米根霉菌丝球半连续发酵产乳酸的工艺研究

采用单因素试验和正交试验设计,以乳酸质量浓度及菌丝形态为考察指标,对米根霉首批发酵培养基及补料培养基进行优化,得到适于米根霉半连续发酵的培养基,建立了米根霉半连续发酵工艺,并进行米根霉半连续发酵产乳酸的稳定性试验.得到首批培养基参数为葡萄糖120 g/L,(NH_4)2SO_4 2 g/L,NaH_2PO_4 0.16 g/L,KH_2PO_4 0.14g/L,MgSO_4·7H_2O 0.2 g/L,ZnSO_4·7H_2O 0.22 g/L,CaCO_3 60g/L;补料培养基参数为葡萄糖100g/L,(NH_4)_2SO_4 2 g/L,KH_2PO_4 0.1 g/L,ZnSO_4·7H_2O 0.33 g/L,MgSO_4·7H_2O 0.15 g/L,CaCO_3 50 g/L,摇瓶重复稳定发酵30批次,罐发酵重复稳定发酵20批次,葡萄糖转化率最高达到86%.     

黑曲霉发酵滤液杀食用菌线虫活性初探

对灭菌的黑曲霉发酵滤液杀线虫作用进行了研究,找到经济有效的发酵滤液培养基为豆芽汁培养基。不同浓度、不同pH值的发酵滤液均能影响其杀线效果。pH为3．0的发酵滤液原液,杀线作用及抑制线虫虫卵孵化均达100％;当pH调为5．0时,杀线校正死亡率仍达73．90％;pH5．5时,杀线校正死亡率下降到8．15％。发酵滤液原液稀释到4倍液时,杀线校正死亡率仍达60．47％;稀释6倍液时下降至25．92％。在蘑菇栽培的防治线虫试验中,蘑菇栽培料添加发酵滤液后能减少线虫的数量,同时还具有促进菌丝生长的作用;仅加发酵滤液处理比未加发酵滤液及线虫处理的生物转化率提高76．30％,加发酵滤液及线虫处理比仅加线虫处理的则提高81．41％。     

水稻白叶枯病菌GX1329基因组文库的构建及含编码TAL效应物基因的克隆的分离

由革兰氏阴性细菌水稻白叶枯病菌引起的水稻白叶枯病是亚洲、北美以及非洲部分地区最严重的水稻病害之一,水稻白叶枯病可使水稻减产高达50％以上。研究表明水稻白叶枯病菌的毒力主要依靠三型分泌系统所分泌的效应物。为了解水稻白叶枯病菌广西菌株GX1329中含有avrBs3／pthA家族基因的情况,本研究应用Alu I部分酶切其基因组DNA,构建了含有736个克隆的菌株GX1329的基因组文库。BamHI酶切分析随机挑取的15个文库克隆表明,克隆的外源DNA随机性良好,克隆的最小片段为27．7kb,最大为58．5kb,平均大小为39．9kb,文库克隆容量约为2．8×10^3Mb,该文库中包含基因组中任一个基因的概率为99．4％。利用来自水稻白叶枯病菌菲律宾菌株PX086的无毒基因avrXa10的第252位～第486位核苷酸序列作为探针,通过菌落原位杂交从GX1329基因组文库中筛选到37个含avrBs3／pthA家族基因的克隆。再通过Southern杂交分析,得到了17个独立克隆。这17个克隆中至少含有13个不同的avrBs3／pthA家族基因。这些基因在GX1329基因组中有的单独存在,有的两个或两个以上串联存在。本工作基本上明确了菌株GX1329基因组中avrBs3／pthA家族基因的数量,为进一步研究菌株GX1329中avrBs3／pthA家族基因的功能奠定了基础。     

水稻白叶枯病菌拮抗细菌B56菌株的拮抗活性研究

B56 菌株经30 ℃振荡培养去菌体,其上清液经2 m ol/L 硫酸铵沉淀获得对水稻白叶枯病菌有拮抗活性的初提液。该初提液具有耐热性,经一定强度热处理后仍保持强的抑菌能力;抑菌效果在pH3～9 之间无明显差异;用胰蛋白酶、蛋白酶K 等处理后拮抗活性无明显变化。利用PhenylSepharose CL-4B疏水色谱柱和DEAE-Sephacel阴离子交换柱分离B56 菌株初提液, 得到一个具有拮抗活性的洗脱峰。该洗脱峰经SDS-PAGE检测发现具有一条分子量约为36 kD 的蛋白带。质粒提取和检测发现B56菌株存在一个稳定的内源质粒。     

部分云南粳稻品种的抗瘟性分类

 根据云南部分粳稻品种对7个菌系的反应型，将596个粳稻品种划分为35群。借助单基因鉴别品种，推断了50个品种的基因型。应用致病谱广的北方小种，筛选出一批新抗源，满足抗病育种对抗源的需求，也为系统的抗病基因分析奠定物质基础。     

普洱茶渥堆发酵中可降解咖啡碱真菌菌株的筛选和鉴定

为了在普洱茶渥堆发酵中筛选出可降解咖啡碱的菌株,采用咖啡碱液体筛选培养基从不同阶段普洱茶发酵样中筛选目标菌株,结合菌落特征、分生孢子结构以及18 S r DNA序列对目标菌株进行鉴定。并将目标菌株接种至茶叶内进行单菌种发酵,通过高效液相色谱法(HPLC)测定咖啡碱、茶碱、可可碱、3-甲基黄嘌呤等嘌呤碱含量。结果表明,在普洱茶发酵样中筛选出一株有效降解咖啡碱的菌株,此菌株在48 h内对咖啡碱的降解率为87.7%。经鉴定为聚多曲霉(Aspergillus sydowii),序列相似性为99.8%。在聚多曲霉茶叶单菌种发酵中,咖啡碱含量急剧下降,在发酵结束时仅占干物质重的(0.414±0.077)%;茶碱质量分数大幅度上升,由最初的不足0.1%上升至(2.129±0.246)%,成为主要的嘌呤碱;可可碱含量无显著变化(P0.05);3-甲基黄嘌呤有大幅度增加,增幅达130%。本文首次从发酵茶叶中筛选出可降解咖啡碱的菌株,探究了微生物发酵中咖啡碱的转化产物,为低咖啡碱普洱茶的开发提供了菌种。     

Diverse Secondary Metabolites from the Coral-Derived Fungus Aspergillus hiratsukae SCSIO 5Bn1003

Three new metabolites, including a cyclic tetrapeptide asperhiratide (1), an ecdysteroid derivative asperhiratine (2), and a sesquiterpene lactone asperhiratone (3), were isolated and identified from the soft coral-derived fungus Aspergillus hiratsukae SCSIO 5Bn₁003, together with 10 known compounds. Their structures were elucidated via spectroscopic analysis, X-ray diffraction analysis, and electronic circular dichroism calculations. In addition, the absolute configuration of 1 was determined by Marfey’s technique and an analysis of the acid hydrolysates using a chiral phase HPLC column. Among all the compounds, 6 and 8 showed medium cytotoxic activities against four tumor cell lines (SF-268, HepG-2, MCF-7, and A549), with IC₅₀ values ranging from 31.03 ± 3.04 to 50.25 ± 0.54 µM. Meanwhile, they strongly inhibited α-glucosidase activities, with IC₅₀ values of 35.73 ± 3.94 and 22.00 ± 2.45 µM, which were close to and even stronger than the positive control acarbose (IC₅₀ = 32.92 ± 1.03 µM). Compounds 6–8 showed significant antibacterial activities against Bacillus subtilis, with MIC values of 10.26 ± 0.76 µM, 17.00 ± 1.25 µM, and 5.30 ± 0.29 µM, respectively. Compounds 9 and 12 exhibited potent radical scavenging activities against DPPH, with IC₅₀ values of 12.23 ± 0.78 µM and 7.38 ± 1.16 µM. In addition, asperhiratide (1) was evaluated for anti-angiogenic activities in the in vivo zebrafish model, which showed a weak inhibitory effect on intersegmental vessel (ISV) formation.     

膨胀石墨颗粒对黑曲霉生长的影响

以-60~+100目和-100~+200目膨胀石墨为添加剂加入到PDA培养基中,观察对黑曲霉的作用,结果发现:在不同培养时间内,加入膨胀石墨的培养基中黑曲霉菌落直径均大于对照黑曲霉菌落直径,加入-100~+200目膨胀石墨的培养基黑曲霉菌落直径均略微小于+100目膨胀石墨,表明膨胀石墨对黑曲霉生长有促进作用,大尺寸膨胀石墨对黑曲霉的生长促进作用优于小尺寸膨胀石墨。     

黑曲霉A9葡萄糖氧化酶的酶学性质研究

为研究葡萄糖氧化酶的酶学性质,对黑曲霉A9发酵液提取纯化,酶蛋白达到电泳纯,然后对纯酶进行酶学性质研究。结果表明:葡萄糖氧化酶的分子量为138 200 Da,糖基化程度为2.67%,最适pH为6.7,最适温度为30℃,该酶的pH稳定范围较宽,而且热稳定性很好,Ag+、Hg2+、亚硫酸氢钠对酶有强烈的抑制作用,该酶对葡萄糖的Km值为35.74 mmol/L。该研究表明,黑曲霉葡萄糖氧化酶具有潜在的应用价值,最适合应用于食品、医药及生物等领域。     

水稻白叶枯病菌hisF基因的克隆及功能初析

根据黄单胞菌hisF基因的同源性设计简并引物,采用PCR方法从水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)中克隆了hisF同源基因,命名为hisFXoo.NCBI网站蛋白质保守结构域搜索表明,HisFXoo属于组氨酸生物合成蛋白家族的一员,具有与其他HisF蛋白相似的结构.序列比较显示,该基因在黄单胞菌中是相对保守的.同源性搜索比较显示,与水稻条斑病菌(Xoryzae pv.oryzicola,Xooc)的hisF(登录号:DQ372107)同源性高达98%.通过同源重组的方法,构建了hisFXoo的插入突变体,在NA+Amp平板上筛选后,并且经过PCR及Southern杂交验证插入正确.在MMX基本培养基中生长测定发现,hisF突变体生长能力明显下降,证明hisF基因与Xoo生长代谢相关.但是,该突变体仍具有致病性,并且毒力与野生型菌株没有明显差异.