小鼠卵母细胞和早期胚胎端粒酶活性的测定

为了解小鼠早期发育过程中端粒酶的活性变化,本研究利用端粒重复序列扩增法(TRAP)进行了小鼠卵母细胞和附植前胚胎端粒酶活性的测定。结果表明,小鼠卵母细胞、桑椹胚和囊胚为端粒酶阳性,而2-细胞和8-细胞为阴性。依据电泳条带在成像系统下的光密度,计算相对总产品产量(TPG)的定量比较发现,囊胚端粒酶活性最高,为269.331;桑椹胚次之,为96.231;卵母细胞最低,为85.782。小鼠桑椹胚和囊胚胚胎记数及单细胞端粒酶活性比较结果显示,囊胚单细胞TPG最低,为3.45;桑椹胚单细胞略高于囊胚,为4.00;而卵母细胞最高,为85.782,大约是囊胚细胞的25倍。     

日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选噬菌体展示抗原对小鼠血吸虫病免疫效果观察

在前期研究中我们利用日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选日本血吸虫噬菌体展示cDNA文库,共获得10种阳性噬菌体克隆。本研究选择其中5种噬菌体克隆单独或联合免疫小鼠,观察其对血吸虫成虫合抱的影响以及对血吸虫病的免疫预防效果。结果显示,19号克隆单独免疫和6号、18号混合免疫在预防实验中分别取得了40.53%和31.14%的减虫率及35.31%,44.65%的肝脏减卵率。研究结果提示,19号、6号和18号噬菌体展示的EST序列编码基因具有一定的抗血吸虫生殖免疫效果,在血吸虫疫苗研究方面具有重要价值。     

P450芳香化酶活性调控对小鼠睾丸和附睾发育及精子发生的影响

［目的］探索P450芳香化酶抑制剂——来曲唑调控内源性雌激素合成,对小鼠睾丸和附睾发育及精子发生产生的影响。［方法］将SPF级昆明系雄性小鼠随机分为对照组和试验组,试验组分为0.001、0.002、0.004、0.006、0.008、0.010 mg/kg来曲唑剂量组,连续灌服3 d,在停药后的第9、15和30天检测小鼠睾丸和附睾的发育及精子的发生情况。［结果］①各试验组与对照组比较,体重增长率无显著差异;②0.010 mg/kg来曲唑组与对照组比较,在灌服后的第15天睾丸系数显著减少（P〈0.05）,其他各试验组与对照组比较无显著差异;③各试验组与对照组比较,附睾系数无显著差异;④在第15和30天,0.006-0.010 mg/kg来曲唑组与对照组比较,精子密度显著减少（P〈0.05）,其他各组与对照组无显著差异。［结论］该研究使用的来曲唑浓度,对小鼠体重增长率及睾丸和附睾的发育率无显著影响或影响很小,但是超过0.006 mg/kg浓度时抑制精子的发生,说明一定程度抑制P450芳香化酶的活性,降低内源性雌激素合成,能够直接影响精子的发生能力。     

章鱼胺对营养性肥胖小鼠减肥作用的研究

采用高脂饲料建立小鼠肥胖模型,以小鼠体重、Lee's指数、脂肪湿重、脂肪系数、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TC)及高密度脂蛋白(HDL-C)等指标的变化,研究章鱼胺对小鼠的减肥作用.结果表明,肥胖对照组小鼠较普通对照组小鼠的体重、脂肪湿重、脂肪系数、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)及高密度脂蛋白(HDL-C)含量均显著增加(P<0.05),表明营养肥胖模型构建成功;章鱼胺各剂量组及阳性对照组中小鼠的体重、脂肪湿重、脂肪系数、血清总胆固醇(TC)与模型组存在显著性差异(P<0.05),其中Lee's指数和甘油三脂(TG)的中、高剂量组与模型组存在显著性差异(P<0.05);章鱼胺对营养性肥胖小鼠有一定的减肥降脂作用.     

螺旋藻多糖调节小鼠免疫功能的作用

为研究螺旋藻多糖对小鼠免疫功能的调节作用,将螺旋藻多糖分别以低剂量6.7 ms/kg(推荐的人体每日摄入量)、中剂量67.0 ms/kg和高剂量134.0 mg/kg连续饲喂受试小鼠15 d后,对小鼠进行免疫调节试验.结果表明:螺旋藻多糖在134.0 mg/kg剂量时,可明显增强二硝基氟苯(DNFB)所致的小鼠迟发性超敏反应(P<0.05);中、高剂量组小鼠的胸腺指数、高剂量组小鼠血清的半数溶血值(HC_(50))及小鼠的单核-巨噬细胞吞噬指数明显高于对照组(P<0.05),且有明显的剂量.反应关系.根据保健食品免疫调节作用评价标准,螺旋藻多糖具有免疫调节作用.     

山竹壳提取物对小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1增殖和分化的影响

目的研究山竹壳提取物对小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1增殖和分化的影响。方法采用活性追踪的方法,用不同终质量浓度的山竹壳提取物和D101大孔树脂柱层析样品溶液进行干预,分别以MTT法和细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性检测法评价各样品对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响;用试管反应方法鉴别活性部位的主要化学成分类型,再按照2010版《中国药典》附录XB法测定活性部位的鞣质含量。结果山竹壳水溶性成分有一定的促MC3T3-E1细胞增殖和分化的作用,而脂溶性成分具有显著的细胞毒性;水溶性成分经D101大孔树脂柱层析的70%乙醇洗脱部位(SZ-S7)在12.5~50.0 mg/L范围内培养24、48、72 h时均可显著促进MC3T3-E1细胞增殖,培养3、5、7 d时均能显著促进MC3T3-E1细胞内ALP的形成,且其作用明显优于其它洗脱部位;化学成分分析表明,SZ-S7主要为缩合鞣质,总缩合鞣质含量达87.8%。结论山竹壳水溶性成分具有促进小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1的增殖和分化的作用,且经D101大孔树脂柱层析的70%乙醇洗脱部位为主要活性部位,可能对预防和治疗骨质疏松有一定的作用。     

2株海洋红酵母突变菌株对小鼠的毒性试验

[目的]研究2株海洋红酵母突变菌株对小鼠的急性毒性。[方法]将42只小鼠随机分为7组,试验组(1)、(2)和(3)小鼠灌服胶红酵母J6-82菌悬液,试验组(4)、(5)和(6)小鼠灌服粘红酵母J2-75菌悬液,细菌数量分别为1×107、1×109和1×1011个/m L,对照组小鼠灌服灭菌的红酵母培养基,研究胶红酵母J6-82和粘红酵母J2-75对小鼠的急性毒性。[结果]42只小鼠临床健康,无发病和死亡,无病理解剖学变化;试验组小鼠的平均体质量、饮水量、脏器指数与对照组相比无显著差异,淋巴细胞总数、淋巴细胞比率与对照组相比差异显著;试验组小鼠肝脏组织切片无病理组织学变化。[结论]胶红酵母J6-82和粘红酵母J2-75对小鼠无急性毒性。     

百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型小鼠血清IL-1β和TNF-α的影响

目的探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁小鼠行为学及血清白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的影响。方法 60只雄性昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、百事乐胶囊高、中、低剂量组和氟西汀组。除正常组外,其他组给予21 d慢性不可预见性应激造模。每天造模前各组小鼠分别予以相应药物灌胃治疗,模型组以等量蒸馏水灌胃。测定小鼠体质量,通过敞箱实验和悬尾不动实验检测小鼠行为学变化,酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清IL-1β和TNF-α的含量。结果模型组小鼠发生明显的行为学改变,水平和垂直活动明显减少,悬尾不动时间明显延长;百事乐胶囊高、中、低剂量组能显著增加小鼠体质量(P<0.05),改善小鼠的行为学指标(P<0.01),百事乐胶囊高、中剂量能降低血清IL-1β和TNF-α水平,与模型组比差异有统计学意义(P<0.05);与氟西汀组相比,百事乐胶囊高、中、低剂量组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论百事乐胶囊能显著改善慢性应激抑郁小鼠的行为学变化,其作用可能与下调慢性应激所致的血清IL-1β和TNF-α水平有关。     

猪圆环病毒2型(PCV2) Cap基因原核表达及抗血清制备

Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的重要结构蛋白,可以实现诱导机体免疫保护。以本实验室分离保存的PCV2毒株的Cap基因作为模板,设计特异性引物进行PCR扩增,并将该PCR产物连接至原核表达载体pET-28a上,获得重组质粒pET-28a-PCV2 Cap。将验证正确的菌种接入HB-pET自诱导培养基,过夜培养,SDS-PAGE及Western blot验证其表达,可获得28 000左右的目的蛋白。利用亲和层析技术纯化PCV2 Cap蛋白,免疫BALB/c小鼠获得小鼠阳性血清,通过ELISA方法检测其效价,并用Western blot验证其活性。结果显示,本试验成功应用大肠杆菌表达了PCV2 Cap蛋白,表达的蛋白具有免疫原性,并获得小鼠阳性血清,为PCV2 Cap蛋白的功能研究、鉴定、抗体及疫苗研制和病原检测奠定理论基础。     

小鼠孤雌胚的体内体外发育研究

小鼠孤雌激活卵登攀上培养于ＣＺＢ溶液中可发育至孵出囊胚阶段,而且孤雌胚移植后可在受体子宫内附植发育。单倍体、二倍体孤雌胚发育至桑椹胚的能力相似,但发育于囊胚的能力,后得高于前者。孤雌囊胚体外发育至孵出的比率仅为２０％,但在卵巢切除的受体子宫内期发育至孵出囊胚的比率提高到７３．３％。与受精扩张囊胚相比,孤雌扩张囊肿成纤维细胞饲养层上很难贴壁生长,但延迟孤雌囊胚的内细胞团（ＩＣＭ）呆在细胞饲养层上增殖