成年小鼠睾丸间质细胞的分离、鉴定及功能检测

为建立成年小鼠睾丸间质细胞分离纯化方法,并对分离纯化的睾丸间质细胞进行睾酮分泌功能检测,对成年小鼠睾丸组织进行Ⅰ型胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心,分离成年小鼠睾丸间质细胞.细胞纯度用3β-羟类固醇脱氢酶(3β-hydroxy-steroid-dehydrogenase,3β-HSD)染色鉴定.将分离纯化的睾丸间质细胞进行体外培养,在基础睾酮和人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激培养条件下,用放射免疫分析法对培养上清中的睾酮含量进行检测.结果显示,通过该方法能获得高纯度成年小鼠睾丸间质细胞(＞95％),培养的睾丸间质细胞具有分泌基础睾酮以及对hCG刺激反应的能力.提示采用该方法对成年小鼠睾丸间质细胞进行分离纯化具有高效性、可用性,通过该方法获得的睾丸间质细胞是体外研究药物对睾酮分泌功能影响的良好模型.     

妊娠过程中子宫内膜蜕膜化机制

经过40余年的发展,人工辅助生殖技术得到了广泛的应用,为数以百万计的家庭带来了福音。然而这些技术仍然存在许多挑战,如相对较低的妊娠成功率及体外受精-胚胎移植技术所生婴儿的健康风险高于自然受孕婴儿等。因此,需要进一步分析相关生理基础和技术程序。接受辅助生殖的女性妊娠失败主要发生在妊娠早期,对胚胎着床和子宫蜕膜化两大关键事件机制的探索就显得尤为重要。人子宫蜕膜化涉及到子宫内膜间质细胞剧烈的形态与功能的分化,对于妊娠成功至关重要。对人类而言,cAMP和孕激素信号是启动子宫蜕膜化的关键。文章总结了近年来蜕膜化中几个重大事件的研究结果,包括蜕膜化的启动、内膜基质细胞的改变、子宫腺分泌的增加及子宫自然杀伤细胞的增多,以期为进一步理解人类子宫蜕膜化内在机制与诸多不育问题及提高人工生殖技术的成功率提供参考。     

玉米赤霉烯酮对猪睾丸间质细胞DNA损伤作用的彗星试验(英文)

[目的]观察玉米赤霉烯酮(ZEN)对猪睾丸间质细胞(Leydig cell)的DNA损伤效应。[方法]以体外培养的猪Leydigcell为材料,用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)测定ZEN对离体培养的猪睾丸间质细胞的半数致死浓度,选用0(对照组)、1、5、10和20μmol/L浓度的ZEN体外作用于猪Leydigcell,通过彗星试验观察了ZEN对猪Leydig cell DNA的损伤效应。[结果]ZEN浓度为0、1、5、10和20μmol/L时,所造成的细胞拖尾率分别为16.67%、34.00%、40.67%、52.00%和64.67%,各染毒组细胞拖尾率与对照组比较,差异均有极显著统计学意义(P<0.01),且存在明显的剂量-效应关系;各剂量组对应的拖尾细胞尾长(Taillength)分别为57.60±4.78、57.75±6.25、78.97±5.83、100.50±6.94和146.83±12.31μm,尾部DNA含量(Tail DNA %)分别为21.29±2.25%、22.24±2.43%、31.21±6.27%、37.45±4.33%和60.68±9.83%,与对照组比较,5μmol/L及以上ZEN浓度染毒组的Tail length和Tail DNA %均有显著性差异(P<0.05),且随ZEN浓度增加呈上升趋势。[结论]ZEN对猪Leydig cell存在遗传毒性,可以损伤Leydig cell的DNA,且有明显的剂量-效应关系。     

FSH对体外培养间质细胞睾酮生物合成的影响

以酶解法结合差速离心分离仔猪睾丸间质细胞为实验材料,研究了FSH对间质细胞睾酮合成的影响。实验结果表明:(1)随着培养时间的延长,间质细胞的分泌功能逐渐开始下降;(2)FSH(20ng/ml)对于d2和d4的间质细胞hCG的结合率,细胞内cAMP浓度均无明显影响;(3)FSH(20ng/ml)对于d2期细胞胆固醇和羟胆固醇的转化也不没有明显的影响。这表明,无论间质细胞处于何种时期,FSH不能通过调节细胞膜上的受体数量调节睾酮的合成,也不能通过影响胆固醇的转运调节间质细胞的功能。     

c-jun对体外培养仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

本试验用c-junASODNs诱导c-jun基因发生转录后沉默,探讨原癌基因c-jun对仔猪睾酮分泌的作用及可能机制。以2~3周龄长白仔猪为研究对象,采用体外培养体系,研究c-jun对基础状态下和hCG诱导下间质细胞(Leydig cell,LC)睾酮分泌及基础状态下LC增殖及凋亡的影响。结果显示,c-junASODNs以剂量依赖性方式抑制基础状态下和hCG诱导下睾酮分泌(P0.01)及基础状态下LC增殖(P0.01),当1μmol/Lc-junASODNs时,显著抑制LC的凋亡(P0.05)。结果表明,c-jun在基础状态下还是hCG诱导下均可促进仔猪LC睾酮的分泌,这种作用与c-jun促进LC增殖和凋亡有关。     

IGF-Ⅰ对山羊睾丸间质细胞分泌cAMP和睾酮的影响

利用山羊睾丸间质细胞体外培养的方法,研究ＩＧＦ－Ⅰ对ｃＡＭＰ和睾酮的影响。结果表明：①ＩＧＦ－Ⅰ可使间质细胞外ｃＡＭＰ积聚能力的显著增强（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．００５）。②ＩＧＦ－Ⅰ可使间质细胞分泌睾酮的能力显著增加（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．０１）。③ＩＧＦ－Ⅰ可刺激山羊间质细胞经ｈＣＧ诱导睾酮分泌的显著增多（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．０１）。以上结果与催乳素和白细胞介素－ｌα这些含氮激素（因子）调节睾酮分泌的机理不同。     

肿瘤坏死因子（TNF─α）对培养大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的作用

通过肿瘤坏死因子（ＴＮＦ─α）对培养大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的作用及机理的研究结果表明：ＴＮＦ─α可抑制培养２４ｈ的睾丸间质细胞的睾酮分泌，对培养４８ｈ和７２ｈ的间质细胞睾酮分泌表现出双相作用，低浓度的ＴＮＦ─α可刺激睾酮分泌，高浓度的ＴＮＦ─α抑制睾酮分沁．ＴＮＦ—α与ＬＨ同时处理时，对培养２４ｈ的睾丸间质细胞，ＴＮＦ─α抑制ＬＨ刺激的睾酮分泌，对培养４８ｈ和７２ｈ的睾丸间质的细胞低浓度的ＴＨＦ—α与ＬＨ协同促进睾酮分泌，而高浓度的ＴＮＦ—α则可抑制ＬＨ刺激的睾酮分泌。高浓度的ＴＮＦ─α对睾酮的抑制作用可能是通过抑制由孕酮向睾酮的转化过程实现的。