鸭梨,茌梨果实采前乙烯生物合成特性研究

鸭梨、茌梨果实均从盛花后１４５天进入呼吸跃变，同时伴随着乙烯释放高峰的出现。鸭梨的乙烯合成酶（ＥＦＥ）活性和氨基环丙烷羧酸（ＡＣＣ）含量高于茌梨，乙烯释放量的峰值是茌梨的４倍，两品种果实的ＥＦＥ活性变化与果实的呼吸跃变和乙烯释放量的变化同步，ＡＣＣ含量自盛花后１３５天，一直呈止升趋势。两品种果实内含有亚精胺、腐胺和精胺三种内源多胺，亚精胺与梨果实乙烯生物合成有关。     

鸭梨果实气调贮藏的研究

鸭梨果实采后在20±1℃常温下具有典型的呼吸跃变过程,跃变峰过后,果实硬度有所下降,可溶性固形物及可滴定酸含量在常温下23天无显著变化。 采用缓慢降温(12→0℃)结合 7-10％O_2 0％CO_2进行气调贮藏,可以显著减少鸭梨果实晚期黑心病的发生率,经213天贮藏后,7％O_2 0％CO_2,10％O_2 0％CO_2和空气对照果的果心褐变指数分别为0.075,0.075和0.192;与对照相比,气调处理可以维持较高的果肉硬度和可滴定酸含量,减少失重率,延长货架寿命,对可溶性固形物无显著影响。7％O_2 0％CO_2处理优于10％O_2 0％CO_2处理。     

康乃馨ACC氧化酶反义基因遗传转化康乃馨的研究

 在建立康乃馨从愈伤组织到完整植株的高频再生体系的基础上，用花特异表达启动子驱动的康乃馨ACC氧化酶反义基因通过农杆菌介导法对康乃馨进行遗传转化，获得了3株转基因植株．经多重PCR及PCR-Southem杂交检测，证实康乃馨ACC氧化酶的反义基因已整合进康乃馨的基因组中。     

反义ACO 基因导入获得瓶插寿命长的香石竹植株

 通过农杆菌( Agrobacterium tumefaciens) 介导法, 利用香石竹叶片作外植体, 将反义香石竹ACC 氧化酶基因导入香石竹‘黄星’品种, 通过PCR 扩增、Southern blot 检测, 证明反义ACC 氧化酶基因已整合到香石竹基因组。研究发现, 叶龄、乙酰丁香酮等对转化率有着较大影响。通过叶片的两度选择分化, 大大减少了转化嵌合体比例。转基因植株在隔离条件下栽培, 开花正常, 切花在25 ℃条件下瓶插寿命较对照延长了4 d。     

香石竹ACC氧化酶重复基因植物表达载体的构建及转基因植株的获得

香石竹ACC氧化酶基因从核NDA中克隆之后,将其首先构建成正义及反义的单拷贝植物表达载体,在此基础上又同向插入一个ACO基因片段,从而获得ACO的正义重复基因和反义重复基因植物表达载体,所得载体已通过酶切分析和PCR鉴定。将该表达载体导入根癌农杆菌LBA4404菌株,并转化香石竹品种Master、爱卡迪幼叶,经PCR检测和Southem杂交鉴定,获得了8株转化植珠。     

薄皮甜瓜果实ACC合成酶cDNA克隆及反义表达载体的构建

从成熟的薄皮甜瓜(Cucumis melo cv.Qitian I)果肉组织中分离总RNA,经RT-PCR扩增得到0.7 kb的cDNA片段,将其克隆到质粒载体pGEM-T Easy。测序表明,该基因为777 bp,编码258个氨基酸,与Gen-Bank中甜瓜1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylate synthase,ACS)基因比对,核苷酸同源性为99%,氨基酸同源性为98%。克隆片段经双酶切消化,反向插入到植物表达载体pCAM2301的E8启动子和NOS终止子之间,构建成E8调控下ACS基因反义表达载体。通过冻融法将携带反义cDNA的植物表达载体质粒转入根癌农杆菌LBA4404,得到了完整的Ti质粒表达载体系统。     

Oxylipin affects ethylene metabolism and ethylene receptor gene expression levels in peach fruit (Prunus persica L. Batsch)

The effects of two oxylipins – jasmonic acid (JA) and 9, 10-ketol-octadecadienoic acid (KODA) – on ethylene metabolism and ethylene receptor genes were examined in peach fruit (Prunus persica L.) harvested at 88 days after full bloom (DAFB), in the pre-climacteric stage, and at 102 DAFB, at the beginning of the climacteric stage. Immediate post-harvest applications of either n-propyl dihydrojasmonate (PDJ) (a JA analog) or KODA stimulated ethylene production and 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) concentrations in fruit that were harvested at 88 and 102 DAFB. KODA application significantly increased levels of ACC oxidase (PpACO1) expression at 5 and 8 days after treatment (DAT) in 88-DAFB-harvested fruit, and at 1 DAT in 102-DAFB-harvested fruit. Expression levels of ethylene response factors (PpERS1) were not influenced by either PDJ or KODA applications at 88 or 102 DAFB. In contrast, levels of ethylene-receptor-coding genes (PpETR1) expression in 88-DAFB KODA-treated fruit increased at 8 and 14 DAT. Expression levels of constitutive triple response (PpCTR1) in the untreated control fruit decreased with DAT in both 88- and 102-DAFB-harvested fruit.

These results suggest that certain oxylipins may promote ethylene production in peach fruit, and that PpETR1 and PpCTR1 may be associated with the autocatalytic system of ethylene production.     

采后处理对香蕉果实ACC合成酶基因表达的影响

香蕉属于呼吸跃变型果实,ACC合成酶(ACS)是乙烯合成路径中的关键限速酶,为了明确调控香蕉果实成熟关键ACS基因,对采后香蕉果实用乙烯利、自然成熟和1-MCP等处理,并利用实时荧光定量PCR分析ACS基因家族成员在果实成熟过程中的表达情况。结果表明,不同家族成员在3种处理中的表达趋势及表达丰度不一致,MaACS4在乙烯利、自然成熟和1-MCP处理后的表达趋势一致,均为前期变化不大,成熟时快速增加,但最终上调倍数小于10。MaACS6表达量在乙烯利和1-MCP处理中先下降后增加,在自然成熟中先增加后下降。MaACS10在三种处理中,表达量在前期比较低且变化不大,但在成熟时急剧增加并达到峰值,最终上调倍数达到约1700倍。MaACS13表达量在乙烯利和1-MCP处理中先下降后增加再下降,在自然成熟中前期变化不大,但成熟时显著下降,基于此结果,推测MaACS10是调控香蕉成熟的关键基因。     

ACC氧化酶cDNA克隆及其对美洲黑杨体内乙烯产生的反义抑制

利用ＲＴ－ＣＲ技术克降了番茄ＡＣＣ氧化酶基因ＬＥＥＴＨＹＢＲ编码区０．９ｋｂ的ｃＤＮＡ片段,经酶切图谱分析笔序列分析鉴定后,反向插入到植物表达载体ｐＢｉｎ４３８中,构建了表达ＡＣＣ氧化酶反义和ＲＮＡ的二元载体。     

‘云香’水仙ACC氧化酶基因克隆及遗传转化

以‘云香’水仙花瓣为试验材料,采用RT-PCR技术克隆出乙烯生物合成途径中的关键酶ACC氧化酶(ACO)基因的全长序列1 162 bp,命名为NtACO1(GenBank登录号为KX082935)。其开放阅读框(ORF)长度为939 bp,编码312个氨基酸。NtACO1蛋白包括ACO家族保守的DIOX_N和20G-FeⅡ_Oxy结构域。分子进化树分析表明,NtACO1蛋白与‘金盏银台’水仙亲缘关系最近。通过qRT-PCR检测NtACO1在‘云香’水仙花朵开放过程中的表达模式,结果表明,NtACO1在花瓣和副冠中的表达量随着花朵发育衰老而逐渐上升,并且各个时期花瓣中的表达量都高于副冠,推测NtACO1可能参与了‘云香’花的发育和衰老。构建了NtACO1的正、反义植物表达载体,并以烟草叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导的遗传转化体系,获得NtACO1过表达转基因植株。转基因烟草与野生型相比缩短了营养生长期,开花较早,叶片较少。该研究为进一步探究水仙花ACO基因功能,以及延长水仙花花期的分子育种奠定了试验基础。