羊朊蛋白基因的克隆和序列分析

分别从6只羊（3只藏绵羊和3只山羊）全血中提取基因组总DNA，用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白（PrP^c）基因，并克隆到pMD 18-T载体。序列分析表明所克隆的羊PrP基因片段大小为771bp，包含了羊朊蛋白基因的完整编码区序列，为包含在单一外显子内的完整开放阅读框，其与国外报道的已知序列基本相同。所克隆的羊PrP基因含5个短而富含G-C的元件，可编码八肽Pro—His—Gly—Gly—Gly—Trp-Gly—Gln或九肽Pro—Gln／His—Gly—Gly—Gly-Gly—Trp—Gly—Gln。这些PrP基因序列相比较，其核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性分别在99．0％～100．0％和98．1％～100．0％之间。共发现17个碱基替换，其中6个为同义码替换、11个为异义突变。异义突变中，除SY200301～SY200303的S240P和MY200301的M112T外，其余均位于PrP氨基酸125～228的C-端球形结构区，分别为MY200301的G129S突变、MY200302的T191R突变、MY200303的G127S突变及SY200302和SY200303的H143R和R211G。6个羊PrP基因均为密码子136、154和171的PrPARQ等位基因。     

Flumequine in the Goat: Pharmacokinetics after Intravenous and Intramuscular Administration

The pharmacokinetics of flumequine, administered intravenously and intramuscularly at a single dose of 20 mg/kg, was investigated in healthy goats. After intravenous injection, flumequine distributed rapidly (t1/2alpha = 0.87+/-0.15 h) but was eliminated slowly (t1/2beta = 7.12+/-1.27 h); mean clearance (Cl) and volume of distribution (Vdss) were 0.32+/-0.03 (L/(h x kg) and 1.22+/-029 (L/kg), respectively. After intramuscular administration, the peakserum concentration (Cmax = 7.40+/-0.5 microg/ml) was reached in about 1.5 h (Tmax) and bioavailability was about 93%. Estimated flumequine serum levels following repeated intramuscular administration of the aqueous suspension used in the study (7.23+/-0.7 microg/ml and 4.82+/-0.47 microg/ml at intervals of 8 and 12 h, respectively) indicated that to maintain serum levels above MIC values for susceptible bacteria a dosage regimen of 20 mg/kg every 12 h is necessary by the intramuscular route.     

山羊MT-Ⅲ分子特性研究

通过设计特异性引物MT-ⅢSP1和MT-ⅢSP2,采用RT-PCR方法分别从奶山羊和绒山羊脑组织中克隆出金属硫蛋白-Ⅲ(MT-Ⅲ)基因编码区全序列,并利用生物信息学方法分析山羊MT-Ⅲ的分子特性.结果表明:奶山羊和绒山羊MT-Ⅲ基因编码区全长均为207bp,编码68个氨基酸,其中含19个半胱氨酸,不含芳香族氨基酸和组氨酸;BLAST搜索结果表明,MT-Ⅲ编码氨基酸序列在物种间高度保守,含有MT-Ⅲ特有的MDPET、C-X-C、C-C-X-C-C、C-X-X-C、KKS(X为非Cys外的其它氨基酸)等保守的短肽结构;生物信息学分析表明,山羊MT-Ⅲ无明显疏水结构和跨膜结构域,无信号肽,是一种细胞质蛋白.山羊MT-Ⅲ蛋白质二级结构主要为不规则卷曲,仅在第40-50位氨基酸残基间有明显的螺旋结构;三级结构预测表明,山羊MT-Ⅲ的三级结构由α和β2个结构域组成,通过KKS连接,且MT-Ⅲ氨基酸序列中第30位保守的半胱氨酸在反刍动物中均突变成丝氨酸,位于β-结构域.     

羊口蹄疫免疫程序初探

采用间接血凝试验对在不同时间、使用不同剂量疫苗加强免疫的羊进行血清抗体测定 ,以建立和探讨羊口蹄疫 (FMD)的免疫方法和程序。试验将羊随机分成A ,B ,C ,D 4组。A组在首免后第 1 5天加强免疫 ,B ,C ,D组在首免后第 2 5天加强免疫 ,4个组的免疫剂量分别为 2 0 ,1 5 ,2 0和 2 5mL/只。在首免的第 0 ,1 1 ,2 1 ,31 ,41 ,55 ,70 ,90和 1 2 0天采血 ,检测血清中的抗体水平。B ,C ,D 3组的抗体效价显著地高于A组 (P <0 0 5) ,且持续时间较长。在B ,C ,D 3组之间 ,C组抗体效价显著地高于B组和D组 (P <0 0 5)。结果表明羊口蹄疫的最佳免疫程序为 :首免后 2 5d加强免疫 ,剂量为 2 0mL/只。     

山羊乳腺上皮细胞培养体系的建立

为研究乳腺上皮细胞增殖和分化特性及其基因表达的分子机制 ,建立了山羊乳腺上皮细胞培养体系。用无菌手术法从健康第二胎泌乳期山羊乳腺取得组织块 ,在体外条件下用组织块法进行原代培养。基础培养液用 RPMI1 6 4 0 ,含胎牛血清 1 5 0 m L/ L,添加 EGF(1 0 μg/ L)、胰岛素 (0 .1 m g/ L)、E2 (1 μg/ L)、氢化可的松 (0 .1mg/ L)、孕酮 (1 m g/ L)、青霉素 (0 .1 g/ L)及链霉素 (0 .0 5 g/ L) ,在铺有胶原的塑料培养板上培养。从细胞接种存活率、细胞群体倍增时间、细胞生长曲线和细胞分裂指数 4个方面考察了乳腺上皮细胞的生物学性状。结果表明 ,在此培养体系中 ,山羊乳腺上皮细胞生长良好 ,增殖旺盛。细胞产物电泳及蛋白印迹分析结果表明 ,培养的细胞为山羊乳腺上皮细胞 ,并具有表达山羊酪蛋白的功能     

山羊子宫内膜基质细胞的分离培养及鉴定

对山羊子宫内膜基质细胞进行分离与体外培养,研究其生长特性,并对其进行免疫细胞化学染色鉴定。结果表明,山羊子宫内膜在37℃条件下,以2 g／L的胶原酶Ⅰ型消化3～4 h效果最好;采用过滤—低速离心—沉降相结合的方法分离山羊子宫内膜基质细胞效果较好,所得细胞在培养后0．5 h开始贴壁,培养12 h后,可见梭形和多角形2种形态的细胞,3～4 d呈网状铺满皿底,有明显的重叠生长现象;免疫细胞化学染色显示这2种形态的细胞均表达波形蛋白,阳性率可达95％以上,不表达角蛋白。说明采用本文所述的消化和分离方法可获得高纯度的子宫内膜基质细胞。     

控制光照对陕北白绒山羊体重和绒毛长度的影响研究

 研究控制光照对陕北白绒山羊体重和绒毛长度的影响研究,以期为陕北白绒山羊光控增绒技术的示范推广提供基础参数和理论依据。将52只适繁陕北白绒山羊母羊按照体况、体重相近的原则随机分为对照组和试验组,其中对照组采用自然光照;试验组通过采用专门的光控羊舍将光照控制为7 h;对照组和试验组母羊均自由采食、饮水,常规管理。结果表明：（1）控制光照的试验组母羊体重和平均日增重稍高于对照组,但光照时间对母羊体重和平均日增重并没有显著影响（P>0.05）;（2）试验组母羊绒纤维长度较对照组提高了67.24%,差异显著（P<0.05）。     

陇东优质高产绒山羊选育的研究

通过对陇东绒山羊的选育和提高,组建了陇东优质高产绒山羊群,其成年公母羊产绒量分别为693.75±135.29 g和493.46±93.78 g,和陇东绒山羊新品系公母羊相比,产绒量显著提高（P〈0.05）;公母羊羊绒细度分别为15.03±0.85μm和14.56±0.76μm,和陇东绒山羊相比,差异不显著（P〉0.05）;公母羊羊绒的自然长度分别为5.89±0.63 cm和5.26±0.37cm,和陇东绒山羊相比,差异显著（P〈0.05）。因此,陇东优质高产绒山羊产绒量高,羊绒纤维细、长、延伸性好,属优质山羊绒,符合国际羊绒精纺要求并达到了同类纤维理想水平。     

4个山羊品种BMP6基因部分片段的多态性分析

根据GenBank发表的绵羊骨形态发生蛋白6（bone morphogenetic protein 6,BMP6）基因部分序列所包含的外显子5、6、7和小鼠BMP6基因外显子5、6、7序列设计3对引物,采用PCR SSCP技术检测BMP6基因外显子5、6和7在济宁青山羊、安哥拉山羊、波尔山羊、内蒙古绒山羊4个山羊品种250个个体中的单核苷酸多态性。结果发现这3对引物的扩增片段在检测的4个品种中均无多态性,说明所检测的BMP6基因外显子5、6、7序列比较保守。     

青海高原10种草食家畜血红蛋白的比较电泳

采用醋酸纤维素薄膜电泳法对青海高原10种草食家畜的血红蛋白(Hb)进行了比较研究。结果表明:(1)牛有三种Hb成分(A、B和C),构成HbA,AB,AC,B和BC五种表型;(2)牦牛有Hb F和S两种成分,构成单一的Hb FS型;(3)双峰驼有三种Hb成分(A,B_1和B_2),构成Hb A-B_1和A-B_1B_2两种表型;(4)梅花鹿和马鹿呈单一的Hb A型;(5)白唇鹿有Hb F和S两种成分,构成单一的Hb PS型;(6)马有Hb A_1和A_2两种成分,构成Hb A_1,Hb A_1~+A_2~-,Hb A_1A_2和Hb A_1~-A_2~+四种表型;(7)驴呈单一的Hb A_2型;(8)绵羊有三种Hb成分(A,B和C),构成Hb A,AB,B和AC四种表型;(9)山羊呈单一的Hb A型;(10)牛Hb B和马Hb A_1成分的相对电泳迁移率最大,双峰驼Hb B_2成分的迁移率最小。