金线莲根尖染色体制片技术研究

探讨金线莲根尖染色体的制片方法。以金线莲幼苗的根尖为试材,采用常规压片法,研究不同取材时间、预处理时间、解离时间及染色时间对制片效果的影响。结果表明：根尖取材以9：30最佳,用0.002mol/L的8-羟基喹啉预处理4h,经卡诺液固定后,用1mol/LHCl于60℃下解离5min,再用改良的苯酚品红溶液染色10min后进行压片,能获得理想的制片效果。     

金线莲灰霉病病原菌的分离与鉴定

以广东河源地区温室大棚发病典型的金线莲病株为试材,对病原菌进行分离、致病性检测以及形态、分子鉴定。结果表明,引起广东河源金线莲叶片腐烂、茎部腐烂溢缩、植株倒伏等病症的是由葡萄孢盘菌（Botrytis）侵染引起的灰霉病。该病害在温室大棚低温高湿条件下易发病,且发病面积大、传染速度快。金线莲灰霉病的分离和鉴定可为制定相应的防治策略提供科学的理论依据。     

金线莲组织培养增殖培养基的筛选

[目的]筛选最佳的金线莲增殖培养基。,[方法]以金线莲组培苗的茎段和顶芽为外植体进行增殖培养,在光照时间12h／d,光照强度1200lx,温度（25±2）℃,pH值为5．8培养条件下比较不同基本培养基、细胞分裂素、生长素、添加物等因素对金线莲生长状况的影响。[结果]通过对不同培养基的培养效果进行对比分析后筛选出适宜的培养基分别是：生芽增殖最佳配方为MS＋琼脂7g/L＋蔗糖25g／L＋NAA0．2mg／L＋6-BA2mg／L;壮苗培养基为MS＋琼脂7g/L＋蔗糖25g/L＋蛋白胨2g／L＋花宝1号3g/L＋香蕉100g／L＋活性炭1g／L和1／2MS＋琼脂7g／L＋蔗糖25g／L＋蛋白胨2g／L＋香蕉100g／L＋活性炭1g／L。[结论]添加马铃薯、香蕉、蛋白胨、花宝一号、活性炭等添加物能显著地促进金线莲外植体的分化与生长。     

花生壳替代泥炭土对基质及金线莲生长和品质的影响

[目的]研究花生壳替代泥炭土作为栽培基质对金线莲生长品质及基质性质的影响,筛选出适宜金线莲生长的栽培基质配比.[方法]通过盆栽试验,设置5种处理基质:CK(100％泥炭土)、N75(75％泥炭土+25％花生壳)、N67(67％泥炭土+33％花生壳)、N50(50％泥炭土+50％花生壳)、N33(33％泥炭土+67％花生...     

不同品系及生长时间金线莲活性成分及挥发性物质比较分析

【目的】比较2个不同品系及不同生长时间金线莲主要活性成分和挥发性物质含量变化，为金线莲鉴别、筛选及评价提供理论依据。【方法】以福建小叶栽培品系土豪金以及大叶栽培品系大元宝为材料，分析评价不同生长时间金线莲中的挥发性物质并测定主要活性成分。【结果】总酚含量以种植18个月大元宝最高(265.07mg·kg^-1)，总黄酮和可溶性糖均以种植12个月土豪金最高(32.68 mg·g^-1、27.71 mg·kg^-1)，可溶性蛋白则以种植18个月的土豪金最高(600.62 mg·g^-1)。通过SPME-GC-MS共检测到6种醇、8种醛、4种酮及2-戊基呋喃，其总量以种植24个月的大元宝最高，而组织培养6个月的土豪金和大元宝挥发性物质含量为栽培苗峰值的22.9%与16.7%。此外，通过气味活性值(Odor activity value,OAV)和主成分分析(Principal component analysis,PCA)发现，(反)-2-己烯醛、辛醛、壬醛是土豪金关键挥发性物质，1-辛烯-3-醇、芳樟醇和β-紫罗...     

花多多对金线莲组培苗和移栽成活率的影响

以金线莲品种"泰宁一号"为试验材料,用MS与B5作为基础培养基,添加不同种类不同用量的花多多肥料,筛选出有利于金线莲组培苗培育壮苗和提高移栽成活率的最优培养基。结果表明:不同组合培养基对金线莲根茎和叶生长影响存在着明显差异,MS+添加物更有利于根、茎生长;而B5+添加物更有利于叶片生长;同时,与空白MS和B5培养基相比,适当增添不同量花多多可以显著地改善金线莲组培苗的长势、增加内含物和提高移栽成活率。其中,尤以MS+2 g花多多1号的处理更利于培育壮苗、提高移栽成活率。     

金线莲细菌性软腐病菌的鉴定及生物学特性

细菌性软腐病是金线莲栽培中发生的主要病害之一,其病原菌通常为软腐欧文氏菌黑茎病变种Eruinia carotovora var. atroseptica。本研究从浙江金华金线莲软腐病样品中分离到菌株J-4,致病性测定结果表明,该菌株侵染引起的金线莲软腐病与田间自然发病症状相同。利用细菌通用引物27F和1492R进行的PCR扩增实验发现,J-4的16S rDNA序列与已报道的Dickeya fangzhongdai JS5^T(NR_151914)的相应序列相似性高达99%以上;该序列系统发育关系分析显示,J-4与已报道的D. fangzhongdai菌株聚焦。以上结果表明,D. fangzhongdai J-4是引起金华地区金线莲软腐病的病原菌。该菌株具备在39 ℃以及含有7% NaCl培养基中生长的能力,能液化明胶,不能降解淀粉;可以利用蔗糖、D-葡萄糖、D-甘露糖,不能利用D-麦芽糖、古老糖、D-海藻糖、α-葡萄糖等。金线莲软腐病病原的鉴定及研究为该病害的有效防治提供了参考。     

不同来源斑叶兰中金线莲苷含量研究

以金线莲为对照，采集贵州松桃、湖南永顺、重庆秀山、贵州遵义、浙江建德5种不同来源的斑叶兰，经6个月高山林下仿野生栽培，研究了斑叶兰和金线莲的金线莲苷含量。结果表明，5种来源斑叶兰金线莲苷含量组间差异极显著，且均显著低于金线莲。其中：来自湖南永顺的斑叶兰中金线莲苷含量最低，显著低于其他4个来源的斑叶兰；其余来源斑叶兰中金线莲苷含量差异不显著。     

金线莲资源遗传多样性分析及耐热性评价

金线莲（Anoectochilus roburghii）是具有极高经济价值的珍稀濒危兰科药用植物，高温是制约其广泛生产栽培的首要限制因子，选育耐热品种是抵御高温热害最经济有效的措施之一。本研究利用目标起始密码子多态性（SCoT）分子标记技术对24份金线莲种质资源进行遗传多样性分析，并利用多元统计分析的方法对其中20份样本进行耐热性评价。遗传多样性分析结果显示：在遗传系数0.602水平上，可以把金线莲种质分成I和II两大类，I类分成A和B两个亚群，台湾金线莲（TJ）与其他资源遗传距离较远，单独归为II类；A亚群中除了W来源于云南，其他均为福建西北部收集的资源；B亚群主要来自闽南地区和广西。通过对20份金线莲资源5个生理参数测定，发现热处理后叶绿素含量和SOD活性明显下降，相对电导率明显升高，而丙二醛和可溶性蛋白含量热处理后各资源表现不一。利用多元统计分析方法进行耐热性初步评价，结果显示，TL、L1、A20、GZ1等4份资源较为耐热，TJ、HX、L、M、A21等5份资源不耐热。     

金线莲应答高温胁迫的转录组学特征分析

为了研究高温胁迫下金线莲转录组表达特征，分析其热激响应机制。以正常培养和高温胁迫(45^oC)的金线莲(NYJ2)为材料，利用Illumina HiSeq^TM2000平台进行测序，通过Trinity软件进行De novo组装。结果共获得75688个unigene，有28323个unigene在Nr、KOG、KEGG和Swisspro数据库中得到功能注释，注释率为37.42%。其中，17532个unigene在KOG数据库中可归类到25个功能家族；10108个unigene被KEGG数据库注释到128个代谢途径中；17485个unigene被GO数据库的生物过程、分子功能和细胞组成三大功能注释到47个条目中。777个unigene在高温胁迫前后差异表达显著，其中胁迫后上调表达为362个，下调表达为415个，获得响应热胁迫的基因24个，包括热激蛋白的基因1个，PSⅠ和PSⅡ相关的基因15个、叶绿体rbcL基因3个、PLD基因2个，CAT编码基因、GAPDH基因、CYP编码基因各1个。本研究从转录组水平分析了金线莲对热胁迫的响应，这些数据将为功能基因的鉴定奠定基础，为培育耐高温金线莲品系提供了参考依据。