农杆菌与质粒DNA子房注射法在棉花转基因研究中的应用

为了研究农杆菌和质粒DNA两种子房注射法对普通棉花品种的转化效率,以8891棉花为材料,分别在三亚和常德两地进行了转化试验。结果表明：与质粒DNA注射相比,三亚地区农杆菌注射的转化效率高1.25个百分点;但农杆菌子房注射的落铃率高,获得的种子相对较少;而在不同的地点试验,常德地区的落铃率显著高于三亚地区;而质粒DNA直接注射的成铃率更高,虽然转化率相对较低,但也能获得有效的转化植株。     

根癌农杆菌介导水稻遗传转化研究进展及展望

自1994年建立了农杆菌介导的粳稻高效遗传转化体系以来,在短短十几年里取得了飞速发展。概述了农杆菌介导水稻遗传转化的研究历史和原理、影响农杆菌介导水稻转化体系的重要因素、转基因水稻的特点和外源基因的稳定性,并探讨了农杆菌介导水稻遗传转化研究中存在的问题与对策。     

Transgenic sugar beet tolerant to glyphosate

Phenology (i.e. the influence of environment on ontogeny) is the most important single factor influencing crop adaptation. The timing of flowering is particularly important since it largely determines when annual cereal, pulse and oilseed crops will subsequently be ripe for harvest. Two environmental factors are of overriding importance in the induction of flowering – photoperiod (daylength) and temperature. In seeking to predict times from sowing to flowering, f, it has proved profitable to analyse photothermal responses in terms of the rate of progress from sowing to flowering, 1/f. This paper summarises the advantages of a model based on rates rather than the traditional approach based on f. Over a wide range of photothermal regimes, the model involves just six coefficients, all of which (and their derivatives) have clearly defined biological meaning. Of paramount importance too is that the coefficients are not affected by the environment; they are genetic characters which determine phenotypic responses to the environment in a quantitative and predictable way.     

玉米圆斑病菌非核糖体肽合成酶6基因ATMT敲除载体构建

以双元载体pPZP100为骨架,通过酶切、连接将标记基因(潮霉素-绿色荧光蛋白,HygR-GFP)及碳色长蠕孢(Helminthosporium carbonum)非核糖体肽合成酶基因(HcNPS6)侧翼序列插入目标载体pPZP100,构建HcNPS6基因敲除载体,并采用冻融法将pPZP100HygR-GFPHcNPS6转入农杆菌菌株AGL-1。挑取经氨苄/氯霉素筛选的重组子进行菌落PCR鉴定。结果表明,敲除载体已成功转入农杆菌AGL-1。     

狗蔷薇类原球茎遗传转化体系的建立

在本实验室建立的狗蔷薇（Rosacanina）类原球茎（PLB）再生途径基础上,以类原球茎为转化受体,采用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens,GV3101菌株）介导法,通过评价类原球茎GUS基因瞬时表达率,采用正交试验设计优化狗蔷薇遗传转化条件,建立遗传转化体系。最佳转化条件为：用OD600值为0．6的农杆菌菌液侵染狗蔷薇类原球茎30min,然后在含有100μmol／L乙酰丁香酮的MS培养基上共培养2d,利用此优化的转化系统,经组织化学染色及PCR检测获得了转GUS基因阳性植株。     

解淀粉芽胞杆菌JK10防治蓝莓根癌病的机理研究

本研究旨在揭示解淀粉芽胞杆菌JK10防治蓝莓根癌病的生防机制。利用改良发酵培养基对解淀粉芽胞杆菌JK10菌株进行发酵,用盐酸沉淀、硫酸铵沉淀、乙酸乙酯萃取、大孔树脂吸附四种方法对JK10发酵液中的活性物质进行分离,利用MALDI-TOF-MS对活性最高的粗提物进行分析明确其种类;对JK10进行绿色荧光蛋白标记,明确其在蓝莓根际土及组织内的定殖能力;使用高通量测序技术对蓝莓健康根组织、根癌病根组织及JK10处理的根癌病根组织内生细菌群落结构进行分析。结果表明,四种方法得到的粗提物对根癌土壤杆菌均有良好的拮抗效果,其中大孔树脂吸附法得到的粗提物抑菌活性与产率均最高。JK10发酵液中能检测出bacillomycin D和fengycin两类脂肽类化合物、大环内酯类抗生素Divergolide D和聚酮类化合物Bacillaene;菌株JK10能够稳定定殖于蓝莓根际土、蓝莓根组织细胞间隙和蓝莓叶中,定殖数量在接种35 d后趋于稳定,在蓝莓根际土和蓝莓叶中分别为1×10⁶、4.0×10⁵cfu/g;蓝莓根癌病根组织在施入生防菌JK10菌株后,相比自然条件下蓝莓根癌病根组织内生细菌菌落结构发生改变,物种多样性增加,结构更加趋向于健康蓝莓根组织内生细菌。综上所述,解淀粉芽胞杆菌JK10通过产生对蓝莓根癌病菌有抑制活性的物质,稳定定殖在蓝莓根际土及蓝莓根、叶组织中,改变蓝莓根内生细菌的群落结构而达到防治蓝莓根癌病的目的。     

利用农杆菌介导Bar基因转化稻瘟病菌*

 用携带除草剂抗性基因（Bar基因）的质粒pBIG4MRBrev和农杆菌EHA105，建立了农杆菌介导Bar基因转化稻瘟病菌的转化体系，使稻瘟病菌菌株95－8－36得到高效转化，且能稳定表达。     

甘肃省啤酒花根癌病病原鉴定

从甘肃省啤酒花主产区调查采集的根癌病瘿瘤上和病土壤中分离获得１５个细菌菌株。经接种啤酒花、番茄、甜菜、向日葵等植物进行致病性测定，其中有４个菌株均能诱致典型的根癌症状，且菌株间致病力无明显差异。用此致病菌株进行细菌染色反应、形态观察、培养性状、生理生化反应等测定，基本确定甘肃省啤酒花根癌病的病原细菌为根癌土壤秆菌生物型Ⅰ。     

Ri质粒转化烟草影响因素的研究

Ri质粒转化烟草形成发状根的效率，受发根农杆菌种类、浓度、生理状态及烟草品种、叶片发育时期、叶片在菌液中浸泡时间、共培养时间、基本培养基及pH值、乙酰丁香酮不同加入方式等多种因素的影响．采用稀释5倍的处于对数生长期的ATCC15834菌株，感染Sumxun无菌苗幼嫩叶圆片5min，在pH值5，8的MS培养基上共培养2d，可达最大转化效率93.1％     

农杆菌介导雪莲PBP基因对棉花的遗传转化研究

雪莲磷脂酰乙醇胺结合蛋白（Phosphatidyl ethanolamine-binding family protein, PBP）基因表达产物与细胞膜的冷稳定性有关，可能在植物抗寒方面起一定作用。本研究将XLPBP基因以农杆菌介导的方法转化新陆早17号、新陆早13号、新陆早1号3个品种陆地棉，通过对不同激素浓度、预培养时间、菌液浓度和浸菌时间等因素对转化培养物的影响以及茎段外植体对卡那霉素（Kan）的敏感性等方面的探讨，确定了新陆早13号外植体材料（茎段）的最佳转化条件，即：在OD600为0．4的农杆菌菌液中侵染10min，在茎段最适培养基（含0．1mg／LKT和0．1mg／L2，4-D，pH5．8）上进行预培养2d，共培养2d，转至不含选择压的培养基（含Cef 500 mg／L）上进行延迟培养7d，再进行选择培养，茎段愈伤分化达25％（诱导出愈伤组织的外植体数占接种的外植体数）以上；茎段转化适宜的选择压力为Kan 50 mg／L；在获得的抗性愈伤中8％左右经检测为GUS阳性。