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51.
PRRSV国内流行毒株的分离鉴定及结构基因的分析 总被引:2,自引:1,他引:1
从国内发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病料中,分离到8株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。病毒分离培养表明,JS1-JS5第1代即可适应Marc-145细胞。GD1-GD3经Marc-145细胞3次-4次传代后出现明显的细胞病变。间接免疫荧光试验表明,8个分离毒株与抗PRRSV抗体均可出现特异性的胞浆荧光。它们对氯仿、甲醛、酸和碱均敏感。5-溴-2′-脱氧尿核苷对其无抑制作用。参照GenBank中已发表的PRRSV的序列设计了两对特异性引物,分别对所分离毒株进行部分nsp2基因和结构基因的扩增。发现JS1-JS5nsp2基因发生了部分缺失。选择JS1、JS5、GD3进行nsp2基因和结构基因的扩增和测序。序列分析结果表明,JS1、JS5和2006年以后国内分离到的高致病性PRRSV高度同源。GD3的Nsp2基因虽然没有发生第534位-第562位氨基酸的缺失,但与2006年以后分离的毒株一样,发生了第482位氨基酸的缺失。通过对3个分离毒株与其他国内分离毒株的结构基因序列进行系统进化分析发现,我国的PRRSV流行毒株可大致划分为两个亚型,JS1、JS5、GD3、CH-1a、JXA1、HUN4、SHH等属于一个亚型,BJ-4、CC-1属于另一个亚型。亚型间核苷酸序列同源性为91.2%-91.8%。 相似文献
52.
犬新孢子虫NcSRS2基因原核表达质粒的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
根据已发表的犬新孢子虫NcSRS2基因序列,设计1对含有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的引物。以提取犬新孢子虫虫体基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得NcSRS2 ORF基因片段,将此基因片段克隆到pMD18-T Simple载体上,用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切该片段,回收得到含有两个酶切位点黏端的Nc-SRS2 ORF基因,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的PGEM-4T-2原核表达载体中,获得重组质粒pGEX-NcSRS2,经PCR鉴定,限制性内切酶分析和克隆片段序列测定比较,证实了重组质粒的正确性。 相似文献
53.
54.
55.
56.
中间锦鸡儿fad2基因克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
油酸去饱和酶FAD2(fatty acid desaturase 2)在油酸中引第二个双键生成亚油酸,是负责植物体内产生多不饱和脂肪酸的第一步关键酶.本研究采用RT-PCR和RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术,以中间锦鸡儿未成熟种子为材料,克隆了三个fad2基因(分别命名为fad2-2A、fad2-1A和fad2-1B).将这三个基因与汪阳东从中间锦鸡儿枝叶中克隆的fad2-2B(CaFAD2基因,GenBank登录号AY957394)一起进行了序列比对和分析.序列同源性比较结果表明,fad2-1A与fad2-1B同源性很高,fad2-1A编码的前283个氨基酸与fad2-1B的同源性高达98.9%,fad2-2B与fad2-1A的氨基酸序列同源性最低,只有64.7%.这四个基因的成功克隆,为进一步研究基因分工、调控方式打下了基础,为实现对锦鸡儿属植物脂肪酸成分直接、精确调控提供了保证,也是从一个物种中克隆四个fad2基因的第一次报道. 相似文献
57.
西瓜抗枯萎病基因同源序列的克隆与分析 总被引:3,自引:0,他引:3
本研究根据已克隆的抗枯萎病基因的NBS保守结构域设计了22条上游简并引物和17条下游简并引物,以西瓜抗枯萎病种质PI296341-FR和感枯萎病品种97103为材料,获得了7条来自基因组DNA的RGA序列(GenBank登录号:DQ156558-DQ156564),均含有NBS保守区的P-环、kinase-2或kinase-3等抗病基因的特征序列结构,所编码的氨基酸序列与已知抗枯萎病基因Fom-2、I2C-1、I2C-2和I2等编码的氨基酸序列表现出11%~72%的同源性,其中来自PI296341-FR的RGA序列175R1与甜瓜抗枯萎病基因Fom-2的同源性最高,为72%。来自PI296341-FR与97103的RGA序列之间同源性较高(73%~97%),证明了抗病基因在进化上的保守性。 相似文献
58.
马尾松银松素合酶基因启动子区的克隆及特征分析 总被引:1,自引:0,他引:1
银松素合酶(pinosylvin synthase,PS)是合成银松素类植物抗毒素的关键酶。本文根据前期工作所获得的PS基因序列,设计基因特异引物,利用连接介导的染色体步行技术,从马尾松总基因组中扩增PS基因上游的启动子区;通过PLAN-CARE等分析软件对5′侧翼区近700 bp进行启动子特征分析,预测启动子区调控元件。结果表明,在翻译起始密码子上游167 nt处可能存在TATA-box。此外还发现3个GATA-box(-260 nt、-295 nt、-386 nt和-295 nt)和若干个TGAC-like序列。 相似文献
59.
Mona Saleh Ehab Essawy Mohamed Shaalan Shaaban Osman Fatma Ahmed Mansour El-Matbouli 《Marine drugs》2022,20(7)
Marine bio-sourced chitosan nanoparticles (CSNP) are antimicrobial and immunomodulatory agents beneficial for fish medicine. Herein, dietary CSNP was investigated for the amelioration of the systemic inflammatory responses of an induced fish model. One hundred and forty-four rainbow trout were assigned to one pathogen-free and non-supplemented group (negative control), and three challenged groups: non-supplemented (positive control), CSNP-preventive, and CSNP-therapeutic. After a feeding experiment extended for 21 days, the organosomatic indices (OSI) and molecular aspects were assessed. After a challenge experiment extended for further 28 days, CSNP-therapeutic intervention was assessed on fish survival and systemic inflammatory responses on pathology, histo-morphology, and molecular aspects. With CSNP administration, OSI nonsignificantly decreased and the relative expression of targeted inflammatory-mediator genes was significantly increased. The CSNP-therapeutic fish showed an RPS of 80% as compared to the positive control group, and CSNP-therapeutic administration retained the highest gene expression augmentation up to 28 days after the challenge. Notably, the splenic reticulin fibers framework of the CSNP-therapeutic group retained the highest integrity among the groups during the infection. After recovery, reticulin fibers density in the CSNP-therapeutic samples was significantly higher than in the negative control group, which indicates high innate immunity. Thus, CSNP showed promising biotherapeutic features enhancing fish resistance against infections. 相似文献
60.