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31.
For the use of gene expression for nutritional diagnosis, a rapid and easy method of detecting levels of gene expression was proposed. Agrobacterium tumefaciens carrying the GUS reporter gene was injected into intact tobacco leaves with a plastic syringe, and transient GUS expression was determined. GUS activities were reproducible in young leaves. 相似文献
32.
Improved protocol for Agrobacterium mediated transformation of tomato (Lycopersicon esculentum) Micro-Tom was developed to use in corporation of the carotenoid biosynthetic genes CsZCD (Crocus zeaxanthin 7,8-cleavage dioxygenase). From these experiment, a transformation methodology using explants from cotyledons cultured for 1 day on the medium with zeatin 2 mg/L, IAA 0.1 mg/L, carefully submerged in the Agrobacterium inoculum for 20 min, then concultured with the agrobacterium for 3 days on the same medium, followed by a transfer to the same medium with 500 mg/L cefotaxin for 3 days and then by a transfer to the same medium with 100 mg/L kanamycin and 500 mg/L carabenillin for 6–8 weeks and resulted in a greater than 20% transformation efficiency in the concentration of Agrobacterium OD600 = 0.2 tested. In this transformation method, no feeder layers were used and the subculture media was minimal. Among the Agrobacterium concentrations of OD600 = 0.2, 0.5 and 1.0, the best transformation efficiency, 20.87%, was obtained by using OD600 = 0.2, which was significantly higher than that of OD600 = 1.0. The presence of the inserted target genes was checked using a rapid and efficient PCR test. The protocol was successfully employed in the production of transgenic Micro-Tom tomato containing the carotenoid biosynthesis CsZCD under constructive promoter. This procedure represents a simple, efficient and general means of transforming tomato. 相似文献
33.
34.
根癌农杆菌对结球白菜的转化 总被引:1,自引:0,他引:1
为了给外源有用基因导入结球白菜并高效稳定地表达提供依据,以结球白菜的子叶-子叶柄为外植体,采用农杆菌共培养法把外源基因C58/pV11导入结球白菜,在选择最优的转化条件-根癌农杆菌侵染外植体15min,农杆菌培养和共培养时在培养基中均加入AS,培养基pH为5.2,共培养3d的条件下,获得转基因植株,其中抗性植株的抗草丁膦试验,转基因植株DNA的PCR及PCR-Southern斑点杂交鉴定等结果表明,50%的抗性植株的基因组中有外源基因的整合。 相似文献
35.
36.
发根农杆菌诱导栝楼毛状根的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
栝楼是一种重要的药用植物,提取物具有多种活性。以栝楼的无菌苗为材料,用A4、15834和LBA9402等3种发根农杆菌浸染茎段,诱导毛状根生成,并研究毛状根分化不定芽的条件。结果显示,3种农杆菌都能诱导栝楼毛状根产生,其中LBA9402诱导率最高,达到52%,且毛状根在6-BA 2.0 mg.L-1 KT 2.0 mg.L-1 NAA 0.5 mg.L-1的培养基上,不定芽分化率达到了24%。对毛状根进行基因组DNA提取,PCR扩增检测出rolB基因的存在,初步证明R i质粒T-DNA已经整合到栝楼基因组中。 相似文献
37.
为了建立农杆菌介导的高效毛白杨遗传转化体系,并大量获得转MdSPDS1基因的转基因毛白杨,对MdSPDS1基因导入毛白杨的遗传转化体系中关键转化因子进行了优化。获得的优化转化体系如下:叶片预培养3d后,用OD600为0.4的菌液侵染7min,再共培养3d。卡那霉素抗性芽的二次筛选中,卡那霉素的选择压分别为20和50mg/L。实验获得毛白杨卡那霉素抗性植株共43株,经PCR检测,其中9株呈阳性,占抗性植株总数的20.9%,优化转化系统的阳性植株转化率达到9.38%。本研究为下一步鉴定基因功能和转基因植株耐盐性的分析奠定了基础。 相似文献
38.
对根癌农杆菌介导的玉米基因转化中包括外植体、基本培养基及其附加物、共培养温度、信号分子与vir基因的活化的几个关键因素研究进展作了论述。近年来的研究发现,大小为1~2mm的幼胚是较为理想的转化外植体,在外植体培养基本培养基一般多选用MS和N6,在基本培养基上附加有机氮和氨基酸、金属离子均有利于转化效率的提高。转化中的共培养温度一般在200C~250C之间。研究认为根癌农杆菌转化禾本科植物的困难在于禾本科植物缺乏酚类物质,难以诱导Vir基因活化表达,因此在转化中多采用加入外源的酚类物质如乙酰丁香酮来提高玉米转化的成功率。 相似文献
39.
利用发根农杆菌A4菌株侵染三分三组培苗叶片诱导毛状根,并对其毛状根进行继代增殖培养;采用PCR技术检测毛状根。结果表明:发根农杆菌A4菌株Ri质粒的rolB基因已整合到三分三叶肉细胞的基因组中,进而成功地从叶片诱导出毛状根,诱导率可达77%以上;毛状根除菌后,能在无激素的MS固体培养基上快速生长。三分三遗传转化体系的建立为实现基于毛状根的三分三产托品烷类生物碱的代谢工程奠定基础。 相似文献
40.