近交系实验动物在生物医学等领域中的研究和应用

本文综述了近交系实验动物的发展简史、命名、优点在生物医学各领域中的应用及展望。     

版纳微型猪近交系生长激素基因克隆及原核表达研究

本研究旨在获得版纳微型猪近交系(BMI)生长激素基因编码区序列,揭示其原核表达规律.采用RTPCR方法从版纳微型猪近交系(BMI)脑垂体中克隆生长激素(GH)基因,并将其连接到pMD 18-T载体进行测序和生物信息学分析.克隆得到的GH基因cDNA序列长690 bp,其中CDS长651 bp,编码216个氨基酸,前26个氨基酸为信号肽序列.多猪种GH氨基酸序列比对表明其在各猪种中高度保守,版纳微型猪近交系的GH氨基酸序列与五指山猪和宁香猪的相似性均为100％,与藏猪、香猪、大乌猪、太湖猪、成华猪、内江猪、荣昌猪、长白猪、约克夏的相似性均为99％,与雅南猪、杜洛克的相似性均为98％.扩增GH成熟肽区编码序列,定向克隆至表达载体pET-32a(+),转化入大肠杆菌Rosseta (DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达蛋白.SDS-PAGE和Western blotting分析表明,重组质粒在大肠杆菌中获得了高效表达,融合蛋白以包涵体形式存在,分子质量约为40.6 ku.以上结果为进一步探究GH基因对BMI矮小性状的影响奠定了基础.     

DNA指纹技术在近交系动物遗传检测中的研究

采用生物素标记的(GGAT)4寡核苷酸探针对DBA1、DBA2两种近交系小鼠及DBA2×DBA1 F1代小鼠进行了DNA指纹图分析,并与常规生化位点标记分析法进行了比较.结果显示,DNA指纹图具有良好的多态性,不仅可以分辨生化位点标记分析法能够区分的不同品系的近交系动物,而且也能够分辨生化位点标记分析法不能区分的不同品系的近交系动物.研究还表明,用同一方法重复同一基因组DNA的指纹图时,获得相同的实验结果.因此,DNA指纹图法不仅比传统的生化位点检测分析法有更好的分辨力,也具有良好的稳定性.     

疾病模型近交系小鼠的繁殖保种方法及措施

文章旨在通过总结疾病模型的近交系小鼠遗传特性以及繁育特征,在饲养繁殖过程中不断调整、改善繁殖策略,以此实现疾病模型近交系小鼠品系的稳定遗传和可持续繁殖。结果显示,对疾病模型的近交系小鼠使用近交系常规繁育保种方法进行保种,并通过增加孕鼠营养、孕期特殊关照、放置丰容玩具、饲喂不同营养物质的饲料、调整配种周龄、替换繁殖种鼠等措施,可有效提升小鼠离乳存活率、增加经产胎次、提升母鼠受孕率,从而提升小鼠品系的整体繁殖性能,使小鼠稳定繁殖传代。     

版纳微型猪近交系性别决定基因（SRY）原核表达载体的构建及蛋白高效表达

 为了构建版纳微型猪近交系SRY的原核表达载体pET 32a(+) SRY,并通过诱导使其在大肠杆菌中获得高效表达,研究采用添加限制性内切酶位点的引物特异性扩增SRY,连入pMD19 T simple载体,转化入大肠杆菌DH5α,克隆后提取pMD19 T SRY阳性重组质粒,使用相同的内切酶同时对pMD19 T SRY质粒和原核表达pET 32a（+）载体进行酶切,连接后使SRY定向克隆到pET 32a(+)表达载体中。经PCR、酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌感受态DH5α,提取质粒后再次转化大肠杆菌Rosetta（DE3）,用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,并通过15% SDS PAGE鉴定。结果显示,不同浓度IPTG诱导的SRY均在大肠杆菌中进行了高效特异性融合表达。     

近交系高表达HBV转基因小鼠的建立及表达传代稳定性

将纯化的高表达 1.3copy HBV全基因 ,通过原核显微注射方法 ,建立了近交系 ( Balb/ c)高表达 HBV转基因小鼠模型 ,以血清 HBs Ag为检测指标 ,对该转基因鼠 HBV基因持续表达水平和数代遗传稳定性进行了研究。结果 ,获高表达 HBV( 1.3copy)转基因 Balb/ c小鼠 Founder 2只 ,用回交传代方法 ,本 HBV转基因小鼠已稳定传至第 8代 ,每代转基因鼠阳性率平均保持在 4 4 .6 7% ,性别对 HBV转基因小鼠总体阳性率有影响 ,雄性小鼠的阳性率 ( 4 4.15 % )明显高于雌性小鼠 ( 4 2 .2 6 % ) ( P<0 .0 5 ) ;血清表达 HBs Ag水平较稳定 ,平均为 ( 85 3.2 8± 2 35 .4 3)μg/ L ,雌雄小鼠之间表达水平没有明显差异。     

近交系大鼠DNA指纹图稳定性的研究

为建立ＤＮＡ指纹技术在近交系大鼠遗传监测中的方法，采用ＤＮＡ指纹图对国内已知的７个品系近交系大鼠群体进行了分析，并对相同ＤＮＡ进行了多次ＤＮＡ指纹图重复实验，其结果表明：不同品系之间ＤＮＡ指纹图差异较大，其平均图带数为（１６．３６０±２．１７８），共有带率为（０．０６１±０．００８），相似系数为（０．０６２±０．００８），相同ＤＮＡ指纹图概率为３．６９１×１０－２３。相同ＤＮＡ不同次制作的ＤＮＡ指纹图谱基本一致（Ｐ＞０．０５）。同一个体不同组织的ＤＮＡ指纹图也基本相同，从而证实了该方法具有高度的稳定性和可重复性。