常山胡柚叶片DNA的抽提与分析

经反复实验，采用在抽提前加入一定量的抗氧化剂β－巯基乙醇，用冰冻的异丙醇来沉淀DNA，并增加氯仿／异戊醇抽提次数的所谓改良CTAB法，对常山胡柚叶片DNA抽提与分析，不仅成功提取到常山胡柚叶片DNA，而且所得的DNA浓度高、纯度好，20个试样的DNA苹均质量浓度为272.86μg/mL，平均每克鲜叶片可获DNA约82μg，纯度基本上都在1.4-1.8范围内，并经RAPD反应验证，完全能满足常规分子生物学分析的要求。     

适于AFLP分析的澳洲坚果DNA提取方法

利用SDS法和改良CTAB法对澳洲坚果两个品种的基因组DNA进行提取试验,结果表明:SDS法与改良CTAB法提取的基因组DNA完整性都比较好,但SDS法获得的DNA含有较多杂质,不能被限制性内切酶消化,改良CTAB法提取的基因组DNA可以完全酶切,DNA质量符合AFLP分析的要求。     

不同方法提取三种生态型沙地云杉总DNA的比较

沙地云杉为内蒙古特有树种,干旱适应性强,是我国西部重要造林树种。在长期适应干旱生态条件的过程中沙地云杉形成了紫果型、绿果型和红果型3种生态型。前期研究证明:紫果型沙地云杉有更强的抗旱能力,绿果型抗旱能力弱,红果型处于二者之间,是一个比较典型的过渡类型。本文从分子生物学的角度,详细叙述了沙地云杉总DNA的提取过程、方法,并对已知的植物DNA提取方法作了针对性的改良;对实验过程提取DNA的影响作了分析。为今后针对进行沙地云杉的植物基因研究和生物工程打下基础,对扩大沙地云杉造林面积和西部大开发的生态环境建设具有重要的指导意义。     

牡丹的基因组DNA提取与ISSR引物筛选

为了研究牡丹种质资源的遗传多样性和DNA鉴定,采用ISSR标记的方法来进行试验,即采用改良的CTAB法从成熟干燥的牡丹叶片中提取基因组DNA,其质量检测采用琼脂糖凝胶电泳法和超微量分光光度计法,用优化的ISSR-PCR反应系统,对加拿大哥伦比亚大学(University of British Columbia,UBC)公布的220条ISSR引物进行筛选.结果表明,从6个牡丹品种的叶片中提取的DNA浓度范围在30×10-3～100×10-3μg/μL之间,DNA样品纯度D260 nm/D280 nm比值在1.7～1.9之间;从220条ISSR引物中筛选出了12条适合牡丹的扩增结果好的引物,选出的引物扩增条带清晰、多态性高、重复性好.说明提取的DNA质量较好,该改良的CTAB法适用于从蛋白质和酚类物质含量较高的植物材料中提取基因组DNA;筛选出的12条ISSR引物为进一步研究牡丹资源的遗传多样性奠定了基础.     

海带褐藻糖胶的研究

本工作研究了我国人工养殖的海带叶片中褐藻糖的分布，及海带综合利用工业的废料碱凝沉物中褐藻糖胶的存在量和分离条件。海带叶片中的褐藻糖含量分布边缘比中部多，并从基部向尖部增加，即由0．3％增至1％以上。试验了用十六烷氯化吡啶法(CPC法)和乙醇沉淀法从碱凝沉物中分离褐藻糖胶的条件。两种方法的褐藻糖胶获得率分别为5．6％和4．4％(对干碱凝沉物)，其中的褐藻糖含量分别为24．7％和28．7％。碱凝沉物中的褐藻糖含量为1．4～3．5％。还研究了从褐藻糖胶以酸水解制取褐藻糖的诸条件，并分离出纸层析纯的褐藻糖结晶。     

中药材景天三七DNA提取方法的比较分析

以景天三七药材为材料,分别采用改良CTAB法、SDS法、高盐低p H法对其DNA进行提取并检测,旨在建立一种适合中药材景天三七的DNA提取方法。结果表明,改良CTAB法提取的DNA浓度为290μg/m L,电泳条带最亮,无拖尾现象,在浓度和纯度方面均优于其他2种方法,并可用于ISSR-PCR扩增,改良CTAB法是中药材景天三七DNA提取的最佳方法。     

野牛草基因组DNA提取方法的筛选

采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基磺酸钠(SDS)法以及高盐法3种方法对野牛草叶片的基因组DNA进行提取,并利用分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测比较3种方法提取DNA的纯度与浓度。结果表明,3种方法提取到的野牛草叶片DNA的纯度、完整性都较好,质量从高到低依次为CTAB法高盐法SDS法,产率依次为SDS法CTAB法高盐法,综合来看CTAB法是提取野牛草基因组DNA的最佳方法。     

提取高质量茶树总RNA的方法研究

由于茶树富含多糖、多酚，从茶苗组织中尤其是从茶苗的根中提取高质量的RNA较为困难，试用了多种方法都未能获得高质量的RNA。借鉴多年生的草本植物RNA提取方法——cTAB法，并在此基础上进行改进，首次提取了茶苗嫩根中的总RNA。电泳检测显示，该方法提取的总RNA28S和18S条带清晰且28S较18S条带亮，紫外光谱分析显示A260/A280的比值为1．93。用于RT—PCR反应，成功克隆了492bp的谷氨酰胺合成酶基因片段，说明该方法提取的RNA纯度和完整性好。     

两种膜荚黄芪DNA提取方法的优化与比较

以膜荚黄芪的嫩叶片为材料,对CTAB法和高盐低pH法进行了改良,并用此改良法提取总DNA,用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。结果表明,无论从提取率还是纯度上,优化的高盐低pH法都优于CTAB法,但高盐低pH法提取的DNA不适合长期保存。     

优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究(英文)

[目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用SDS法和改良CTAB法(包括低温操作、增加酚氯仿的抽提次数以及延长低温沉淀时间等)提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再使用普通聚合酶与热启动高保真的ExTaqHS聚合酶进行两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。油菜数据库比对搜索采用BBSRCBrassicaDB上WU-BLAST2.0工具,拟南芥数据库比对分析采用TAIR数据库中WU-BLAST2.0工具。为验证FS4转基因中T-DNA插入位点的真实性,根据序列比对分析结果在T-DNA插入位点的左右两端分别设计引物FS4-L与FS4-R。分别采用3对引物pS2/FS4-L、pA2/FS4-R、FS4-L/FS4-R同时对T1代转基因FS4杂合体和非转基因对照植株的基因组进行PCR验证。[结果]两轮巢式PCR扩增得到1个大小为4.0kb的片段,其序列与油菜数据库中BH652424和BZ044084两序列同源性分别高达97.8%和63.4%。根据序列比对结果设计特异引物对进行PCR验证的结果,也证明了FS4转基因油菜中T-DNA的确插入在该位点。[结论]优化后的IPCR条件能成功分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。