根癌农杆菌介导的枇杷花药胚状体遗传转化中抗生素种类和浓度的研究

研究了安必西林、噻孢霉素和硫酸庆大霉素对根癌农杆菌EHA52的抑制效果以及对枇杷胚状体生长的影响。结果表明:安必西林、噻孢霉素浓度高于500 mg/L、硫酸庆大霉素浓度高于300 mg/L时,对农杆菌EHA52均有较好的抑制效果。但是,硫酸庆大霉素对枇杷胚状体的生长有很强的抑制效果。安必西林的浓度在800 mg/L时为最佳浓度。     

用共转化法培育无选择标记转基因植物研究进展

介绍了用农杆菌介导的共转化法培育无选择标记基因转基因植物的原理、方法、影响因素以及其国内外研究进展.     

提高马铃薯遗传转化体系再生频率的研究

为提高马铃薯遗传转化体系的再生频率,改进了受体薯片的消毒方法,解决了外植体易污染问题,使污染率几乎降低为零;共浸染时加入适量的乙酰丁香酮可以提高再生频率;适当降低芽分化培养基的激素水平,在外植体分化正常的情况下,节省了在激素上的资金投入;不同品种马铃薯片转化后的植株再生情况不同,津引薯8号微型薯出苗量大,而S1微型薯首批苗更好。综合以上改进措施,使再生频率由29%提高到60%。     

农杆菌介导葡萄糖氧化酶基因转化油菜

以甘蓝型油菜带柄子叶为转化受体材料,采用农杆菌介导法进行葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GO)基因的转化,经卡那霉素抗性筛选获得大量的不定芽.PCR检测结果显示其中22株呈阳性.淀粉-KI染色结果表明在转基因植株中检测到H2O2.在转基因植株×非转基因植株(F1代)中,卡那霉素抗性筛选显示86%的株系呈现典型的孟德尔单基因显性遗传.F1代盛花期茎秆菌核病活体接种结果证实,转基因植株后代菌核病抗性明显提高.证实GO基因已转入油菜植株中并得到有效表达.     

根癌农杆菌介导的叶用莴苣基因转化系统的建立

以叶用莴苣微茎尖为试材，在含有BA和NAA的MS液体培养基上旋转培养，诱导出大量愈伤组织；进一步分化培养，获得大量不定芽并生根；将愈伤组织碎块与根癌农杆菌共培养，对经卡那霉素筛选后所得到的再生植株进行X-Gluc染色，蓝色反应阳性率为80％，表明建立了叶用莴苣愈伤组织基因转化系统。     

根癌农杆菌对结球白菜的转化

为了给外源有用基因导入结球白菜并高效稳定地表达提供依据，以结球白菜的子叶－子叶柄为外植体，采用农杆菌共培养法把外源基因C58／pV11导入结球白菜，在选择最优的转化条件－根癌农杆菌侵染外植体15min，农杆菌培养和共培养时在培养基中均加入AS，培养基pH为5．2，共培养3d的条件下，获得转基因植株，其中抗性植株的抗草丁膦试验，转基因植株DNA的PCR及PCR－Southern斑点杂交鉴定等结果表明，50％的抗性植株的基因组中有外源基因的整合。     

黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因转化番茄的研究

通过根癌农杆菌介导，采用叶盘转化法，探讨了黄瓜花叶病毒外壳蛋白（CMV－CP）基因导入番茄栽培品种‘红宝石’的适宜条件。结果表明：适宜的卡那霉素（Km)浓度，根癌农杆菌浓度，根癌农杆菌感染时间以及共培养时间分别为35mg/L,D600约0.5,10-15min和2－3d；将诱导形成的抗性愈伤组织转接到含有35mg/L Km的分化培养基和生根培养基中使其分化不定芽和生根，获得了抗Km的番茄再生植株。对再生植株进行再欠离体培养抗Km鉴定和PCR分子检测，补CMV-C基因已导入番茄再生植株的基因组中。     

农标菌介导的花椰菜遗传转化体系研究

以花椰菜栽培品种“春秋”无菌苗的子叶和下胚轴为外植体 ,在携带 Ca MV Bari- 1基因 的根癌农杆菌菌种 GV310 1的介导下 ,对影响花椰菜遗传转化的诸因素进行了研究 ,建立了较为完善的转化体系 ,其转化率分别达 2 .31%和 2 .5 6 %。在这一转化体系中 ,首先将过夜培养的农杆菌用 MS无机盐液体培养基稀释 5倍或 10倍 ,感染经 2～ 3d预培养的子叶和下胚轴外植体 30 s,然后进行黑暗共培养 1d,外植体经表面灭菌后转接到含 5 0 0mg/ L 羧苄青霉素的分化培养基上。 3周后 ,将分化的不定芽切成 0 .5 cm见方的小块 ,接种在选择培养基上 ,经筛选的转化芽再诱导成苗     

根癌农杆菌Ⅵ型分泌系统关键组分ClpⅤ型ATPase基因表达及活性位点分析

细菌Ⅵ型分泌系统（type Ⅵ secretion system,T6SS）是近年发现的一种分布广泛且与细菌致病性密切相关的新型分泌系统,ClpⅤ型ATPase是不同细菌T6SS中均含有的关键保守组分,据推测可能为底物蛋白的分泌提供动力,但对其生化功能尚未进行深入鉴定。在本研究中,我们克隆了根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）C58中的ClpⅤ型ATPase基因atu4344并在大肠杆菌中表达,酶学检测证实了其ATPase活性,定点突变分析发现K232/608和E299/675突变体均丧失ATPase活性,表明Walker A模体和Walker B模体与其活性密切相关。这是首次对植物病原细菌T6SS中的ClpⅤ型ATPase进行生化鉴定和突变分析研究。     

棉花黄萎病菌致病的分子机理

阐述了大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb)产生的细胞壁降解酶、蛋白酶和毒素在致病中的作用及微菌核形成机制,全面分析了基因组学途径、RNA干涉和农杆菌介导的转化等真菌功能基因组学技术在大丽轮枝菌致病分子机理研究上的进展.