基于广泛靶向代谢组学结合高效液相色谱法分析‘紫娟’和‘迎霜’茶树花代谢物差异

为探究茶树品种‘紫娟’和‘迎霜’茶树花之间的风味差异，基于超高效液相色谱-串联质谱法的广泛靶向代谢组学技术，检测2个品种茶树花轻发酵样品中非挥发性代谢物的丰度，并对其进行筛选和鉴定；参照茶叶感官审评方法评价2个样品茶树花各项审评因子，采用高效液相色谱法和比色法检测儿茶素类、黄酮类等滋味成分含量。结果表明：‘紫娟’茶树花滋味甘和较鲜、略苦微涩，‘迎霜’茶树花滋味甘和、微苦略涩。2个品种间有酚酸类（56种）、黄酮类（46种）、脂质（26种）、鞣质（19种）、氨基酸及其衍生物（17种）等219种显著差异代谢物。进一步对其代谢通路进行注释分析发现，氨基酸类物质相关代谢途径以及黄酮和黄酮醇代谢途径是‘紫娟’和‘迎霜’茶树花之间的主要差异代谢途径。此外，‘紫娟’和‘迎霜’茶树花中黄酮类总量、花青素总量、儿茶素类和部分生物碱含量差异显著（P<0.05），可溶性糖含量差异不显著。上述结果初步说明了黄酮类化合物使茶树花的滋味具有一定苦涩度，相较于‘迎霜’‘，紫娟’茶树花中部分氨基酸及其衍生物含量上调是其茶汤滋味较鲜的主要原因。     

CRISPR/Cas9系统敲除miRNA-182和miRNA-155的初步研究

CRISPR/cas9基因编辑系统可高效的实现目标基因靶向敲除,是当前基因功能研究的强有力工具。然而目前该系统主要针对编码蛋白质基因的靶向编辑,靶向非编码基因,尤其是miRNAs的基因少有报道。由于miRNA序列的简短性和多样性,从基因功能缺失的水平上研究其功能、成熟过程等还有一定的困难。我们基于CRISPR/cas9基因编辑系统,特异有效的敲除了HEK293T细胞中的miRNA-155和miRNA-182的种子区或发夹序列区,同时发现cas9与gRNA不同配比的转染剂量显著影响目标miRNA的敲除效率,其中cas9:gRNA的转染剂量在1:4时敲除效率最高。我们的研究阐明了CIRSPR/cas9系统在靶向敲除miRNAs基因的可行性,为研究miRNA在特定细胞中的生理学功能提供技术基础。