五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因变异特征研究

为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析.序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98.3 ％～99.3％,具有明显G→A突变,并且偏好发生于GA、GG.进一步分析表明,在PERV-env序列190 bp和1 875 bp位置均有G→A突变发生.PERV-env基因遗传进化树分析表明,五指山来源的PERV与国外小型猪PERV-A亲缘关系较近,但仍存在差异.本实验将有助于PERV分子特性的研究,为进一步开展异种移植中PERV的安全性评价奠定基础.     

近交系猪群的现代化饲养管理

1近交系的命名 近交系是由全同胞兄妹或亲子连续20世代交配而育成的，其近交系数应达到或大于98．6％，且所有个体可以追溯到一对共同祖先。亲子配或全同胞配是近交的2种极端形式，也称“急骤近交”。     

“五指山猪实验用近交系培育及分子遗传学基础研究”获得2006—2007年度神农中华农业科技一等奖

由中国农业科学院北京市畜牧兽医研究所基因与细胞工程研究室主持完成的“五指山猪试验用近交系培育体系及分子遗传学基础研究”成果被评为2006—2007年度神农中华农业科技一等奖。     

我国破解科学界难题 培育“版纳微型猪”

国际科学界近大半个世纪都没有攻克的难题——大型哺乳类实验动物近交系，被我国科学家成功破解。权威专家认为，云南农业大学成功培育的“版纳微型猪”近交系，是我国原始创新的重大科技成果．对生物医学研究意义重大。     

近交系五指山小型猪泌尿系统的解剖学研究

采用大体解剖学方法对近交系五指山小型猪泌尿系统的解剖学结构特点进行观察研究，发现近交系五指山小型猪泌尿器官的大体形态和位置与人及其它小型猪的基本相似。从解剖学角度来看，成年近交系五指山小型猪肾脏更适合于异种肾移植，为比较医学和临床上异种肾移植提供形态学资料。     

AMMS／13近交系小鼠的培育及其生物学特性

ＡＭＭＳ／１３近交系小鼠由本中心用ＡＭＭＳ／１与Ｃ３Ｈ／ＨｅＭｓ２种近交系小鼠杂交育成，现已繁殖至Ｆ４０多代。毛色为桂皮色，毛色基因为ＡＡｂｂＣＣＤＤ；经组织相容性基因、生化基因及染色体组型分析等遗传检测，符合近交系标准。其初孕期产仔数为６．５２±１．４３，离乳率为８８．８１％（１～６胎），成年雌鼠体重为（２２．８０±１．４７）ｇ，雄鼠为（２４．７７±１．６５）ｇ，经产母鼠乳腺癌发病率为５６．７％。血清ＩｇＧ含量随日龄而增加，相同条件下，雌性比雄性高。该系小鼠可作为莱姆螺旋体病的模型动物。     

Cloning and Functional Bioinformatics Analysis of TSARG7 Gene in Banna Mini-pig Inbred Line

In order to obtain TSATG7 gene sequence and analyze mRNA expression in tissue of Banna Mini-pig inbred line (BMI), we used TSARG7 gene mRNA sequence of pig and related species from GenBank as reference sequences to design specific primers and amplify BMI TSARG7 gene. The semi-quantitative was used to analyze the expression of TSARG7 gene in 10 important tissues, protein sequence was used to carry out functional bioinformatics analysis. A coding sequence of 1 371 bp (GenBank accession No.: KU950831, the corresponding amino acid sequence accession No.: AMY60405) of BMI TSARG7 was obtained, which encoded a protein of 456 amino acids, the protein molecular weight was 52.05 ku, and the isoelectric point was 9.28. Multiple tissue expression indicated that TSARG7 gene expressed highly in the testis, middle and low expression in the other tissues. Functional bioinformatics analysis indicated that TSARG7 protein contained one conserved domain, three transmembrane regions, and no signal peptide sequences;Its N-terminal was hydrophobic and C-terminal was hydrophilic;It had five kinds functional active sites and a 94.1% to located in cytoplasmic. The results of the study would lay a foundation for further study of the gene about its functions in pig spermatogenesis and sexual maturation.     

PCSK9基因D374Y突变体转基因猪的制备与分析

【目的】前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/Kexin type 9,PCSK9)基因是人类高胆固醇血症(autosomal dominant hypercholesterolemia,ADH)的主效基因之一,其获得型突变与人类家族性高胆固醇血症有直接的关系。PCSK9-D374Y突变体对低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)的降解能力比野生型蛋白强十倍,增加了患高胆固醇血症的风险,从而加速动脉粥样硬化的进程。猪心血管系统和血脂代谢方面与人类非常相近,成为研究动脉粥样硬化疾病的理想模型之一。然而自然发病的猪缺乏,且诱导病征发生缓慢。因此拟利用体细胞克隆技术制备PCSK9获得型突变体转基因猪,以模拟动脉血管的病理学变化,加速发病进程,为动脉粥样硬化的研究提供理想的动物模型。【方法】研究使用人PCSK9基因D374Y突变体载体,用电转染的方法将其整合到五指山小型猪近交系胎儿成纤维细胞中,并通过体细胞核移植技术获得了人PCSK9基因D374Y突变体转基因猪个体。通过Southern-blot、实时荧光定量PCR、Western-blot等方法,分别从DNA、RNA、蛋白的水平检测了人PCSK9基因在转基因猪肝脏中的整合表达情况。同时,通过组织化学染色与H.E.染色的方法对转基因猪进行了组织学检测。【结果】转基因阳性细胞集落在药筛的第3天开始出现,至第7天形成较大的单克隆点,且PCR检测结果显示扩增产物可以拼接为完整片段,说明外源片段在基因组中具有完整性;将筛选得到的阳性细胞作为体细胞克隆的供体细胞,通过体细胞核移植技术获得了转基因猪个体。PCR及Southern-blot检测结果显示,D374Y-PCSK9基因可以完整的插入猪的基因组中,且有串联重复现象;RT-PCR和QPCR检测结果表明,人PCSK9基因能在猪肝脏内正常转录且不影响猪内源性PCSK9基因的转录,且在其它内脏器官,如心、脾、肺、肾也能检测人PCSK9基因的表达,而猪内源性PCSK9基因在这些组织中表达量很低;Western-blot检测结果与RNA水平的检测类似。这些结果说明人D374Y-PCSK9基因成功整合到猪基因猪中,且能够正常转录与翻译。通过组织化学染色发现,与野生型猪肝脏相比,克隆猪肝脏中LDLR蛋白水平极显著低于野生型。另外,对克隆猪进行H.E.染色后发现其肝脏组织有明显的病理学变化,该结果说明,LDLR水平的急剧下降有可能是导致肝脏病变的原因。【结论】成功获得了人PCSK9基因D374Y突变体的克隆猪;与野生型猪肝脏相比,克隆猪肝脏中LDLR水平显著降低,并且克隆猪肝脏发生了明显病变。     

籼粳稻区重组近交系孕穗期耐冷性研究

以昆明小白谷和大理早籼杂交培育的孕穗期耐冷性重组近交系(RIL)为材料进行籼粳稻区水稻耐冷性研究。结果表明:(1)籼粳稻区株高、穗下节长、穗长和总粒数均呈数量性状的分布特征.(2)籼粳稻区一些性状间的相关性存在一定的差异,冷凉粳稻区株高与结实率等性状密切关性;相反高温粳稻区穗颈长与穗部4个性状达极显著或显著相关。(3)遗传研究表明对低温和高温均敏感的穗颈长和结实率受主效基因控制,多数弱耐冷单株的耐热性相对较强。     

SMMC/B小鼠遗传纯度的检测及其与亲代昆明种小鼠遗传关系的分析

以遗传研究中的模型蛋白—Hb为监测标记,应用生化学方法从分子水平上对SMMC/B小鼠Hb标记基因进行了检测,并分析了其与祖先昆明种小鼠的遗传关系。结果,SMMC/B小鼠在所检测的基因位点达到了纯合,符合近交系动物的要求;在昆明种封闭群内,按Hb电泳分型有Ⅰ型和Ⅱ型,SMMC/B与Ⅰ型个体之间有3个肽段的差异,与Ⅱ型个体之间有10个肽段的差异。由此认为,SMMC/B与祖先昆明种封闭群内具有Ⅰ型Hb的个体亲缘关系较近。