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构建表达eae和stx1/2B的融合基因,克隆eae基因的C端280个氨基酸残基(Int280)基因部分,以正确地阅读框定向插入到含有stx1/2B融合基因的质粒,构建重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS—PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达。薄层扫描分析表明:目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的50.67%。由于该融合蛋白由eae、stx1B、stx2B等三部分抗原组成,可刺激机体产生针对紧密素和StxB的抗体,在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。 相似文献
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The aim of the experiment was to construct the recombinant rabies virus SRV9 vaccine strain with EgM123 gene by reverse genetics technology and provide the technical means for effective prevention and control of rabies and hydatidosis in China's agricultural and pastoral areas.In this study,the structural protein N,P and L genes of rabies virus SRV9 were synthesized using gene synthesis technology,which was based on the complete genome sequence of rabies virus SRV9 and the fusion fragment of the N-P-M fusion fragment and the rabies G gene,through the carrier of enzyme insertion connection methods,the recombinant rabies virus L gene,N-P-M gene fusion fragment and G+EgM123+eGFP gene fusion fragment were successively recombined on the expression vector pcDNA3.1(-) to construct the full-length cDNA of recombinant rabies virus SRV9 with EgM123 gene.The synthesized genes were constructed on pcDNA3.1(-) expression vector,and the results of transformation,plasmid digestion and gene sequencing showed that the length of N,P,L,N+P+M and G+EgM123+eGFP gene fragments were 1 365,1 107,6 471,3 160 and 3 256 bp,respectively.The full-length cDNA fragment of EgM123 gene recombinant rabies virus full-length cDNA was 12 465 bp,and the sequencing results of each gene fragment were 100%.In this experiment,the full-length cDNA fragment of recombinant EgM123 rabies and eukaryotic expression vectors of the N,P and L genes of rabies virus were successfully constructed,which could save EgM123 gene recombinant rabies by reverse genetics,it also provided the reference for the development of rabies and hydatid disease combined gene recombinant oral live vaccine. 相似文献
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参照已发表的扩增伪狂犬病毒gI和gE部分基因的PCR方法,合成了一对引物,以PRV H株细胞毒为模板,扩增出一条约850 bp的片段,并进行克隆和测序。然后与GenBank上国内外其它毒株gE基因进行核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性分析,构建了遗传进化关系图。结果表明,PRV H株与其他15株PRV核苷酸和氨基酸的同源性分别为 97.0%~99.2%和93.2%~98.5%,其中与SH株最近,分别为99.2% 和98.5%;进化树分析表明,该毒株与目前国内流行的毒株在同一进化分支内,与国外毒株分属不同分支,说明分离的H毒株与目前国内流行的毒株一致。 相似文献
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正猪圆环病毒病(PCVD)已成为严重危害养猪业的传染病之一,此病侵犯机体免疫系统,可引起猪的免疫抑制,导致机体免疫力下降,从而继发或并发其他传染病。容易继发包括猪副嗜血杆菌病、猪繁殖与呼吸综合征病、伪狂犬病毒、链球菌性脑膜炎、细小病毒、附红细胞体病、沙门氏菌病、断奶后大肠埃希氏菌病、不明原因的腹泻、支原体肺炎和细菌性肺炎等。现已知的猪圆环病毒(PCV)有两个血清型,即PCV1和PCV2,PCV1为非致病性的病毒,PCV2为致病性的病毒,它是断奶仔猪多系统衰竭综合征、皮炎与肾病综合征、 相似文献
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<正>上期回顾:上一期主要介绍了AGPs替代方案中的抗菌肽和粘土矿物的作用等。3卵黄抗体在感染致病性微生物的情况下,使用卵黄抗体(一般指IgY)似乎是一个很有潜力的替代抗生素生长促进剂的技术方案。为了生产这些抗体,需要给产蛋鸡注射能引发猪特定疾病的致病原。给产蛋鸡注射这些抗原后会诱发免疫反应,产生相应的抗体。这些抗体通常都沉积在卵黄中。加强免疫是为了让抗体不断地沉积到卵黄中。然后将这些抗体从卵黄中提取出来并进行进 相似文献
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猪伪狂犬病病毒gE抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)-猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为诊断抗原和胶体金标记物,以羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带,制作检测猪伪狂犬病毒gE抗体的双抗原胶体金试纸条。利用方阵滴定试验筛选出金标抗原最佳工作浓度为17.6μg,检测线诊断抗原最佳标记量为1.76μg,血清最佳稀释度为1∶10,作用时间15 min,与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪布鲁菌(Brucella)阳性血清和PRVgE缺失疫苗接种的猪免疫血清检测线均不出现红色条带,与PRV标准阳性血清反应检测线出现红色条带。试纸条操作简单,肉眼于15 min内可判定结果;试纸条在室温保存6个月,其特异性和敏感性没有明显变化;与美国IDEXX和法国LSI gE-ELISA抗体检测诊断试剂盒检测结果比较,1 164份猪血清的符合率均为90.55%。制备的胶体金试纸条具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。 相似文献