油茶总RNA及mRNA的分离与纯化

利用改良的CTAB法，从富含本分类糖类等次生物质油茶叶片中分离出总RNA，并从总RNA中，通过两次过Oligo(dT）柱分离纯化得到mRNA。实验结果证明：所提取的RNA和mRNA完整，质量较高，并应用到油茶cDNA文库的构建。     

直接涂片镜检法和沉淀法检验出口猕猴溶组织阿米巴的比较

在对出口到法国的６２只猕猴进行的溶组织阿米巴的检验中，对直接涂片镜检法和沉淀法进行了比较。直接法检溶组织阿米巴包囊的检出率为６．４５％，沉淀法的检出率为３０．６５％，ｔ检验结果表明，沉淀法与直接法的检出率差异极显著（Ｐ＜０．００１），沉淀法的检出率显著高于直接法。     

LiCl沉淀法提取富含荚膜的细菌基因组DNA

结合提取基因组DNA的CTAB法(hexadecyltrimethylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化铵)和用于提取海藻基因组DNA的LiCl法,设计了针对产生较多荚膜多糖细菌的DNA提取方法—LiCl沉淀法。通过电泳、分光光度计及16SrRNA基因扩增检测,证明LiCl沉淀法可以有效地提取产荚膜细菌基因组DNA,其片断大小约为23kb,不需进一步纯化即可用于后续分子生物学实验。     

石榴种质资源RAPD反应体系的引物筛选

以产自山东省枣庄市的18个石榴品种叶片为材料,采用CTAB法提取各石榴品种基因组DNA,对所提取的DNA采用紫外分光光度计测定D260nm和D280nm,并计算D260nm/D280nm,分析DNA的浓度和纯度.结果表明D260nm/D280nm均接近于1.8,纯度较高,能用于RAPD-PCR扩增的模板.以5种遗传背景差异大的石榴品种的DNA为模板,筛选用于石榴RAPD扩增的多态性引物,结果表明,通过分析多态性位点,筛选出重复性好、条带清晰的3条多态性引物S66、S1304、S1440,其多态性位点比例较高,分别为75.0％、60.9％、63.6％.     

两种铁皮石斛总RNA提取方法的比较研究

 铁皮石斛是我国重点保护药材,因其富含多糖及次生代谢物,用普通的方法难以从叶中提取到能满足构建全长cDNA文库等分子生物学实验对高质量RNA需要的总RNA。分别通过对异硫氰酸胍法和CTAB法进行改良。异硫氰酸胍法：往裂解液中加入PVP,通过PVP去除多酚;用56℃热水水浴5min加速组织细胞裂解;抽提时间由原来15 min缩短为5min;根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加裂解液。CTAB法：根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加CTAB裂解液;用LiCl对RNA进行选择性过夜沉淀;灵活处理,适当增大LiCl浓度。结果表明用改良后的2种方法均可提取到总RNA,经对比发现,改良CTAB法提取效果更好,可重复性强,抽取到的RNA更适合于后续的分子生物学实验。     

苦瓜DNA提取方法的比较

采用CTAB法、SDS法、SDS-CTAB法、试剂盒法4种方法提取苦瓜(Momordica charantiaL.)叶片基因组DNA,并使用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测提取所得DNA的纯度和浓度.结果表明,SDS-CTAB法和试剂盒法提取的基因组DNA纯度高于CTAB法和SDS法,其中SDS-CTAB法提取的DNA浓度和产率高于其他方法.     

不同方法提取野生龙眼基因组DNA的效果比较

以广东、海南的3种野生龙眼幼嫩叶片为试验材料,采用常规SDS法、常规CTAB法、改良SDS法和改良2xCTAB法提取龙眼叶片基因组DNA,探索从富含单宁、多酚、多糖和色素等次生代谢物质的野生龙眼叶片中获得高质量DNA的提取方法.结果表明:采用改良的2xCTAB法提取的龙眼叶片基因组DNA纯度最高、质量最佳,可直接用于龙眼RAPD分析和叶绿体DNAtrnL-F基因的PCR扩增分析,且扩增后条带清晰.说明改良的2xCTAB方法获得的DNA纯度和产率较高,提取效果较好.     

陕北木枣基因组DNA提取方法研究

采用SDS法和改良CTAB法对不同方式保存的陕北木枣叶片基因组DNA进行了提取,并对木枣不同取材部位(叶芽,花蕾,花瓣,嫩茎,韧皮部,嫩叶)的基因组DNA提取效果进行了研究。结果表明:改良CTAB法提取的经-80℃快速冷冻的叶芽或幼嫩叶片获得的结果相对最好,即得到的DNA蛋白质等杂质去除较彻底,条带较整齐,产量较高。     

甘蓝型油菜成熟籽粒DNA快速提取方法探讨

以室温保存不同年份的甘蓝型油菜种子为材料,采用改良的CTAB法和DNA抽提试剂盒分别提取甘蓝型油菜籽粒DNA,探讨适合甘蓝型油菜籽粒DNA提取的方法。结果表明,不同保存年份种子提取的DNA含量无显著差异;受种皮色泽的影响也较小;用改良的CTAB法比试剂盒所提DNA产量高,结构完整性好,成本较低。PCR扩增检测结果表明两种方法获得的DNA均能满足一般的分子实验。因此,从油菜干籽粒中直接提取DNA可以节约时间,显著提高工作效率,为快速高效地进行甘蓝型油菜种质资源和遗传多样性分析奠定了基础,同时,也利于快速鉴定推广品种是否带有外源基因。     

铁线蕨总DNA提取方法比较分析

以铁线蕨(Adiantum capillus-veneris L.)不同世代植株为材料,对铁线蕨总DNA不同提取方法进行比较,并通过检测体系进行分析.结果表明:结构简单的配子体为材料的DNA的纯度明显高于孢子体,但是产量也明显低于孢子体;对于配子体而言,CTAB法、SDS法、高盐低pH法、尿素提取法、试剂盒法都能提取较为纯净的总DNA,但经过DNA完整性检测体系筛选后,改良CTAB法结果最优;对于含大量次生代谢产物的孢子体植株而言,改良CTAB法得到的总DNA纯度明显高于其它,通过后续的DNA完整性检测得到与配子体相同结论.