牵牛花粉表面蛋白SDS-PAGE分析

花粉表面蛋白在植物自交亲和反应中起着重要作用。为了探讨植物自交亲和性分子机制,以裂牵牛的花粉和柱头为材料,对其花粉表面蛋白和柱头表面蛋白进行了SDS-PAGE分析,通过对比不同的提取方式获得的花粉表面蛋白的电泳谱带,获得了最佳的样品提取方法。通过分析花粉和柱头表面蛋白的电泳波谱发现,花粉表面蛋白和柱头表面蛋白的电泳谱带中有2条共同的蛋白带,推断这2条谱带可能与花粉的识别反应有关。为了证明SDS-PAGE电泳获得的信息是来自花粉表面的蛋白,而不是来自花粉吸水涨裂后花粉原生质蛋白,对水浸提后的牵牛花粉粒进行显微镜观察,发现很少有破裂的花粉粒,进一步确定了传粉受精过程中是花粉表面蛋白与雌蕊组织间的识别反应。     

高效毛细管电泳法测定鸡蛋中环丙沙星的研究

[目的]建立高效毛细管电泳测定鸡蛋中环丙沙星含量的方法。[方法]通过对电泳缓冲液类型、离子浓度和pH值、样品溶剂种类、分离电压、分离温度和冲洗程序等电泳条件进行考察,确立测定鸡蛋中环丙沙星的高效毛细管电泳法,并测定电泳参数对检测结果的影响。[结果]在检测波长为277 nm时,最佳电泳条件为:电泳缓冲液为30 mmol/LNa2B4O7-10 mmol/LKH2PO4溶液(pH值8.53),未涂层石英毛细管(50μm×47 cm,有效长度38.5 cm)为分离通道,分离电压为18 kV。在鸡蛋中对环丙沙星的检测结果显示,在最佳电泳条件下,环丙沙星在11 min内实现基线分离,在0.25～80.00μg/ml浓度范围内其浓度和峰面积呈良好的线性关系(R2=0.999 2),平均加标回收率为101.48%,平均RSD为2.466 4%(n=5)。[结论]该方法快速简便、灵敏度高、重现性好,可用于鸡蛋中环丙沙星含量的测定。     

乳蛋白分析检测技术的研究进展

乳蛋白质是牛奶中的主要成分,其含量和品质直接决定牛乳和乳粉的营养价值和质量.目前分析乳蛋白的方法较多,简要介绍了反相高效液相色谱、毛细管电泳及双向凝胶电泳技术的分离原理,并综述了其在乳蛋白质的分离、掺假及遗传变异体分析检测研究中的应用.     

不同水域中克氏原螯虾主要组织的LDH同工酶分析

[目的]为探究克氏原螯虾的食用安全性以及哈夫病的致病因素等提供检测方法。[方法]以孝感市不同水域中生活的克氏原螯虾为材料,对其主要组织的LDH同工酶进行电泳分析。[结果]2处水域的pH、总磷、总氮和化学需氧量存在差异,2处水域中克氏原螯虾的鳃、心脏和肌肉的LDH同工酶酶谱也存在差异。B水域(流水)中克氏原螯虾的酶带数目比A水域(静水)多。从Ldh-5同工酶染色深浅可以看出,静水虾肝胰腺、心脏和眼球的Ldh-5同工酶活力比流水虾的大,而肌肉和腮则是流水虾的Ldh-5同工酶活力较大。[结论]2处水域克氏原螯虾组织LDH同工酶的差异是由水质差异引起的。     

毛细管电泳与芯片电泳技术在转基因食品检测中的研究进展

大量的转基因生物体作为食品进入人们的生活,灵敏、快速、特异的检测方法对保护消费者的知情权和选择权、保障转基因标签制度的顺利实施起到了举足轻重的作用。毛细管电泳和芯片电泳作为新兴的分离技术,以其高通量、高灵敏度、快捷低耗的优势弥补了传统凝胶电泳的不足。对目前常用的转基因食品检测方法进行归纳和评价,并重点综述了近年来毛细管电泳与芯片电泳技术在转基因食品检测中的研究进展。     

Identification of a Group of Novel y-Gliadin Genes

γ-Gliadins are an important component of wheat seed storage proteins. Four novel γ-gliadin genes （Gli-ngl to Gli-ng4） were cloned from wheat （Triticum aestivum） and Aegilops species. The novel γ-gliadins were much smaller in molecular size when compared to the typical γ-gliadins, which was caused by deletion of the non-repetitive domain, glutamine-rich region, 3＂ part of the repetitive domain, and 5＇ part of the C-terminal, possibly due to illegitimate recombination between the repetitive domain and the C-terminal. As a result, Gli-ngl and Gli-ng4 only contained two and three cysteine residues, respectively. Gli-ngl, as the representative of novel γ-gliadin genes, has been sub-cloned into an Escherichia coli expression system. SDS- PAGE indicated that the both cysteine residues of Gli-ngl could participate in the formation of intermolecular disulphide bonds in vitro. Successful cloning of Gli-ngl from seed cDNA of T. aestivum cv. Chinese Spring suggested that these novel γ-gliadin genes were normally transcribed during the development of seeds. Phylogenic analysis indicated that the four novel γ-gliadin genes had a closer relationship with those from the B （S） genome of wheat.     

蝇蛆蛋白的提取及相对分子量的鉴定

采用正交试验设计,对硫酸铵盐析法提取蝇蛆蛋白的工艺参数进行筛选,并通过Tricine-SDS-PAGE蛋白质电泳对产品的相对分子量进行鉴定.结果 表明,蝇蛆蛋白提取工艺的参数以温度4℃、pH4、硫酸铵浓度70%、时间7h所提取的蛋白得率最高,其中硫酸铵浓度为最主要影响因素.蝇蛆蛋白的相对分子质量为86 KD.     

如何做好田间种植检验

<正>纯度是种子最重要的质量指标之一,纯度鉴定是判定质量最复杂的检验过程。目前,种子纯度检验常用的方法有籽粒形态鉴定、幼苗鉴定、田间小区种植鉴定和盐溶蛋白电泳鉴定等方法。而田间小区种植鉴定的结果最为准确,但在实际检验中要注意以下问题:一、地块的选择应选择有水源、地面平整、保证能一次抓全苗的     

柑橘品种鉴定的SSR标记开发和指纹图谱库构建

【目的】筛选出一套SSR核心引物,用于构建柑橘品种的DNA指纹图谱库,为柑橘种苗认证、品种登记和植物新品种保护提供技术支撑。【方法】以柑橘属8个主要栽培种类为试材进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测,筛选出多态性丰富、扩增条带稳定的引物对部分参试品种进行PCR扩增,扩增产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行进一步的引物筛选;筛选得到的引物进行荧光标记,并选用部分柑橘品种进行PCR扩增,扩增产物利用基因分析仪检测,分别计算各引物的PIC值、等位基因数目,选取一套多态性丰富的适合进行荧光毛细管电泳检测的SSR引物组合,进而对所有参试品种进行分析,构建柑橘品种的DNA指纹图谱库,同时利用筛选的SSR标记对参试品种进行鉴定。【结果】初期以柑橘属8个种的代表品种(太田椪柑、沙田柚、沅江酸橙、大红甜橙、邓肯葡萄柚、枸橼、费米耐劳柠檬和墨西哥来檬)为材料,用362对SSR引物进行PCR扩增,扩增产物经4%琼脂糖凝胶电泳检测,初步筛选出80对种间多态性高、扩增稳定的SSR引物;进一步从8个种类里选择不同类型的64个柑橘品种,用上述筛选出的80对SSR引物进行PCR扩增,扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,再筛选出60对品种类型间多态性高、扩增稳定、条带清晰的SSR引物,并分别进行荧光标记;另以168份柑橘品种为材料对上述60对SSR引物进行PCR扩增,经荧光毛细管电泳检测,依据各引物的PIC值、等位基因数目、峰图读取难易程度、扩增稳定性及染色体位置等,最终筛选出21对SSR引物作为指纹图谱库构建的核心引物。为消除不同仪器、不同试验批次等引起的误差,为21对SSR引物各主要等位变异选择相应的参照品种。根据各引物标记的荧光颜色及扩增片段大小进行合理组合,21对SSR引物可分成5组进行多重电泳,共采集500份柑橘品种的DNA指纹。利用SSR标记,有111份品种仅用1对引物即可鉴别,86份品种用2对引物组合即可鉴别,24份品种用3对引物组合即可鉴别,另外279份品种虽无法单独一一鉴别,但可分为87个小组,组内品种无法区分,组间品种易鉴别。【结论】利用筛选出的21对SSR核心引物,构建了包含500份柑橘品种的DNA指纹图谱库,筛选出部分品种的特异标记,可以鉴别221份柑橘品种和87个品种组合,构建了基于毛细管电泳平台的柑橘SSR分子标记品种鉴定体系。     

毛细管电泳荧光检测中的异常电泳类型及原因分析

采用毛细管电泳荧光检测技术进行玉米SSR标记的片段分析.利用峰型、峰面积和其它荧光干扰峰等方面的特征对特异峰和非特异峰进行甄别.分析了特异峰的具体表现类型及原因:包括N 1峰、稀有峰、连续多峰、三峰和高低峰等.探讨了片段扩增产物大小与异常峰型的关系.为保证玉米品种DNA指纹库构建的标准化,提出了数据统计规范化的解决方案.