鸭坦布苏病毒的免疫学研究进展

鸭坦布苏病毒是近年来在我国发现的主要危害蛋种鸭的新发传染病,属于黄病毒科黄病毒属成员,因为该属的病毒多为人畜共患病,从病原学、天然免疫及获得性免疫等方面介绍了该病毒的研究进展。     

“三全防控”是后蓝耳病时代猪病防控的基本措施

正2009年下半年,高致病性猪蓝耳病弱毒活疫苗在全国范围内的强制性计划免疫,标志着中国临床猪病进入了后蓝耳病时代。后蓝耳病时代临床猪病具有如下典型的不确定性特征。首先,蓝耳病病毒自身结构不稳定,极易变异。截止2010年底,中国在世界基因bank申请注册的蓝耳病病毒已经达到29株[1],表明国内猪群病原复杂。临床猪     

一起母猪霉玉米中毒与圆环病毒混合感染的防治措施

霉玉米中毒是养猪业严重的中毒性疾病之一,由于霉玉米中毒后会导致猪体抵抗力下降,往往与其他细菌或病毒性疾病混合感染,导致病情复杂,诊治困难,危害严重.本文介绍了一起母猪霉玉米中毒与圆环病毒混合感染的发病情况、临床症状、剖检变化和实验室诊断,采取有效的综合防治措施得以控制的全过程.     

浙江金华地区越冬意蜂群大量死亡原因调查与分析

2014年冬,浙江多地意蜂群出现大量死亡。为了探究这一突发事件的原因,我们实地察看了现场、发放了调查问卷,并取样进行了病毒和微孢子虫的检测分析。结果表明,本次突发事件的主要原因可以排除急性农药中毒和急性污染物中毒的可能性。在病毒感染率上,患病蜂群DWV的感染率显著高于健康蜂群,但健康蜂群BQCV的感染率却显著高于患病蜂群。在病毒多重感染水平和病毒滴度上,患病蜂群显著高于健康蜂群;同时,患病蜂群N.ceranae的感染率和感染水平都要显著高于健康蜂群。本研究提示多重病毒感染、DWV和IAPV的高病毒滴度及N.ceranae的感染和这次蜜蜂死亡事件密切相关。鉴于狄斯瓦螨在促进病毒病方面的作用,蜂螨也有可能是蜂群死亡的间接原因之一。此外,本研究同时表明,几乎所有的表面健康蜂群同时感染多种病原,健康情况堪忧。为避免类似死亡事件的发生,一方面需力求降低病原体的感染水平,另一方面可以调整饲养管理方式促进蜜蜂的健康水平,同时减少外界不良因素的刺激。     

PEDV疫苗株与野毒株RT-PCR鉴别诊断方法的建立及临床应用

根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗株和野毒株在ORF3基因上的差异,我们设计了一对引物用于建立PEDV疫苗株和野毒株的RT-PCR鉴别诊断方法,其中疫苗株PCR扩增产物长度为213 bp,野毒株为262 bp。特异性试验结果表明,该引物对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的扩增均为阴性。2014年3月至2015年4月期间利用该方法对河南省51家猪场的581份腹泻样本进行检测,结果发现,PEDV总阳性率为54.9%(391/581),其中野毒株阳性率84.9%(332/391),疫苗株阳性率为15.1%(59/391),说明当前腹泻样本中的PEDV检出率依然较高,且在这些PEDV阳性病料中以野毒感染为主。     

灵山土鸡暴发传染性喉气管炎的快速诊断

2016年3月,广西某鸡场一群10 000只115日龄的灵山土鸡群出现鸡冠发绀、抬头伸颈、呼吸极度困难等症状,至送检时已累计死亡600余只。根据病鸡临床症状,初步怀疑感染了呼吸系统病原。剖检病死鸡,见患鸡喉头内有黏液,气管严重充血、出血,气管内壁附有黄色豆腐渣样物;脾脏肿大,表面有细小灰白色坏死点等病变。无菌取病死鸡的喉头、气管、脾脏等病变组织,1/2用于提取样品总DNA进行传染性喉气管炎病毒的PCR检测,1/2用于提取样品总RNA,经RT-PCR检测传染性支气管炎病毒和新城疫病毒。结果显示:传染性喉气管炎病毒的检测呈阳性、传染性支气管炎病毒和新城疫病毒的检测呈阴性,确定该鸡群患了传染性喉气管炎。     

猪捷申病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

参考Gen Bank中猪捷申病毒(PTV)基因序列,通过比对分析,设计引物和Taq Man探针,建立荧光定量RT-PCR检测方法。该方法的最低检测灵敏限度为12.6拷贝/μL,组内组间重复试验的变异系数均小于2%,具有较好的特异性,对猪常见病原如猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒和伪狂犬病病毒等均没有特异性扩增。用本研究建立的荧光定量RT-PCR方法检测来自猪场的156份猪粪便,阳性检出率为38.5%,与套式RT-PCR符合率达100%,表明本试验建立的荧光定量RT-PCR方法适用于PTV的快速批量筛检,为PTV感染的流行病学调查提供了必要的技术手段。     

检测新城疫病毒的纳米PCR技术建立与初步应用

根据Gen Bank登录的新城疫病毒(NDV)M基因核苷酸序列设计引物,建立了NDV纳米PCR检测方法。敏感性和特异性试验结果表明,该方法对NDV的最低核酸检出量分别为27 pg,比传统PCR敏感10倍,可扩增出297 bp的特异性核酸片段,而对禽流感病毒、传染性法氏囊病毒与传染性支气管炎病毒的检测结果均为阴性。该方法可用于新城疫病毒的临床快速检测与流行病学调查。     

猪skMLCK基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率测定

为了构建猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(sk MLCK)基因有效短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体,筛选出最佳干扰效率的序列,采用RNAi技术,设计并合成3条siRNA干扰序列,插入到慢病毒穿梭质粒(h U6-CMV-puror-Ploy A)上,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,收集病毒上清并进行病毒滴度的测定,将其转染小鼠C2C12细胞,分别用实时定量PCR和Western blot方法检测细胞中sk MLCK基因mRNA和蛋白的表达。结果显示:PCR扩增和测序分析结果显示靶向sk MLCK RNAi慢病毒载体构建成功;转染小鼠C2C12细胞后,sk MLCK基因mRNA和蛋白均受到不同程度抑制,实时定量PCR显示,抑制率分别为(29.2±4.43)%、(76.4±7.33)%、(20.0±1.8)%;Western blot显示,抑制率分别为(29.6±5)%、(42.4±1.6)%、(34.3±1.2)%。结论:成功构建猪sk MLCK基因有效shRNA的慢病毒载体,确定干扰载体-2(sk MLCKRNAi-2)具有最佳干扰效果,证实sk MLCK基因RNAi慢病毒载体能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为进一步研究该基因与肌肉肉质性状的关系奠定了基础。     

PRRSV变异株ORF5全基因的可溶性表达与重组蛋白的纯化

为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株可溶性糖基化囊膜蛋白(GP5),从p MD18-T-ORF5(V)重组质粒中PCR扩增得到PRRSV变异株LX13(1)结构蛋白ORF5全基因编码区,并克隆至原核表达载体p Cold TF DNA上,得到重组表达质粒p Cold-TF-GP5(V),转化大肠埃希菌BL21中诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western Blot鉴定分析。结果表明,目的基因插入位置和阅读框正确,成功表达的融合蛋白分子量约为75.2 ku,并以可溶性蛋白的形式存在,表达量约占菌体总蛋白含量的22.26%。该融合蛋白能与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应,说明重组蛋白具有反应原性。该可溶性重组蛋白的获得为研究PRRSV变异株GP5蛋白的抗原性奠定了基础。