鸡痘病毒通用高效表达载体的构建及其初步应用

利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后将 FPV早晚期启动子 PE/ L 及其启动的鹅源新城疫病毒 NDV ZJ1株的 F基因一并插入 p N1 1 S中 ,使PE/ L 与 Ps反向串联 ,从而构建出 1个含 NDV ZJ1株 F基因的重组 FPV高效双表达载体 p N1 1 SEF,其 MCS可以用于插入其他外源基因。在此基础上 ,将 NDV ZJ1株的 HN基因插入 p N1 1 SEF的 Ps启动子下游的 MCS中 ,构建了共表达 NDV ZJ1株 F和 HN基因的重组 FPV双表达载体 p N1 1 SEFHN。将 p H1 1 SEFHN质粒 DNA与 FPV2 82 E4株共转染 CEF,得到共表达 NDV ZJ1株和 HN基因的重组 FPV,间接免疫荧光实验初步证明外源基因得到了较好的表达。表明所构建的通用高效 FPV表达载体有利于高效基因工程活载体疫苗的研制 ,具有广阔的应用前景     

精子介导外源DNA转移的研究进展

精子因在受精过程中的独特作用,而被认为是转移外源ＤＮＡ的理想载体。本文对精子作载体进行转基因动物制作的方法、外源ＤＮＡ与精子作用的分子机制、导入动物个体或胚胎的外源ＤＮＡ的存在形式、影响精子与外源ＤＮＡ结合的因素进行了论述,并对精子作为载体的研究方向和发展前景给予了预测。     

NDV融合蛋白裂解位点基因的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建与鉴定

将新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株和ＬａＳｏｔａＥ４株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因从本实验室构建的重组质粒ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ中用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ切出。将这２个毒株的Ｆｃ基因定向克隆入昆虫杆状病毒表达载体ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株的Ｆｃ基因克隆ｐＸ３Ｆ４６Ｆｃ和ｐＸ３ＬａＦｃ。重组质粒用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ、ＰｓｔⅠ酶切法、ＰＣＲ和核酸探针法进行了鉴定，证明插入的基因来自ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵ－ＣＬａＦｃ，插入的位置和方向都正确。这２个载体的构建为Ｆｃ基因在昆虫细胞系统的表达创造了条件。     

抗菌肽SMAP-29基因密码子优化及其毕赤酵母表达载体构建

以GenBank发表的绵羊骨髓抗菌肽(SMAP-29)基因(L46854)为模板,选择毕赤酵母偏好密码子,合成SMAP-29成熟肽基因。将合成的基因克隆入pPIC 3.5K载体中构建重组酵母胞内表达载体pPIC 3.5K-SMAP-29,经酶切分析、PCR和测序鉴定证明载体构建成功。表达载体的正确构建为SMAP-29的高效表达和生物学活性研究奠定基础。     

鹅颗粒细胞转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)真核表达质粒的构建

【目的】本研究旨在构建鹅颗粒细胞转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)绿色荧光蛋白表达载体p EGFP-N1/GATA4,为研究GATA4在鹅颗粒细胞中功能作用奠定实验基础。【方法】原代培养鹅颗粒细胞,取细胞总RNA,RT-PCR扩增出GATA4 c DNA基因片段,克隆连接至载体PMD19-T,用限制性内切酶Eco RI及Ban HI酶切,鉴定克隆产物为所需的目的基因片段后,胶回收目的基因,并进行序列测定,然后将上述胶回收产物与载体p EGFP-N1连接,导入感受态DH5α,菌液涂于含卡那霉素琼脂糖平板上,挑取抗性单菌落,进行质粒DNA扩增,酶切及测序鉴定,证实均为阳性克隆,即GATA4与p EGFP-N1体外重组成功。【结论】采用体外重组技术,成功将鹅GATA4 c DNA插入荧光蛋白表达载体p EGFP-N1中。     

大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因缺陷型菌株的筛选

本研究以大肠杆菌(含有β半乳糖苷酶基因)为试验对象，用氮-甲基-氮硝基氮-亚硝基胍对其进行诱导突变，在选择培养基上对突变体菌株进行筛选。结果成功地对鸡消化道共生乳酸菌进行了诱导突变，筛选到了β-半乳糖苷酶基因缺陷型的大肠杆菌受体菌株，从而为构建以β-半乳糖苷酶基因为选择标记的载体表达系统奠定了基础。     

控制预混料内部发生反应的措施

在饲料生产中，预混料是最核心的部分，预混料质量的好坏，直接影响到配合饲料的饲喂效果。为此，预混料设计者不但要使预混料营养价值全面合理，避免使用有害物质原料(尤其要注意矿物质中重金属含量)，又要尽量减少使用虽无害但可能在加工、储存和使用过程中出现问题的原料。比如，氯化胆碱容易吸湿而造成预混料易结块、维生素和微量元素间易发生反应而造成维生素失效、微量元素易吸湿等。但是实际生产中又需要使用这些原料，因此如何控制预混料各原料间发生反应，使他们各自的生物利用率达到最佳，是提高预混料质量的一个重要环节。     

固体分散体的载体选择及质量评价的新进展

应用固体分散体技术制备速效、高效制剂，缓释、控释制剂以及定位释药型制剂是当前研究的较为新颖的课题。近年来，人们采用水溶性聚合物、脂溶性材料、脂质材料以及表面活性剂等为载体制备成缓释、控释的固体分散体，大大扩大了其应用范围。其制备方法很多，载体选择的范围也很广，其质量评价包括固体分散体的鉴别及其稳定性考察。常用X-射线衍     

羊痘的研究进展

羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病。羊痘是以发热、全身性的皮肤损伤、痘疹和淋巴结病变为特征。羊痘病毒是所有动物痘病毒中最为重要的一种，严重影响养羊业和国际贸易的发展。本文从病原学、流行病学、诊断和预防控制等方面对羊痘做一综述。虽然此病从临床症状和宿主特异性上很容易做出诊断，但进一步的实验室确诊还是必要的，现已有多种检测方法和诊断试剂。控制该病最有效的方法还是使用疫苗对易感动物进行免疫接种。