铝处理对2个桉树无性系幼苗丙二醛含量的影响

采用室内水培试验法,研究了铝处理对广西区2个优良桉树无性系(Eucalyptus grandis×E.urophylla No.9和E.urophylla No.4,分别记为G9、G4)根系及叶片内MDA含量的影响。结果表明:2个桉树无性系根内MDA含量均比叶内高;铝处理下,2个桉树无性系幼苗的MDA含量明显升高,G4根中MDA含量最高,达11.49μmol·g-1,根中MDA含量比叶中高,桉树无性系幼苗根部受铝伤害较叶严重。     

秋菊花期调控技术研究

进行了秋菊花期的控制试验,结果表明,秋菊在长日照下可延迟开花.在扦插苗成活定植后,成熟叶展开5～6片后开始补光处理60 d,照度120 ～ 231 lx,成株在塑料大棚内增温培植.经补光处理,不同品种花期不同.花色,花径,叶色、叶形等品种特征与正常秋菊无异.用B9矮化处理后,花径、叶面积增大,效果十分明显.彩龙爪、温玉、一捧雪花开至翌年7月上旬,十丈珠帘、彩龙爪单株着花数达150余朵.     

几种植物生长调节剂对澳洲坚果幼树的控梢效果比较

用植物生长调节剂多效唑、乙烯利、矮壮素、B9对澳洲坚果幼树进行控梢处理,结果表明:多效唑对澳洲坚果幼树的生长有极显著的抑制作用,其中3和2.5g/L处理的幼树营养生长受到严重抑制;乙烯利对澳洲坚果幼树新梢的抽发、梢长、节间长有显著影响,1.5和2g/L处理后幼树的新梢表现出乙烯的"三重效应"。矮壮素和B9对澳洲坚果幼树新梢抽发抑制作用极显著,矮壮素1.5、2g/L处理的幼树在喷药后2个月没有抽发新梢;B9处理的幼树新梢抽发量很少,对照的新梢数是其它处理新梢数的数十倍。     

CRISPR/Cas System and Its Application in the Study of Mycobacterium tuberculosis

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) / CRISPR-related protein (Cas) system is a heritable prokaryotic adaptive immune system against invading nucleic acids. It is an editing tool for many organisms that can generate highly specific gene double-strand breaks and repair them by non-homologous end joining (NHEJ) or homologous recombination (HR). Due to the complexity of its genetic manipulation, Mycobacterium tuberculosis genome research has many difficulties. Therefore, the emergence of the CRISPR/Cas system has a milestone significance for the research of Mycobacterium tuberculosis. In this review, we focus on the application of the CRISPR/Cas system in Mycobacterium tuberculosis and summarizes the present research progress in order to provide a reference for the selection of Mycobacterium tuberculosis research methods.     

慢病毒介导稳定表达 Cas9 蛋白的鸡成纤维细胞系构建及其活性验证

【目的】筛选稳定表达 Cas9 蛋白的鸡成纤维细胞系（DF-1）,并基于单链退火修复机制（Single Strand Annealing, SSA）的报告载体系统,检测 DF-1 细胞系中的 Cas9 核酸酶活性。【方法】将携带 Cas9 蛋白的慢病毒载体质粒与辅助质粒一起转染 293T 细胞包装慢病毒,收集慢病毒 Cas9 上清液感染 DF-1 细胞,经抗生素筛选得到稳定表达 Cas9 蛋白的 DF-1 细胞,分别用 PCR 和 Western blot 验证阳性 DF-1 细胞表达 Cas9 蛋白的情况;选择鸡卵清白蛋白（OVA）基因的 sgRNA 序列,将 sgRNA 退火产物克隆至 pYP152 构建 sgRNA 表达载体,并在 sgRNA 靶位点两端设计引物扩增 OVA 基因靶片段,将靶片段克隆至报告载体 pCMV-SSA-mCherry-Hind Ⅲ,以破坏 mCherry 蛋白的表达,之后再将 sgRNA 表达载体与 SSA 报告载体共同转染稳定表达 Cas9 蛋白的 DF-1 细胞,最后在荧光显微镜下分析不同稳转株对 mCherry 蛋白表达的修复情况。【结果】经抗生素筛选得到 27 株稳定表达 Cas9 蛋白的 DF-1 细胞系,采用 PCR 扩增稳转细胞基因组,结果显示这些细胞具有 Cas9 蛋白基因序列,Western blots 试验结果显示上述稳转细胞株均表达 Cas9 蛋白;sgRNA 表达载体与 mCherry-SSA 报告载体共转后,通过荧光显微镜观察发现筛选到的稳转细胞株均可恢复报告载体中 mCherry 蛋白的表达。【结论】成功构建了具有切割活性的稳定表达 Cas9 蛋白的 DF-1 细胞系,可为后续在稳定表达 Cas9 蛋白的 DF-1 细胞系上开展鸡相关功能基因研究提供基础材料。     

大豆新品种“苏豆9号”选育与栽培技术研究

“苏豆9号”为东海县农业科学研究所经有性杂交,系谱法选育而成的新品种,具有早熟、高产、优质、抗倒伏、抗病性强,抗逆性强,适应性广等特点.2008-2010年参加江苏省区试,3年平均184.8 kg/667 m 2,较对照徐豆13增产3.6%,2010年增产极显著.2011年生产试验平均177.5 kg/667 m2,较对照增产6.7%;2012年3月通过江苏省农作物品种审定委员会审定通过,适宜江苏省淮北地区作夏大豆种植.为探讨适宜播期,最佳种植密度和合理的施肥量,特设栽培试验,结果表明,苏豆9号最佳播种期是6月上中旬,在此范围内越早越好,最佳密度是1.4万株/667 m2,基肥用量以含氮、磷、钾45%复合肥20 kg/667 m2为宜.     

Patent analysis provides insights into the history of cotton molecular breeding worldwide over the last 50 years

Cotton is a globally important natural fiber and oilseed crop of crucial economic significance. Molecular breeding has become a dominant method of cotton cultivation because it allows for a shorter breeding period and directional selection of high quality genes. Patent data are key resources and are the core competitiveness of agricultural development, as the world's largest and most reliable source of technical information. However, little attention has been paid to patent analysis of cotton molecular breeding. This study uses bibliometric analysis methodology and technical classification indexing to reveal global development trends of cotton molecular breeding, based on patents by retrieval methods and expert screening. The annual number of patents, the life-cycle of patent-based technology, patent portfolios of primary countries, and main patentees, as well as technical distribution of patents, were analyzed in this study. In addition, this study put emphasis on the comparative analysis of two important patentees through patent roadmaps based on the relationship among patent citations. Finally, in order to understand the trend of new molecular breeding technology, patents related to clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR), RNA interference (RNAi), and gene chip were also analyzed, all of which apply to cotton but also to other crops. Results in this paper can provide references for cotton molecular breeding researchers and relevant management departments.     

E-64对绵羊卵母细胞体外成熟过程中caspase表达规律的影响

为了研究E-64对绵羊卵母细胞体外成熟过程中caspase表达的影响,从而探究E-64抑制卵母细胞凋亡的基本途径。本试验利用双夹心ELISA方法,研究体外成熟过程中绵羊卵母细胞内caspase-3,caspase-8以及caspase-9的蛋白表达水平及酶活水平的变化规律,以及成熟液中添加E-64对其产生的影响。结果表明:caspase-3、caspase-8和caspase-9的蛋白表达水平均呈先升高后降低的变化规律,caspase-3和caspase-9的活性与其蛋白表达的变化规律相一致,而caspase-8的活性则呈逐渐升高的变化规律;成熟液中添加E-64,对caspase-3、caspase-8和caspase-9的蛋白表达水平均无显著性(P0.05)影响,但可以降低caspase-8和caspase-9的酶活性(P0.05),而对caspase-3的酶活性无显著性影响(P0.05)。表明E-64通过在酶活性水平上下调死亡受体途径中caspase-8的活性和线粒体途径中caspase-9的活性,从而降低了卵母细胞体外成熟过程中的细胞凋亡刺激。     

CRISPR-Cas9基因编辑技术在特种药材中的研究与应用

CRISPR-Cas9基因编辑技术是继锌指核酸酶（ZFNs）和TALEN核酸酶（TALENs）之后、可高效定点编辑的第三代基因编辑技术,是目前基因功能研究和遗传疾病治疗等生命科学领域最前沿的基因编辑技术,在植物现代生物技术中占据着很重要的地位,特别是在作物遗传改良方面。作为作物遗传改良育种的有效技术手段,CRISPR-Cas9基因编辑技术为创制特种药材新种质资源特别是专用型品种资源带来了新契机,对于特种药材种质创新具有极其重要的作用。本文对CRISPR-Cas9基因编辑技术在特种药材中的研究与应用进行了综述,以期为特种药材的基因功能研究以及种质创新工作提供良好的研究基础与理论依据。     

苹果MdMYB9、MdMYB11表达及其蛋白互作分析

【目的】克隆苹果(Malus domestica)中的TT2同源基因MdMYB9和MdMYB11,分析它们的序列特征,并对这两个基因在不同组织器官及光诱导条件下的表达特性及蛋白互作进行分析,为进一步解析这两个基因的功能奠定基础。【方法】采用同源克隆的方法分离得到MdMYB9和MdMYB11;利用DNAMAN软件对这两个蛋白的分子量、等电点等进行预测及对氨基酸序列进行分析,同时利用MEGA4.0软件构建这两个蛋白与拟南芥R2R3家族MYB蛋白的系统进化树;利用定量PCR检测这两个基因在不同组织器官、不同发育时期苹果果皮及种子和光照处理条件下的表达特性;利用酵母双杂交检测这两个MYB蛋白与花青苷合成相关蛋白MdbHLH33之间的互作关系。【结果】序列分析显示,MdMYB9开放阅读框长度为873 bp,编码290个氨基酸残基,与拟南芥TT2序列同源性为38.13%;MdMYB11开放阅读框为861 bp,编码286个氨基酸残基,与TT2同源性为32.44%;蛋白结构分析显示,MdMYB9和MdMYB11蛋白的N端都含有保守的R2R3功能域;进化树分析显示,这两个MYB蛋白都与拟南芥原花青苷合成相关蛋白TT2聚在同一个分支;荧光定量结果表明,MdMYB9和MdMYB11在苹果根、茎、叶和花中均有表达,但各器官中表达水平存在差异;同时,这两个基因在不同发育时期的种子及果皮中都有表达,其中均在发育中期表达水平最高;此外,光照诱导条件下MdMYB9和MdMYB11的表达变化无明显差异。酵母双杂交结果显示,MdMYB9和MdMYB11均能够与花青苷合成相关蛋白MdbHLH33相互作用。【结论】苹果MdMYB9和MdMYB11属于R2R3类MYB蛋白,在不同组织器官及不同发育时期的果皮和种子中都有表达,并与MdbHLH33蛋白相互作用。