纳米二氧化硅对小鼠睾丸间质细胞的毒性作用

为探讨纳米二氧化硅(silica nanoparticles, SNPs)对睾丸间质细胞的毒性作用及其调控机制,利用St9ber法制备SNPs并通过透射电镜技术(transmission electron microscopy, TEM)检测其物理化学性质;采用尾静脉注射SNPs进入小鼠体内,通过H&E染色检测SNPs对小鼠睾丸的急性毒性作用;体外培养小鼠睾丸间质细胞,通过透射电镜技术、乳酸盐脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)染色、吖啶橙(acridine orange, AO)染色、Lyso-Tracker Red染色、流式细胞术、免疫荧光技术和Western blot方法检测SNPs对小鼠睾丸间质细胞的毒性作用。结果显示,本研究成功制备分散性良好近球形直径为100 nm的SNPs;体内试验结果表明,SNPs能够引起睾丸的急性毒性,导致精曲小管结构异常和睾丸间质减少;体外试验结果表明,SNPs抑制睾丸间质细胞增殖和促进细胞凋亡,在睾丸间质细胞溶酶体内发现SNPs颗粒分布,SNPs通过增大溶酶体膜通透化和改变其酸碱性损伤溶酶体导致睾丸间质细胞的凋亡。...     

一种有效分离及在体外扩增成年小鼠精原干细胞的方法

尝试建立一种简便有效的成年小鼠精原干细胞分离培养及扩增的方法。从单只成年小鼠的睾丸中经过两步酶消化法分离精原干细胞,并在去除间质细胞、纯化后的支持细胞饲养层上培养与扩增,获得稳定增殖的精原干细胞系。此方法可显著提高建系成功率,保证细胞系的单一基因型,显著降低体外培养精原干细胞的成本。为成体基因来源的转基因动物的制作和疾病模型的建立提供技术支持。     

成年SD大鼠胃窦Cajal间质细胞分离、培养及鉴定

目的 探讨成年SD大鼠胃窦起搏细胞Cajal间质细胞（interstitial cells of cajal,ICC）的原代分离、培养及鉴定方法,为深入研究其生理功能提供条件。方法 8~9周龄SD成年大鼠,禁食24 h,乙醚吸入麻醉,颈椎脱臼处死。无菌条件下采用精细解剖方法快速取出胃窦平滑肌组织,将其剪成1~2 mm³小块后,使用Ⅱ型胶原酶消化法于37℃培养箱内消化60 min,离心后过200目筛,接种于DMEM/F12完全培养基（含5 ng/mL干细胞因子）中进行培养。用酪氨酸蛋白激酶受体c-kit特异性抗体免疫荧光染色鉴定细胞类型。结果 培养72 h后,于倒置显微镜下观察,可见细胞贴壁,呈不规则三角形、星形或梭形,有多个突起;随着培养时间的延长,各突起彼此相互连接形成网络;此原代培养细胞c-kit抗体免疫荧光染色呈阳性。结论 成功建立了一套由成年SD大鼠胃窦组织采用Ⅱ型胶原酶消化法原代培养ICC的方法,为ICC的生理功能、病理改变以及胃肠道生理与病理关系的研究奠定了基础。     

表皮生长因子对睾丸组织结构和功能影响的研究进展

表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)是一种由53个氨基酸组成的单链多肽类生长因子,是Cohen继神经生长因子(NGF)之后偶然发现的。     

Caspase-9蛋白在亚慢性砷染毒大鼠睾丸间质细胞中的表达研究

[目的]探讨亚慢性砷染毒对大鼠睾丸间质细胞Caspase-9蛋白表达的影响。[方法]将40只健康成年清洁级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为对照组以及低、中、高剂量染毒组,每组10只。采用自由饮水方式进行染毒,低、中、高剂量染毒组亚砷酸钠的染毒剂量分别为2.4、12、60 mg/L,对照组给予生理盐水,染毒试验持续14周。染毒试验结束后,检测大鼠外周血白细胞数量;采用ELISA法检测大鼠血清TNF-α及IL-1的浓度;利用透射电镜观察大鼠精子的超微结构;应用免疫组化法检测大鼠睾丸间质细胞Caspase-9蛋白的表达定位及表达水平。[结果]与对照组相比,中、高剂量染毒组大鼠血清中TNF-α、IL-1浓度及白细胞计数均显著（P<0.05）升高。透射电镜下,对照组精子顶体结构完整,厚度及染色均匀;低剂量染毒组可见精子胞膜肿胀,核染色质较均匀;中剂量染毒组精子顶体与核分离,胞膜肿胀;高剂量染毒组精子尾部中断,轴丝排列紊乱。免疫组化法分析表明,Caspase-9蛋白主要表达于睾丸间质细胞的细胞质,表达信号呈棕褐色;与对照组相比,各剂量染毒组大鼠睾丸组织内Caspase-9蛋白的表达水平均显著...     

钼对TM3小鼠睾丸间质细胞周期和凋亡的影响

以体外培养的小鼠睾丸间质细胞系TM3 为材料,加入不同质量浓度的钼酸钠溶液(0,10,20,40,80,160mg/L)染毒培养,分别在干预4,8,12,24,48h采用MTT法检测细胞的增殖。干预48h后,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的变化。结果表明:与对照组相比,不同剂量钼酸钠作用24h后,睾丸间质细胞的增殖活性均受到抑制;不同质量浓度的钼酸钠作用48h后,细胞周期阻滞于G0/G1期,20mg/L及其以上剂量组G0/G1期细胞百分率与对照组相比显著升高(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,各剂量组TM3 小鼠睾丸间质细胞凋亡率显著升高,差异极显著(P<0.01);细胞尾部DNA含量及细胞尾长随着钼剂量的增加呈不同程度的增加,且存在着剂量—效应关系。结论说明钼能够引起睾丸间质细胞周期的紊乱,并诱导睾丸间质细胞发生DNA损伤和凋亡。     

X射线照射对体外培养仔猪睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响

通过X射线照射体外培养仔猪睾丸间质细胞(Leydig Cells,LC),检测睾酮分泌及LC增殖情况,了解X射线对雄性睾酮分泌的影响.以3周龄仔猪为研究对象,采用体外培养体系,在hCG诱导下,X射线辐射,测定24 h后LC睾酮分泌量及LC增殖的影响.结果显示,试验常用X射线曝光剂量(43.12～84.86 μGy)曝光一次以及在63.16μGy剂量下照射5 min、15min、30 min对体外培养仔猪睾丸间质增殖有抑制作用,但在曝光剂量43.12～84.86 μGy下LC睾酮分泌量与对照组相比差异不显著,在63.16μGy剂量下照射15 min、30 min睾酮分泌量与对照组相比差异显著(P＜0.05).表明常用X射线剂量曝光一次对睾丸间质细胞增殖有抑制作用,但睾酮分泌量影响不大,但随着照射时间的延长,间质细胞增殖和睾酮分泌显著下降,故在临床使用X射线时应该缩短照射时间,并做好防护.     

玉米赤霉烯酮对猪睾丸间质细胞DNA损伤作用的彗星试验

[目的]观察玉米赤霉烯酮(ZEN)对猪睾丸间质细胞(Leydig cell)的DNA损伤效应。[方法]以体外培养的猪Leydig cell为材料,用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)测定ZEN对离体培养的猪睾丸间质细胞的半数致死浓度,选用0(对照组)、1、5、10和20μmol/L浓度的ZEN体外作用于猪Leydig cell,通过彗星试验观察了ZEN对猪Leydig cell DNA的损伤效应。[结果]ZEN浓度为0、1、5、10和20μmol/L时,所造成的细胞拖尾率分别为16.67%、34.00%、40.67%、52.00%和64.67%,各染毒组细胞拖尾率与对照组比较,差异均有极显著统计学意义(P<0.01),且存在明显的剂量-效应关系;各剂量组对应的拖尾细胞尾长(Tail length)分别为57.60±4.78、57.75±6.25、78.97±5.83、100.50±6.94和146.83±12.31μm,尾部DNA含量(Tail DNA%)分别为21.29±2.25%、22.24±2.43%、31.21±6.27%、37.45±4.33%和60.68±9.83%,与对照组比较,5μmol/L及以上ZEN浓度染毒组的Tail length和Tail DNA%均有显著性差异(P<0.05),且随ZEN浓度增加呈上升趋势。[结论]ZEN对猪Leydig cell存在遗传毒性,可以损伤Leydig cell的DNA,且有明显的剂量-效应关系。     

培养的睾丸间质细胞对hCG刺激的反应性

本文介绍了用酶解法结合差速离心分离仔猪睾丸间质细胞,并研究其对促性腺激素的反应性。结果表明在0～50IUml内,睾酮的分泌量随着hCG剂量的增加而增加,在50IUml～100IUml内,加大hCG剂量并不能增强间质细胞的分泌功能。研究还发现随着培养时间的延长,间质细胞分泌睾酮的功能逐渐减低,培养1d和2d时对hCG(人绒毛膜促性腺激素)刺激的反应能力最强;随着培养时间的进一步延长,间质细胞的反应性下降,4d时与对照无明显差异(P>0.05)。间质细胞对首次刺激的反应敏感,当连续给予刺激时,睾酮的分泌受到抑制,在24h的分泌峰后不再出现分泌高峰。而首次刺激后间隔2d再刺激,间质细胞虽有反应,但反应较弱。     

家兔卵巢间质细胞的分离培养与形态观察

采用0.1% 型胶原酶和2.5g/L胰蛋白酶-0.2g/LEDTA,分别用热消化法和冷消化法消化分离家兔卵巢间质细胞,以探讨其体外培养条件和生长特点。结果表明,无论用热消化法还是冷消化法,0.1% 型胶原酶的消化效果均好于2.5g/L胰蛋白酶-0.2g/LEDTA的消化效果,前者的细胞活率在90%以上,可用于体外培养;经74μm滤网过滤后的卵巢组织分离培养出梭形和不规则形的间质细胞,且2种类型的细胞能在同一培养体系中贴壁生长。说明0.1% 型胶原酶可用于家兔卵巢间质细胞的分离。