IGFBP-7在非小细胞肺癌患者血清和肿瘤组织中的表达

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP-7)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血清和肺癌组织中的表达。方法分别采用ELISA、免疫组化法检测57例NSCLC和17例肺部良性病变患者血清、肺组织中IGFBP-7的表达,并分析IGFBP-7表达与病理参数间的关系。结果 NSCLC组血清及肿瘤组织中的IGFBP-7表达水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);NSCLC患者血清及肿瘤组织中IGFBP-7的表达与淋巴结转移、局部侵犯、远处转移和TNM分期有关(P<0.01或0.05)。结论血清及肿瘤组织中IGFBP-7低表达在NSCLC发生、发展及转移中有重要作用,有助于NSCLC诊断及预后判断。     

优质高产水稻品种松粳7号特性分析

松粳7号是黑龙江省农业科学院五常水稻研究所以松93-8为母本,通306为父本,杂交后代经系谱法选育而成,具有优质、高产、适应性广等特点,2004年3月通过黑龙江省农作物品种审定委员会审定。     

利用Bac-to-Bac杆状病毒系统超量表达家蚕let-7簇microRNAs

【目的】利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统超量表达家蚕（Bombyx mori）let-7 簇（cluster）microRNAs：bmo-let-7、bmo-miR-100和bmo-miR-2795,为研究家蚕microRNA的功能提供参考。【方法】克隆家蚕let-7 miRNA簇（bmo-let-7 cluster,bmo-let-7-C）上各miRNA前体(pri-let-7、pri-miR-100与pri-miR-2795)和bmo-let-7-C全长序列,以红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)基因为报告基因,昆虫细胞表达载体pFastBac1为穿梭载体,通过Tn7转座子把目的基因和报告基因转座到杆状病毒A. californica nucleopolyhedrovirus (AcNPV)基因组上,获得各重组杆状病毒质粒（recombinant baculovirus plasmid,rBacmid）：Bac-let-7、Bac-miR-100、Bac-miR-2795和Bac-let-7-C。将重组Bacmid转染草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）卵巢细胞系Sf9,72 h后用荧光显微镜检查红色荧光蛋白信号,荧光定量PCR检测miRNAs的表达。对转染的Sf9细胞进行、离心、收集上清液,获得具感染力的重组病毒,用于侵染新培养的Sf9细胞和注射家蚕幼虫个体,72 h后用荧光显微镜检查红色荧光蛋白信号,荧光定量PCR检测miRNAs的表达。【结果】成功将bmo-let-7-C上各miRNA前体和bmo-let-7-C全长序列构建到杆状病毒基因组上,获得了各miRNA及bmo-let-7-C的过量表达载体。将各重组过量表达载体分别转染草地贪夜蛾细胞系Sf9,72 h后在显微镜下观察到了红色荧光蛋白信号,荧光定量PCR检测结果表明各miRNA显著过量表达;通过离心收集的各miRNA重组过量表达病毒粒子感染新培养的Sf9细胞72 h后检测到了更强的红色荧光蛋白信号,定量PCR结果表明各miRNA均显著过量表达。将各miRNA的重组病毒注射到家蚕5龄1 d幼虫体内后,均能显著超量表达相应miRNA,但注射Bac-let-7-C后只有miR-2795显著过量表达,并有明显的组织差异性,在丝腺中没有过量表达,在脂肪体、血液和中肠中显著过量表达。【结论】利用杆状病毒过量表达系统在草地贪夜蛾细胞系Sf9和家蚕个体中超量表达了家蚕let-7簇miRNAs,为研究家蚕let-7簇和其他miRNAs的产生机制和功能提供了参考。     

水稻矮秆多分蘖突变体的表型分析及基因克隆

以粳稻品种空育131为材料,经EMS诱变获得一个株型突变体,其表型为植株矮化、分蘖增加及粒型较小等,命名为dmt(dwarf and more tillers)。遗传分析表明,突变体表型受一对隐性核基因所控制。利用独脚金内酯的类似物GR24处理dmt突变体能够恢复野生型表型,说明dmt突变可能与独脚金内酯合成途径相关。利用dmt与空育131构建回交群体,基于BSA和MutMap相结合的方法,将突变位点定位于第4染色体的LOC_Os04g46470位点,测序表明,该基因在第5个外显子最后一个碱基发生了G到A的突变,使该基因错误剪切,104 bp的第5内含子被转录,导致该基因移码突变。LOC_Os04g46470编码胡萝卜素裂解双加氧酶7(carotenoid cleavage dioxygenase 7,CCD7),是独脚金内酯合成途径的基因。此外,突变体中CCD7的表达量高于对照,也证明dmt中独脚金内酯合成途径突变,造成负反馈抑制减弱。     

版纳微型猪近交系AO血型基因外显子7 和外显子8遗传特征分析

猪的UDP-N-乙酰半乳糖胺转移酶(UDP-N-acetylgalactosamine transferase,UDP-Gal NAc)是负责转移一分子的N-乙酰-D-半乳糖胺基(NAc Ga1)到H底物上形成A抗原,从而决定A型血的转移酶,AO血型系统的A基因编码A转移酶。采用PCR技术和直接测序的方法对版纳微型猪近交系UDP-Gal NAc基因外显子7和外显子8进行多态性分析,均仅检测到1种基因型。通过序列比较发现,版纳微型猪近交系UDP-Gal NAc基因外显子7和外显子8与NCBI数据库中14个其他物种的ABO血型基因存在较高的同源性。与人相比,猪外显子7第92~97位缺失编码两个氨基酸的6个碱基。构建的基因进化树分析结果显示版纳微型猪近交系与牛、羊、鲸亲缘关系最近。     

PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库的构建及鉴定

【目的】构建PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库,为研究猪源病毒与宿主细胞的相互作用奠定基础。【方法】分离纯化PK15细胞mRNA,先后合成第一链和第二链cDNA,经平末端修饰后,定向导入EcoR Ⅰ和HindⅢ接头,再由EcoRⅠ和HindⅢ双酶切消化,与噬菌体载体臂相连,然后用噬菌体包装抽提物进行体外包装,形成初级cDNAT7噬菌体展示文库,并通过滴度测定和PCR鉴定文库质量。【结果】经噬斑试验鉴定,初级文库滴度为2．0×10^5PFU／mL,扩增后滴度达6．0×10^10PFU／mL。PCR鉴定结果显示,文库的重组率为95．83％,且插入片段主要分布于500-2000bp,其中500～750bp的占21．73％,750～100bp的占21．73％,1000-2000bp的占39．13％。随机挑选20个克隆进行测序,发现均为猪源序列。【结论】构建的PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库具备较高库容量和重组率,质量良好,符合后续文库筛选的要求,可用于研究猪源病毒蛋白与PK15细胞的相互作用。     

籼稻品种93-11遗传转化中抗生素适宜剂量的筛选

为优化农杆菌介导转化体系,研究了两种常用抑菌剂头孢霉素(cef)和羧苄青霉素(cb)的抑菌效果和对籼稻品种93-11成熟胚培养的影响,并进一步研究选择剂潮霉素(hyg)对愈伤诱导、分化和种子萌发生根的影响,确定其作为选择剂的有效浓度.对cb和cef共设置12种质量浓度处理,各处理都能完全抑制农杆菌的生长,同时对愈伤的诱导和生长没有不良影响,但是有些处理使愈伤的分化率下降.150、250 mg.L-1cb的单独作用,400、500 mg.L-1cef的单独作用,以及cb为100mg.L-1时,300、400、500 mg.L-1cef的3种互作处理都不影响愈伤的分化率;但cef高达600 mg.L-1时明显降低愈伤的分化率,达极显著水平,使分化率降到7%;cb为50 mg.L-1时,350、450、550 mg.L-1cef的3种互作处理都极显著地降低愈伤的分化率,表明高浓度的cef以及添加小量cb的处理与cef之间的互作对分化率的影响十分显著.两种抑菌剂单独使用(400-500 mg.L-1cef,150-250 mg.L-1cb)即有效抑制转化和培养过程中农杆菌的繁殖,同时不影响愈伤的生长和分化.对hyg的研究表明,愈伤诱导和分化对hyg最为敏感,5 mg.L-1的剂量足以使出愈率为0,使愈伤的分化率为0;hyg对愈伤的致死剂量为40 mg.L-1;hyg对种子萌发生根的致死剂量为25 mg.L-1.因此,在愈伤分化阶段不宜加入选择剂;在抗性愈伤组织筛选阶段加入hyg的适宜质量浓度要大于40 mg.L-1;利用愈伤诱导和种子萌发生根对hyg的敏感性,可用于转基因种子的筛选,筛选质量浓度分别要大于5和25 mg.L-1.     

大豆新品种科选93选育与应用

大豆新品种科选93系唐山市农业科学研究所选育而成.该品种具有高产、早熟、矮秆、分枝多、抗花叶病毒病的特点.可作为1年2熟或2年3熟制地区夏播品种和2年3熟及1年1熟制地区春播品种.于2002年4月通过河北省农作物品种审定委员会审定.     

黄土坡面细沟间和细沟侵蚀对有机碳流失贡献的定量分析

细沟间和细沟侵蚀剥离和输移土壤的机制不同导致有机碳输移存在差异,然而因研究手段限制,这两种侵蚀方式对有机碳输移的贡献、影响等研究有待深入。本文利用模拟降雨与7Be示踪技术,在定量化分析细沟间和细沟侵蚀对黄土坡面侵蚀产沙贡献的基础上,进一步分析其对有机碳输移的贡献及影响。结果表明5°小区以细沟间侵蚀为主,其产沙贡献率为86%,大于5°的小区以细沟侵蚀为主,其产沙贡献率介于61%～71%之间,在降雨过程中甚至可达96%。降雨过程中坡面侵蚀泥沙有机碳平均富集比为1.16±0.15,细沟间侵蚀泥沙有机碳平均富集比为1.50±0.50,富集可导致有机碳流失率增加0.008～0.028 g·m^-2·min^-1。坡度大于5°的小区细沟侵蚀对有机碳流失贡献率介于55%～62%之间,低于对侵蚀产沙的贡献,但仍占主导地位。坡面侵蚀产沙量可解释有机碳流失量变化的97%,细沟间侵蚀产沙可解释细沟间有机碳流失量变化的89%。侵蚀过程中剧烈的细沟侵蚀可导致细沟间侵蚀泥沙有机碳的富集比增大。     

基于改进YOLOv7-tiny的凡纳滨对虾游动活跃性定量检测方法

在凡纳滨对虾养殖过程中,养殖人员需通过人为提拉饲料盘来观测对虾的游动活跃状态,以此了解虾只生长状况并制定投喂策略。为了解决人工观察凡纳滨对虾游动活跃状态时存在实时性不佳、劳动强度大等问题,提出一种基于改进YOLOv7-tiny（improved YOLOv7-tiny）检测模型和基于欧式距离多目标关联的凡纳滨对虾活跃性视觉检测方法,用以定量分析饲料盘上虾只游动活跃状态。在YOLOv7-tiny模型基础上,将标准卷积替换为GSConv卷积,搭建VoVGSCSPC模块替换原先轻量化聚合（ELAN-L）模块并使用损失函数MPDIoU替代损失原函数CIoU,来减少模型容量大小和提升模型检测精度。通过改进YOLOv7-tiny模型的检测结果和基于欧式距离的多目标关联方法确定图像中虾的位置,据此计算虾的游动位移、速度与转角,量化虾只游动活跃状态。在凡纳滨对虾数据集上验证后,结果显示,相较于YOLOv7-tiny模型,改进YOLOv7-tiny模型错检率和漏检率分别减小0.62%与1.05%,推理速度提升17.07%,改进后的模型有效性得到验证。定量分析虾只游动活跃性可发现,越活跃的虾对应活跃性指标数值越大,与实际情况相符。研究表明,所提出的游动活跃性定量检测方法可准确快速获得游动活跃性指标,能高效地量化凡纳滨对虾在饲料盘上的游动活跃状态,对掌握凡纳滨对虾健康状况、提高虾类养殖的智能化水平具有重要意义。