就．     

白香猪血液蛋白多态性与若干性状表现的相关性

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，检测了白香猪群体的血液中血红蛋白（Hb)，转铁蛋白（Tf)，后白蛋白（Po)，后转铁蛋白（Ptf)4个蛋白座位的多态性。其中Tf、Po、Ptf发现了多态性而Hb没发现多态性。用方差分析的方法检测了各种基因型猪生产性能方面的差异，结果显示Po、Tf各种基因型之间的体长、体高无差异（P＞0．05）。Ptf的AA型的体长长于AB（P＜0．05），而2基因型之间的体高差异不显著（P＞0．05）。因此Ptf的多态性与香猪某些体尺性状之间存在一定的相关性。     

贵州香猪睾丸发育中雌激素受体和一氧化氮合酶的表达

为探明香猪睾丸发育过程中雌激素受体(ERα,ERβ)和一氧化氮合酶(NOS)蛋白的表达情况,手术取出30日龄、40日龄、50日龄、70日龄、90日龄和110日龄贵州香猪右侧睾丸,采用免疫组织化学方法检测了睾丸组织中ERα、ERβ和上皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白的表达量。结果表明:ERα只在睾丸输出小管上皮细胞胞核中表达,且30~50日龄时表达率显著高于70~110日龄(P0.05)。ERβ在睾丸生精小管细胞胞质中的表达率先随日龄增加而升高,50日龄达到最高(P0.05),随后降低;在输出小管上皮细胞和管周细胞核中的表达率无显著变化;在附睾中表达率在30~50日龄时无显著差异,70~110日龄随年龄增长表达率显著升高(P0.05)。eNOS在生精小管细胞中先随日龄增加表达率增大,30日龄时表达率最低(P0.05),50日龄表达率最高(P0.05),随后逐渐减少。     

香猪肺源性枯草芽孢杆菌的分离鉴定及体外抑菌作用

为获得猪呼吸系统的益生菌,以对疾病具有较强抗性的从江香猪为对象,从肺组织中分离到1株细菌Bp-1并对其进行形态学观察和生理生化特性鉴定,经克隆测序分析16SrDNA核苷酸序列和二级结构的相似性,利用琼脂扩散法和混菌拮抗培养法研究Bp-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和猪链球菌3种致病菌的抑制作用。结果表明:菌株Bp-1与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)位于同一分枝,相似性达100%;与已知枯草芽孢杆菌菌株168的16SrRNA可变区二级结构相比无明显差异,因此将Bp-1鉴定为枯草芽孢杆菌。枯草芽孢杆菌Bp-1的液体培养物对3种致病菌均有抑制作用;对大肠杆菌的拮抗作用较强,对金黄色葡萄球菌的拮抗作用较弱。枯草芽孢杆菌Bp-1可作为猪呼吸系统的益生菌对其深入研究。     

Cloning and Subcellular Localization of ApoA1 Gene in Congjiang Xiang Pig

This experiment was aimed to clone apolipoprotein A1(ApoA1) gene of Congjiang Xiang pig, and study the subcelluar localiztion of ApoA1 gene in eukaryocyte. The recombination plasmid pEGFP-C1-ApoA1 was constructed with RT-PCR and other methods, and detected by colony PCR,double digestion and sequencing, after successful construction of the recombination plasmid pEGFP-C1-ApoA1,the subcellular localization of ApoA1 protein were analyzed by fluorescence co-localization technique in the 36 h-transfected HEK-293T cells. Compared with ApoA1 gene of Sus scrofa submission in GenBank, the results showed that six base mutations were found in ApoA1 gene of Congjiang Xiang pig, five of above mentioned mutations were sense mutations, causing alanine to glutamic acid, histidine to glutamine, valine to leucine and aspartic acid to glycine in 180,185,186 and 209 amino acid residues, respectively. Using PSOR Ⅱ Prediction and fluorescence co-localization, it was found that the expression of ApoA1 protein was observed mainly in the extracellular matrix (77.8%). In conclusion, ApoA1 gene of Congjiang Xiang pig was cloned successfully, and the expression of ApoA1 protein was mainly concentrated in the extracellular matrix. These results would provide a knowledge for further constructing the ApoA1 gene transgenic animal models, and contribute to understanding the relation between ApoA1 gene and the human obesity-induced diseases.