估测羊骨骼肌蛋白降解率的3-MH三分域模型构建与分析

蛋白降解率的准确测定一直是蛋白质周转代谢研究中的难点问题,本研究根据羊体内3-MeHis代谢和分布特点,以代谢动力学为基础理论,构建了由血液、非蛋白结合和肌肉蛋白结合3-MeHis组成的三分域模型,通过测定血液和尿液中被标记的3-MeHis的丰度,估测出了肌肉蛋白的降解分速率、肌肉3-MeHis库容量等12个变量。     

鲤鱼骨骼肌的超微结构及其病理改变

<正> 有关鱼类骨骼肌的超微结构,尤其是患病时的病理变化情况目前国内还未见报道。由于多种疾病都可引起骨骼肌的损伤,影响鱼的发育,因而开展这方面的研究对鱼病的防治还是很有意义的。基于此点,我们对患痘疮病的鲤鱼轴上肌亚显微结构进行了观察,并与正常鲤鱼同部位结构进行了比较。     

Culture and Identification of Myoblasts Isolated from Duck Embryos

Using embryonic myoblasts to research the formation and de-velopmental mechanisms of skeletal muscle is becoming a research hotspot. This study aimed to establish a method of isolation, culture and identification of my-oblasts in duck embryos. [Method] Pectoral and leg muscle samples were isolated from the embryos of Gaoyou duck at 13 d of hatching, then disassociated with col-lagenase and trypsin and purified via differential adhesion. The isolated cells were cultured in vitro and detected for the expression of Pax7 protein using immunofluo-rescence technique. [Result] Myoblasts were obtained successful y both from pectoral and leg muscles in duck embryos and these cells proliferated strongly and differen-tiated wel . Immunofluorescence staining showed that more than 95% cells could express Pax7 protein. [Conclusion] In summary, we report the successful establish-ment of a complete system for the isolation, purification, identification and culture of myoblasts from duck embryos.     

不同剂量及不同类型ω-3不饱和脂肪酸 对小鼠骨骼肌细胞膜流动性的影响研究

目的 通过对不同类型及不同剂量ω-3不饱和脂肪酸对小鼠骨骼肌细胞膜流动性的影响,探讨ω-3不饱和脂肪酸作为运动补剂的有效性及合适剂量。方法 160只小鼠随机分为16组,其中14组为实验组,分别给予两种不同剂量的ω-3不饱和脂肪酸DHA和EPA, 另外2组为安静对照组及运动对照组。实验组及运动对照组动物进行力竭运动。实验结束取各组小鼠骨骼肌组织提取细胞膜,测定细胞膜荧光偏振度P、微粘度η、膜脂流动性(LFU)。 结果 运动对照组小鼠骨骼肌细胞膜流动性显著低于安静对照组（P<0001）。当补充EPA≥40mg/kg时小鼠骨骼肌细胞膜微粘度显著低于运动对照组（P<0001）,而当补充EPA≥50mg/kg时小鼠骨骼肌细胞膜荧光偏振度p明显低于运动对照组（P<0001）,而细胞膜脂流动性显著高于运动对照组（P<0001）。当补充DHA≥40mg/kg时,小鼠骨骼肌细胞荧光偏振度P明显低于运动对照组（P<0001）。当补充DHA≥50mg/kg时细胞膜微粘度η明显低于运动对照组（P<0001）,而骨骼肌细胞膜流动性明显高于运动对照组（P<0001）。结论 在给予一定剂量DHA及EPA后进行力竭运动,小鼠骨骼肌细胞膜流动性指标均会发生明显改变。ω-3不饱和脂肪酸可以作为有效的运动补剂。     

m6A甲基化在鸡肌肉生长发育中的表达研究

试验旨在研究RNA m6A修饰相关基因去甲基化酶Alk B同源蛋白5（Alk B homologue 5,ALKBH5）、去甲基化酶肥胖相关蛋白（fat mass and obesity-associated protein,FTO）、甲基转移酶样蛋白3（methyltransferase like 3,METTL3）、甲基转移酶样蛋白14（methyltransferase like 14,METTL14）和成肾细胞瘤1-结合蛋白（Wilms’tumor 1-associating protein,WTAP）在鸡骨骼肌发育过程中的表达,分析其与骨骼肌m6A甲基化水平的相关性。首先,利用实时荧光定量PCR技术检测m6A甲基化相关基因在金茅花鸡12（E12）、14（E14）、16（E16）、18（E18）胚龄和1日龄腿肌和胸肌组织中mRNA表达水平,以及其在鸡成肌细胞50%、100%增殖期和1、2、3、4、5 d分化期的mRNA表达水平;随后,利用m6A甲基化试剂盒检测金茅花鸡E12和1日龄腿肌和胸肌组织中m6A甲基化修饰水平,与m6A甲基化相关基因表达水平进行相关性分析。结果显示,m6A去甲基化基因ALKBH5和FTO mRNA表达水平在骨骼肌发育过程中显著上调（P<0.05）,即在E12、E14低表达,E16、E18逐渐上调,1日龄达到最高。m6A甲基化写入基因METTL14、METTL3和WTAP mRNA表达水平在E12、E14、E16逐渐上升,E18下降,随后至1日龄表达量回升。在细胞增殖过程中,ALKBH5、FTO、METTL14、METTL3和WTAP基因表达均上调;在细胞分化过程中ALKBH5和FTO基因表达水平显著上调（P<0.05）,在分化第5天达到最高。METTL14、METTL3和WTAP基因mRNA表达水平在细胞诱导分化的1、2、3、4 d表达量呈下降趋势,而在诱导分化的第5天有所回升。甲基化水平检测结果显示,腿肌和胸肌m6A甲基化水平变化趋势一致,均在胚胎发育过程中显著下降（P<0.05）,至1日龄达到最低。相关性分析结果显示,鸡骨骼肌RNA m6A甲基化水平与m6A去甲基化修饰基因ALKBH5、FTO mRNA表达水平呈显著负相关（P<0.05）。综合以上试验结果,推测m6A甲基化修饰与鸡骨骼肌发育相关,而去甲基化基因ALKBH5、FTO可能通过调控RNA m6A甲基化水平,影响鸡骨骼肌发育。本研究结果为进一步研究m6A甲基化修饰调控鸡骨骼肌生长发育的功能和分子机制提供理论依据。     

干扰DHX9对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响

为研究天冬氨酸-谷氨酸-丙氨酸-组氨酸盒解旋酶9 (DEAH (Asp-Glu-Ala-His)-box helicase 9,DHX9)对牛骨骼肌细胞增殖与分化的影响,利用已经建立的牛骨骼肌卫星细胞体外成肌分化模型,设计合成DHX9的si-RNA,采用荧光定量PCR和Western blot技术检测DHX9基因在成肌...     

干扰lnc23后牛骨骼肌卫星细胞转录组测序的生物信息学分析

试验旨在分析lnc23在调控牛骨骼肌卫星细胞分化过程中转录组水平的变化,筛选出可能参与调节骨骼肌卫星细胞生长的调控通路及相关mRNAs。采用第二代测序技术（next-generation sequencing,NGS）基于Illumia hiSeq测序平台对成功构建的lnc23抑制模型及相应对照组的牛骨骼肌卫星细胞进行转录组测序,将数据整理、过滤及评估后,通过生物信息学方法分析样品间基因转录差异表达,对这些差异基因进行GO和KEGG富集分析,并应用实时荧光定量PCR技术对转录组数据结果进行验证。结果显示,转录组测序共鉴定到19 358个基因,筛选到1 297个差异表达基因,其中上调856个,下调441个。差异基因的GO功能分析共包括细胞组分、分子功能和生物学过程3大类222个分支,其中有大量的差异基因与催化活性、分子功能调节、信号转导、生物黏附、新陈代谢相关。KEGG分析显示,差异基因共涉及190个通路,显著富集在PI3K-Akt、P53、TNF、RIG-Ⅰ样受体、神经活性配体受体互作、细胞因子互作等信号通路上,进一步从中筛选出可能参与细胞生长、肌肉发育过程的差异基因,如CCNA2、RRM2、IL-6、MYL2等。实时荧光定量PCR结果显示,所选的11个差异基因中有9个与转录组测序结果变化一致,表明了测序结果的可靠性。本试验完成了干扰lnc23及其对照后牛骨骼肌卫星细胞的转录组测序分析,获取差异基因的功能注释信息,初步揭示lnc23调控牛骨骼肌卫星细胞分化的潜在基因和通路,为深入探究lnc23调控牛骨骼肌卫星细胞的分化机制打下良好的基础。     

利用WGCNA方法分析猪胚胎期骨骼肌发育相关共表达网络的研究

为了了解猪胚胎期骨骼肌发育的共表达网络,并进一步揭示造成品种间骨骼肌发育差异的关键基因,试验分别选取大白猪和民猪妊娠第45,70,100天的怀孕母猪各1头,屠宰后采集胎儿的骨骼肌组织24份(大白猪和民猪各12份,即每个品种妊娠第45,70,100天各4份)进行测序,先对所有组织进行聚类分析以排除离群样品,然后采用加权共表达基因网络分析(weight gene co-expression network analysis, WGCNA)方法构建基因共表达模块,并进一步筛选阶段相关模块,对阶段相关模块中的所有基因进行GO富集分析,最后用DESeq2软件对阶段相关模块中的所有基因进行差异分析。结果表明:样品的比对率范围为94.0%～95.6%,共有23份样品可用于WGCNA分析。共构建了10个基因共表达模块,筛选出6个与阶段相关的共表达模块。在妊娠第45天相关模块基因显著富集到与细胞增殖、细胞循环和骨骼肌组织发育有关的生物学过程中;在妊娠第70天相关模块基因显著富集到与骨骼肌细胞分化有关的生物学过程中;在妊娠第100天相关模块基因显著富集到与线粒体呼吸链复合体Ⅰ组装和线粒体翻译有关的生物学过...