不同采收期刺五加叶中多糖含量测定

目的为了对刺五加的质量进行综合评价。方法采用蒽酮-硫酸比色法,以葡萄糖作为对照品,在620nm波长下测定吸光度,分别测定刺五加叶中可溶性多糖和粗多糖的含量。结果在0．083mg-0．338mg范围内,葡萄糖mg数与吸光度A值线性关系良好,平均回收率为100．32％,RSD=0．223％,R2=0．9990。刺五加叶的部位可溶性多糖含量为1．770％,粗多糖含量为1．290％。结论不同采收期刺五加叶中多糖含量差别很大,9月份采收的苇沙河地区的刺五加叶总多糖含量较高。从方法学考察可看出,本方法简便、快速、可靠、易行、重现性好,适合刺五加多糖的含量测定。     

刺五加愈伤组织诱导的研究

研究了不同培养基、激素和外植体对刺五加愈伤组织诱导的影响,结果表明：在旺盛生长期获取的叶片可以在附加植物激素的BZ培养基上以较高频率诱导出愈伤组织,诱导率为41.58%。刺五加组织培养的适宜外植体为叶片和当年生根,适宜基本培养基为BZ(改良培养基),且适合刺五加愈伤组织诱导和继代培养的激素组合为ZT0.2+NAA2.0+GA31.5。     

无梗五加的开花特点

对野生无梗五加(Acanthopanax sessiliflorus)的开花特征进行了观察研究,结果表明:无梗五加单朵花的花期为9~10d,花粉寿命为3~4d,花柱在花开后逐渐伸长,柱头二裂、干燥型;同一花序内的花朵在3~4d内逐渐开放,晚开的花朵散粉时早开的花朵花柱仍未伸长,因此,花药与柱头之间存在空间间隔和时间间隔,同一花序内的各花朵之间难于相互传粉;按照杂交指数,其繁育系统属于异交、部分自交亲和、需要传粉者。依据P/O数据,其繁育系统属于专性异交;无梗五加没有自发的自花传粉现象,自然条件下也没有无融合生殖现象,没有传粉者活动就不能座果。     

反相高效液相色谱法测定刺五加中2种三萜酸的含量

采用超声技术提取中药刺五加中的乌索酸和齐墩果酸,并建立HPLC-PAD法测定了乌索酸和齐墩果酸的含量。色谱柱为Nova-Pak C18(3.9 mm×300 mm,4μm),流动相为甲醇∶水(体积比,88∶12),流速为0.8 ml/min,二极管阵列检测器检测,检测波长210 nm,柱温25℃。乌索酸线性范围为0.136~1.224μg,线性回归系数为0.999 5;齐墩果酸线性范围为0.052~0.468μg,线性回归系数为0.999 4。样品中乌索酸的平均回收率为98.1%,RSD为1.1%(n=5);齐墩果酸的平均回收率为97.5%,RSD为1.0%(n=5)。该方法操作简便,结果准确、可靠,可用于刺五加中乌索酸和齐墩果酸含量的测定分析。     

刺五加种皮结构及种胚形态发育观察

利用体视显微镜和扫描电镜分别观察刺五加种子外部形状、外种皮表面、外种皮内侧、内种皮外侧、外种皮横切面结构.结果表明,刺五加种子呈扁平状新月形;外种皮表面近于平滑,表面细密而平整;外种皮横切面由两部分细胞组成,外侧5～7层,最内侧1层.采用层积处理的方法,保持温度23～24℃ 3个月可完成种胚形态发育,在0～5℃条件下2个月解除生理休眠.     

云南热区的5种木本森林蔬菜及其培育技术

先对云南热区的臭菜、刺五加、南山藤、越南甜菜和长蕊甜菜5种木本森林蔬菜的特性作了介绍。继后从苗木培育(包括苗圃地及其相关设施的设置, 种子及插条育苗, 苗期管理) 和苗木栽培(包括种植地选择,种植技术, 修剪) 两方面简述了这5种木本森林蔬菜的人工规模化培育技术。     

短梗五加的繁育试验

在短梗五加的繁育栽培试验中,对种子催芽、硬枝扦插、嫩枝扦插进行不同的对比试验。结果表明,种子催芽以变温加激动素（k inetin）效果最佳,硬枝扦插宜以枝条和根条浸蘸ATP生根粉或吲哚丁酸（IBA）为主,嫩枝扦插以ATP生根粉加遮阴棚效果最好。     

SRAP分子标记分析体系的建立及白簕资源亲缘关系分析

本实验对影响SRAP-PCR体系中的Mg2＋、dNTPs和引物浓度等因子进行了体系优化,建立了一套适合白簕SRAP检测的25μL反应体系：1.5mmol/LMg2＋,1.5mmol/LdNTPs,1μmol/L引物,10ng模板DNA,1.5UTaqDNA聚合酶;进一步以白梗簕菜为模板,利用优化的体系进行多态性标记引物组合分析,共筛选出17对引物;利用这些引物对7个白簕品种进行SRAP遗传多样性分析,共扩增出461条谱带。其中多态性谱带155条,多态性谱带比率为33.6%,白簕品种间的相似系数为0.7077~0.9474。经UPGMA聚类分析结果显示,所检测的7个白簕品种分为两大类,其中亲缘关系较近的青梗簕菜和细叶密刺簕菜聚成了一组;而其余的4个种,包括白梗簕菜、细叶小刺簕菜、紫柄簕菜、大叶大刺簕菜和红梗簕菜,聚成另一组。     

刺五加糖基转移酶基因的表达及其对皂苷含量的影响

为了探明刺五加糖基转移酶基因（glycosyltransferase,GT）的表达特点及其对刺五加总皂苷含量的影响。以GAPDH基因为内参照基因,采用实时定量PCR技术分析了不同产地、不同生长发育时期、不同器官刺五加中GT基因的表达规律及茉莉酸甲酯（MeJA）对其表达的影响。并采用浓硫酸-香草醛比色法测定刺五加总皂苷的含量,利用SPPS17.0软件进行相关性分析。结果表明,GT基因在根、幼茎、叶片和叶柄中均有表达,但表达量差异不显著。刺五加的GT基因在叶片完全展开期的表达量最高,盛花期和果实基本成熟期的表达量最低,仅为叶片完全展开期表达量的66.9%。MeJA处理可显著提高GT基因的表达量（p〈0.05）。不同产地刺五加的GT基因表达量和总皂苷含量差异显著,但GT基因的表达量与总皂苷含量同升同降,存在极显著的正相关关系（p〈0.01）。初步判定,GT基因的表达量决定了刺五加中总皂苷的含量,GT是决定刺五加中总皂苷含量的关键酶。     

响应面法优化刺五加高产异嗪皮啶的发酵工艺

为提高发酵刺五加中异嗪皮啶的含量,采用单因素实验及响应面法对其发酵条件进行优化。采用单因素实验,分别测定发酵时间、初始pH、发酵温度、摇床转速、发酵菌株AJ14的菌悬液加入量及底物质量浓度对发酵刺五加中异嗪皮啶含量的影响,以获取单因素实验的最优值,然后采用响应面法中的Box-Behnken设计模块,分析初始pH、发酵温度、发酵菌株AJ14的菌悬液加入量3个自变量及其交互作用对异嗪皮啶得率的影响,确定最佳发酵工艺。结果表明,在初始pH 7.5、发酵温度27℃、发酵菌株AJ14菌悬液(1×10⁷ CFU/mL)加入量6 mL的条件下,异嗪皮啶含量为(0.6629±0.0007) mg/g,与预测值的相对误差较小。研究结果可为采用微生物发酵法高效生产异嗪皮啶奠定基础,也可为其他中药发酵工艺提供数据参考。