山羊CMKLR1基因的克隆、表达及其与肌内脂肪的相关性研究

试验旨在克隆山羊CMKLR1基因序列并进行生物信息学分析,研究其表达与肌内脂肪（IMF）沉积的相关性。采集山羊皮下脂肪组织,应用RT-PCR克隆山羊CMKLR1基因序列;以GAPDH（GenBank登录号：AJ431207.1）为内参基因,实时荧光定量PCR检测其在山羊不同组织中的表达量及在肌肉组织中的时序表达谱（以肝脏表达量为基准）;测定肌肉组织中的IMF含量,分析其与CMKLR1 mRNA表达量的相关性。结果显示,克隆获得了山羊CMKLR1基因,1 089 bp的CDS区,GenBank登录号：KT165374。实时荧光定量PCR分析显示,CMKLR1基因在24月龄山羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪、背最长肌、股二头肌和臂三头肌中均存在不同程度的表达,其中在肺脏中表达量显著高于其他组织（P< 0.05）;CMKLR1基因在1~3和24月龄的山羊背最长肌、臂三头肌和股二头肌中表达趋势相同,均是在股二头肌中表达量最高,而8~10月龄则是在臂三头肌中表达量最高。山羊IMF含量以24月龄背最长肌含量最高。山羊背最长肌、股二头肌和臂三头肌中CMKLR1 mRNA表达与IMF含量相关性不显著（P> 0.05）。CMKLR1基因不参与山羊IMF沉积作用,试验结果为进一步研究CMKLR1基因奠定理论基础。     

博格达绒山羊KAP13.1基因的多态性研究

[目的]寻找影响毛绒性状的候选基因,探讨该基因是否能作为影响毛绒性状的候选基因之一.为后期新疆山羊地方品种的分子育种提供一定的理论依据.[方法]试验以随机采集的279个博格达绒山羊个体的血样为材料,利用PCR-RFLP、DNA测序等技术研究分析博格达绒山羊KAP13.1基因的多态性.[结果]博格达绒山羊KAP13.1基因具有多态性,KAP13.1基因存在三种基因型:TT、GT和GG,且处于Hardy-Weinberg非平衡状态(P＞0.05),KAP13.1基因编码区片段在基因组c.186位置发生错义突变T＞G,导致氨基酸p.48Leu＞Arg的变化.[结论]KAP13.1基因可能是影响绒山羊产绒性状的候选基因之一.     

猕猴桃奶豆腐加工工艺及配方研究

开发一种新型的适合大众口味的高营养奶制品。以山羊奶为主要原料,以适量的猕猴桃汁和白砂糖等作为辅料,通过工艺改进和配方优化,加工一种新型山羊奶制品。得出猕猴桃奶豆腐的加工工艺为:原料乳(制作奶皮子后的脱脂乳)→杀菌→添加发酵剂→自然凝乳→切割→排乳清→升温搅拌→保温搅拌→静置→排乳清→切碎→压榨→成形→冷藏。配方为:鲜羊奶75%,猕猴桃汁17%,白砂糖8%,再加入少量的甜味剂和调味剂。研制的猕猴桃奶豆腐既有羊奶的乳香、猕猴桃的酸甜,同时更富于其更全面的营养物质。     

崂山奶山羊DGAT1基因多态性及与泌乳性状的关系

【目的】探讨崂山奶山羊DGAT1基因与泌乳性状的关系。【方法】以175只崂山奶山羊泌乳母羊为试验群体,利用PCR-SSCP方法和候选基因直接测序法检测DGAT1-P1(包含第8外显子)、DGAT1-P2(5’调控区内)、DGAT1-P3和DGAT1-P4位点在该群体中的多态性,并采用最小二乘方法分析DGAT1-P4位点多态性与泌乳性状之间的关联效应。【结果】崂山奶山羊DGAT1-P1和DGAT1-P2位点不存在多态性。对崂山奶山羊高乳脂率和低乳脂率个体的DGAT1-P3位点核苷酸序列比对,发现在序列600bp处即DAGT1-P4位点上存在着A→G的单核苷酸替换,对乳脂率有显著影响(P0.01),其中AA基因型为崂山奶山羊乳脂率性状最有利的基因型,A等位基因对乳脂率性状有正效应。【结论】在崂山奶山羊中发现候选基因DGAT1存在多态性,且对乳脂率性状有显著效应,为开展崂山奶山羊的标记辅助选择提供了依据。     

Effect of addition of soybean trypsin inhibitor to colostrum on immunological status in goat kids

The aim of the study was to evaluate the influence of soybean trypsin inhibitor (TI) on immunoglobulin G (IgG) serum levels and growth in neonatal goat kids. Twenty‐four newborn kids were fed with natural colostrum (group A), and 24 kids received the same colostrum with 1 g of TI per litre (group B). Blood samples were obtained at birth and on days 1, 2 and 4 of life to analyze serum proteins, IgG and haematological parameters. There were no clinical signs of disease and no significant differences in body weight between the groups. Haematological parameters were not affected by treatment. The peak of serum IgG was reached at 24 h of life, but no effects of soybean TI was observed on serum IgG levels. The apparent efficiency of absorption of IgG was similar in both groups (group A 24.5% vs. group B 25.2%, p > 0.05). The addition of TI to colostrum did not change the concentration of serum proteins and their fractions in goat kids. The correlation between serum IgG and γ‐globulin was positive and significant (p < 0.01, r = 0.64) in group A, but not in group B (p > 0.05, r = 0.08), suggesting a negative influence of soybean TI on γ‐globulin absorption. These results show that addition of soybean TI to colostrum did not improve the performance or immunological status in goat kids.     

西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺组织差异基因的筛选

旨在利用抑制性削减杂交(SSH)技术筛选西农萨能奶山羊泌乳中期和后期的差异表达基因,并用实时定量PCR(Q-PCR)分析差异基因的表达丰度,探讨奶山羊不同泌乳阶段乳腺组织的基因表达规律。本研究以西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺组织的mRNA互为检测子(Tester)和驱动子(Driver)构建cDNA消减文库(M-L和L-M),随机挑选克隆测序,进行序列比对分析,并检测部分差异基因在乳腺组织中的表达丰度。结果,成功构建了泌乳中期和后期的cDNA文库,随机挑选30个克隆测序,得到M-L和L-M文库中与细胞凋亡、抗氧化、脂类代谢、能量代谢等生理过程相关的差异基因,对其中的6个基因进行实时定量分析,发现5个均为阳性克隆,表达水平增加了1.3~5.5倍不等。结果表明,利用SSH技术成功构建了泌乳中期和后期乳腺组织正反向消减cDNA文库,筛选出24个差异基因,为进一步研究奶山羊乳腺组织基因调控机理奠定了基础。     

山羊子宫内膜上皮细胞转染pCI—neo—hTERT质粒后的永生化

为获得大量的、具有高度同一性和表型功能正常的山羊子宫内膜上皮细胞（EEC）,本试验将含人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因的真核表达质粒pCI—neo—hTERT导入原代山羊EEC中,筛选稳定转染的细胞克隆,进行表型鉴定,利用免疫细胞化学方法检测hTERT导入后细胞端粒酶活性的表达情况,探讨转染后细胞的生长特性。结果显示,转染后获得的阳性克隆细胞及其传代细胞呈明显铺路石状。与原代细胞形态一致,具有接触抑制性;角蛋白检测阳性;细胞具有较高的端粒酶活性,目前已传至50代仍稳定增殖;100nmol／L的雌二醇（E2）可促进该细胞的增殖;50,100nmol／L的孕酮（P4）可明显抑制该细胞的增殖。这表明hTERT导入山羊EEC后,可使其重建端粒酶活性,从而获得大量的、具有高度同一性和表型正常的细胞。     

大肠杆菌性子宫内膜炎对山羊血液和子宫内膜的影响

用致病性大肠杆菌经子宫角插管灌入子宫腔,以建立山羊子宫内膜炎疾病模型。经检测发现,致病性大肠杆菌在子宫静脉血液中呈一过性存在;子宫卵巢静脉和颈静脉血液中性粒细胞数量明显增加。其中,颈静脉血液嗜中性粒细胞增多明显于子宫静脉血液,颈静脉血液淋巴细胞降低明显于子宫静脉血液。病羊子宫黏膜损伤、炎性细胞浸润,子宫内膜上皮分泌细胞微绒毛和纤毛成片或部分脱落。     

山羊卵巢颗粒细胞差异表达基因消减文库的建立

为了从单卵泡水平建立非闭锁大小卵泡颗粒细胞基因表达的消减文库,选择繁殖性能正常、空怀高繁殖力黄淮山羊2只,以氯前列烯醇处理40h后取卵巢,计数卵泡并测量卵泡直径,钝性分离采集卵泡颗粒细胞,置于液氮内保存,取样后的卵泡部分组织采用原位缺口末端标记法(TUNEL)进行闭锁鉴定。选择直径6和4mm非闭锁卵泡,提取颗粒细胞mRNA,扩增cDNA,监测抑制消减杂交及其文库构建的试验环节。结果表明:消减文库的阳性克隆测序成功率100%,从正向文库中随机挑取96个克隆进行差异表达的筛选,发现12个全新表达序列标签;应用RT-PCR对已知序列的抑制素βA亚基基因(INHBA)和谷胱甘肽S-转移酶A1基因(GSTA1)进行表达水平测定,证实了颗粒细胞2个基因mRNA的表达模式与差异显示的结果相同。表明消减文库构建成功。     

夏季山羊精液不同保存方法研究

假阴道法采集重庆市大足黑山羊精液,分析鲜精精液品质,采取随机单位组两因素三水平无重复观察值方差分析试验设计,应用常温保存(20℃)、低温冷藏(4℃)和精液冷冻3种方式进行精液保存效果及对精液品质影响的研究.两因素分别为稀释液和精子密度,每个因素选择3个水平,以生存指数作为评价精液保存效果的指标.新鲜精液采集后检测发现品质良好,活力均值为0.87,畸形率为9.45%,符合GB20557-2006做山羊冻精标准.与去年同期比较,发现高温可造成精液品质下降.稀释液对3种保存效果影响差异均不显著(p0.05),精子密度对常温保存和低温冷藏影响差异极显著(p0.01),对冷冻影响差异不显著(p0.05).不同处理均造成精液品质下降,其中冷冻造成影响极显著.常温和冷藏下以稀释液A1、精子密度1×109个/mL保存较好,冷冻保存以稀释液A2、精子密度2×108个/mL较好.