酪蛋白酶解改性研究进展

酪蛋白酶法改性不仅可以提高人体对酪蛋白的消化吸收,其水解产物中含有许多生理活性肽。从酪蛋白的酶解方法和酶解产物功能性角度,综述了相关国内外研究进展。     

酪蛋白酶解改性研究进展

酪蛋白酶法改性不仅可以提高人体对酪蛋白的消化吸收,其水解产物中含有许多生理活性肽.从酪蛋白的酶解方法和酶解产物功能性角度,综述了相关国内外研究进展.     

奶牛酪蛋白αs1基因片段的扩增及泌乳素对其基因表达的影响

从泌乳中国黑白花奶牛的乳腺组织中提取基因组RNA，根据报道的奶牛酪蛋白αs1 mRNA序列设计其上、下游引物，用RT-PCR进行cDNA扩增，获得1条434bp的片段。测序分析结果表明，该片段为奶牛酪蛋白αs1 cDNA的部分序列，编码130个氨基酸组成的多肽；除一个碱基发生变异外，其余部分与报道的乳腺酪蛋白αs1cDNA序列完全一致。以此为基础，并以GAPDH为内标，研究了不同浓度泌乳素对旋转培养下奶牛乳腺组织酪蛋白αs1基因表达的影响。结果表明，奶牛乳腺组织在培养24h后，泌乳素为10μg／mL组的酪蛋白αs1基因表达水平最高，且显著高于对照组和2．5μg/mL组（P〈0．01），而与5．0和7．5μg／mL组之间差异不显著（P〉0．05）；对照组与2．5、5．0和7．5μg／mL组之间，2．5μg／mL组与5．0、7．5和10．0μg／mL之间差异均极显著（P〈0．01），而5．0μg／mL以上的3组之间差异不显著（P〉0．05）。结果提示，泌乳素的添加浓度以5．0μg／mL为佳。     

酪蛋白胶束粉的陶瓷膜分离生产工艺

为尽快建立酪蛋白胶束粉(micellar casein concentrate, MCC)的中试生产线,实现MCC在国内的工业化生产,该研究通过测定牛乳蛋白粒径,选取孔径40和100 nm的中空纤维陶瓷膜进行膜分离效果的对比,并选用膜分离效果较佳的陶瓷膜进行最佳操作参数的确定及稀释过滤工艺的研究,最后将自制MCC和进口MCC进行品质特性对比并分析其工业化生产的可能性。结果表明：孔径40 nm中空纤维陶瓷膜与孔径100 nm中空纤维陶瓷膜相比,渗透液中不含酪蛋白,能够减少酪蛋白损失,更适合于酪蛋白和乳清蛋白的分离,孔径40nm中空纤维陶瓷膜的最佳操作参数为操作压力2×105 Pa,料液温度50℃;采用四段式的连续稀释过滤工艺,可使料液中酪蛋白占真蛋白的比例从69.39%提升至93.34%,真蛋白占干物质的比例从38.45%提升至88.15%;稀释过滤完毕后膜的纯水通量衰减了39.98%,经生物酶清洗液清洗后膜的纯水通量恢复至初始的98.02%;自制MCC在成分组成上与加拿大Proteinco公司生产的MCC相比差异不显著（p < 0.05）,但在溶解度和粉粒的微观形态上优于Proteinco MCC;生产1 kg MCC需要原料乳46.24 L,成本为244.58元,可实现其国内工业化生产。研究结果为实现MCC在国内工业化生产及其应用性研究提供参考。     

牛β-酪蛋白座位无启动子基因打靶载体的构建

将带有新霉素基因(neo)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的质粒pEGFP-C1进行了改造,去掉neo基因的启动子(Psv40),在无启动子的neo和完整的GFP基因两侧分别加入一个LoxP位点。然后将带有LoxP位点、筛选标记基因和报告基因的结构装入左右分别为牛β-casein基因1590bp和5833bp的同源臂结构中,构建成无启动子基因打靶载体pT-1590-LoxP-GFP-LoxP-5833。     

串联启动子调控下的t-PAcDNA乳腺定位表达

由牛β-Casein启动子与大鼠WAP启动子串联构建了t-PAcDNA乳腺定位表达载体pSVL-WAPβ-PA，将3种表达载体pSVL-βb-PA,pSVL-WAP-PA及pSVL-WAPβ-PA分别注入怀孕家兔乳腺导管中，溶圈试验结果显示，3种表达载体均能在家兔乳腺中表达，且以分娩后第4d的乳汁中表达水平最高，分别为390，440，450ug.L^-1，本试验为进一步研究t-PA基因乳腺定位表达调控和建立t-PA乳腺生物反应器奠定了基础。     

不同前处理条件对动态光散射检测酪蛋白胶束粒径的影响

为了准确评价乳的稳定性和加工性能,探讨不同前处理条件对动态光散射检测酪蛋白胶束粒径的影响,研究了稀释液的种类(超纯水、钙咪唑缓冲液、模拟牛乳超滤液和牛乳超滤液)、稀释液温(4和25℃)和稀释液的放置时间(0~48 h)对脱脂乳中酪蛋白胶束粒径的动态光散射测试结果的影响,并将酪蛋白胶束粒径的动态光散射测试结果与冷冻透射电镜图像中测得的真实结果进行比较。研究发现以超纯水和钙咪唑缓冲液作为脱脂乳稀释液时,部分胶束发生解离,影响测试结果;采用牛乳超滤液及模拟牛乳超滤液作为稀释液时,胶束的微环境没有改变,反映了胶束的真实粒径及分布;放置24 h后,牛乳超滤液及模拟牛乳超滤液将产生颗粒;温度对测试有显著的影响(P0.05):4℃的样品用25℃的稀释液进行稀释后,动态光散射的计数率和粒径分别增大了16.6%和11.4%;25℃的样品用4℃的稀释液进行稀释后,计数率和粒径分别降低了16.1%和9.8%。结果表明酪蛋白胶束粒径的测试前处理较适宜的条件为:在与样品的温度相同条件下,以配置好后24 h内的模拟牛乳超滤液或牛乳超滤液(10 k Da超滤膜)作为脱脂乳的稀释液进行稀释。通过与冷冻电镜条件下测得的酪蛋白胶束粒径的真值比较,发现该前处理条件下酪蛋白胶束粒径的动态光散射测试结果的相对误差为-5.7%~1.8%,表明该样品前处理方法可用于动态光散射方法快速检测酪蛋白胶束粒径。研究结果为快速、准确地获取酪蛋白胶束的粒径信息,进而准确分析乳的稳定性及加工性能提供参考。     

酪蛋白磷酸酞在饲料中的应用

酪蛋白磷酸酞（ＣａｓｅｉｎＰｈｏｓｐｈｏｐｅｐｔｉｄｅ，ＣＰＰ）是最近发现的促钙吸收物质，国外一些国家将其作为一种添加剂应用于饲料工业中。酪蛋白磷酸酞（ＣＰＰ）是含有成簇的磷酸丝氨酸的酞，在动物小肠内能与钙结合阻止磷酸钙沉淀，使肠内溶解钙的量大大增加，从而促进钙的吸收和利用。畜禽对无机钙的吸收必须以可溶性状态由小肠吸收，但小肠下部的ｐＨ为中性至弱碱性易使无机钙产生沉淀而形成不溶物，这样势必影响钙的吸收。由酪蛋白制成的酪蛋白磷酸酞可防止无机钙的沉淀，故可促进小肠对钙的吸收。１酪蛋白磷酸酞（ＣＰＰ）…     

乳腺特异表达载体缺失片段的鉴定与修复

通过对pBC1中的乳腺特异表达启动子成分进行分析,鉴定了位于β酪蛋白启动子上游两个EcoRⅠ位点(-89~-94和-120~-125)之间的缺失片段,31bp的缺失使得该载体中的一个乳控盒元件(-112~-141)和一个乳腺因子识别序列(-92~-102)遭到破坏,并使得位于TATA框上游的所有启动子成分发生了位置改变。通过与山羊β酪蛋白启动子序列进行比较,设计并合成了缺失片段,经一系列的酶切和连接处理,使得该缺失得到了修复,修复后的载体具有所有乳蛋白表达需要的启动子调控原件。本试验结果为利用修复后的乳腺特异高效表达载体进行乳腺生物反应器的研究奠定了分子生物学基础。     

青海牛乳中αs1-酪蛋白的电泳研究

对青海省 4个品种 56 0头牛乳中的αs1 酪蛋白进行了电泳研究。结果发现 :(1)青海牛乳中αs1 酪蛋白基因座受αs1 CNB,αs1 CNC,αs1 CND 和αs1 CNE4个等位基因的控制 ,有αs1 CNBB ,αs1 CNBC ,αs1 CNBD ,αs1 CNBE ,αs1 CNCC和αs1 CNCD 6种基因型 ;(2 )在青海东部黄牛中发现一种新等位基因αs1 CNE 和一种罕见等位基因αs1 CND ;(3)在αs1 CN基因座上 ,柴达木黄牛与青海东部黄牛之间有最近的亲缘关系 ,而杂种牛与黑白花牛的亲缘关系较近。