兔软骨细胞的分离培养的方法研究

探讨兔关节软骨细胞分离培养的方法。采用胰蛋白酶联合低浓度Ⅱ型胶原酶长时间消化分离软骨细胞。结果 原代培养的兔关节软骨细胞活力强,12~24 h贴壁,细胞形态多为小的梭形、纺锤形或三角形。体外培养的兔软骨细胞表型能保持3代稳定,具有良好的生物学活性,方法简单可行,可用于实验研究.     

药用植物淫羊藿与富血小板血浆协同对软骨细胞的增殖作用

观察淫羊藿和富血小板血浆(PRP)对SD大鼠软骨细胞增殖作用的影响,探讨两者对软骨细胞的协同作用。取3周龄SD大鼠的膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,分别采用MTT法、流式细胞术对细胞增殖作用进行检测。结果表明: (1) PRP对软骨细胞增殖有显著的促进作用(P<001);(2)淫羊藿对软骨细胞有一定的增殖作用,但不显著;(3)淫羊藿联合PRP对软骨细胞的增殖作用显著下降,效果低于淫羊藿或PRP组(P<001)。淫羊藿联合PRP对软骨细胞有显著抑制作用(P<001),推断淫羊藿某些成分抑制了PRP中生长因子的活性,从而减弱了PRP对软骨细胞的作用,该推断有待进一步研究确认。     

雌激素与尼古丁对软骨细胞基质代谢影响

雌激素和尼古丁是2种对骨关节炎发病有影响的重要因素,但其影响的具体分子机制仍然存在争议。本研究旨在探讨这2种因素单独和叠加对软骨细胞代谢的影响,从而为骨关节炎的发病机制研究提供一定的参考。鼠胚胎瘤来源的软骨前体细胞系ATDC5在进行铁硒传递蛋白ITS定向诱导能够分化为软骨细胞。研究中对诱导后获得的软骨细胞用雌激素及尼古丁进行了处理。处理后细胞胞外基质蛋白聚糖和二型胶原表达水平分别用甲苯胺蓝染色和免疫组化进行检测,蛋白表达水平和mRNA水平分别进行了Western blot和Real-time PCR验证。研究结果显示尼古丁会造成软骨细胞2种胞外基质分泌的降低,并且促进分解酶MMP13的表达,抑制合成相关蛋白BMP-7的表达。而雌激素能够通过抑制分解酶MMP13和促进基质合成相关蛋白BMP-7的表达来挽回尼古丁对软骨细胞胞外基质的破坏作用。但在mRNA水平,与仅用尼古丁处理相比,雌激素会同时促进mmp13和bmp-7的表达,推测是因为雌激素增强了细胞的代谢效率。这些结果表明,雌激素对受到尼古丁影响的软骨细胞具有保护作用,这可能是骨关节炎初期防治的一个潜在治疗方案。     

肉鸡胫骨软骨发育不良病因的研究进展

胫骨软骨发育不良（Tibial Dyschondroplasia，TD）由Leach在1965年首次发现。是家禽胫跗骨近端生长板软骨细胞发育异常，导致运动障碍和站立困难的群发性疾病。常见于肉鸡，以软骨内骨化受阻和胫骨干骺端软骨细胞增生形成无血管的玉白色“软骨楔”为特征。世界各国均有发生，给养禽业造成了巨大损失。     

Runx2研究进展

Runx2是转录因子Runxx家族成员之一,作为骨细胞的特异转录因子,对骨组织的形成和重建起着重要作用。Runxx调控间充质干细胞向成骨细胞分化,促进软骨细胞的成熟和软骨的血管化,与破骨细胞分化及细胞外基质的形成密切相关,与骨髓内皮细胞的迁移和浸润、血管增生和肿瘤细胞的浸润、牙齿和皮肤毛囊发育也密切相关。通过对Runx2基因调控机制的研究,已为骨折的愈合及骨代谢性疾病的预防和治疗提供了新的思路。     

中介蝮蛇毒纤溶酶基因克隆及生物信息学分析

目的：克隆中介蝮蛇(Gloydius intermedius)纤维溶解酶（Fibrinolytic enzyme,FLE）基因,分析其基因序列并对该基因的功能进行分析。材料及方法：从中介蝮蛇毒腺细胞中提取总RNA,通过RT-PCR法扩增纤溶酶基因,与pMD18-T载体连接进行TA克隆,再进行序列的测定并且对该序列进行分析。结果：扩增得到完整开放读码框在内的长为777bp的纤溶酶基因序列。结论：成功克隆了编码中介蝮蛇纤溶酶的基因序列,推导其编码的氨基酸序列。开放读码框编码258个氨基酸,含有大量疏水氨基酸。其中,前1-19位氨基酸编码信号肽;根据同源性推测,以His65、Asp110和Ser204组成纤溶酶的活性中心并高度保守;序列内含12个Cys,两两配对结合成的6个二硫键对纤溶酶的高级构型和稳定性至关重要。成功克隆中介蝮蛇毒纤溶酶基因为进一步研究该基因的遗传特征以及为该酶在原核及真核生物中的表达研究提供依据。     

梅花鹿CYP26B1基因过表达载体的构建及进化树分析

CYP26B1是调节体内视黄酸(retinoic acid,RA)水平的一个关键酶,广泛存在于哺乳动物器官和组织中,对软骨细胞的分化具有重要的调节作用。本试验参照NCBI GenBank中已发表的牛CYP26B1基因序列,设计特异性引物。利用PCR方法扩增CYP26B1基因的编码区,并与pGEM-T载体连接,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后与pcDNA3.1载体融合得到CYP26B1过表达重组质粒。经测序鉴定后,转染鹿茸软骨细胞,利用实时荧光定量PCR方法检测CYP26B1mRNA表达变化。应用MEGA软件的Test Neighbor-Joining Tree法绘制CYP26B1基因系统进化树并进行比对分析。结果显示,重组质粒pcDNA3.1-CYP26B1转染鹿茸软骨细胞后,CYP26B1的表达量显著升高(P<0.05)。进化树分析结果表明,梅花鹿CYP26B1基因与牛的基因同源性最高。本研究成功构建了梅花鹿CYP26B1过表达载体,为进一步研究CYP26B1在鹿茸生长及再生中的作用奠定基础。     

前沿扫描六则

正荷兰出现首家"粪便银行"据了解,有一种叫困难梭状芽孢杆菌的细菌会造成肠道感染,引发患者极度不适,导致腹泻、大肠炎、毒性巨结肠等症状,并造成病人败血症,甚至死亡。然而,通过粪便移植可以让健康细菌回到患者体内,重建患者肠内的健康菌丛。因此,早在2012年美国就已经出现专门负责收集、检测粪便的"粪便银行",为美国122家医院提供粪便微生物移     

miRNA调控鹿茸生长发育的研究进展

鹿茸是雄性鹿科动物(除驯鹿外)特有的能够周期性再生的器官,其生长发育受到多种因素的共同调控。miRNA(microRNA)是一类在真核生物中发现的内源性的具有调控功能的非编码RNA,在基因表达调控、细胞周期、生物体发育等方面发挥着重要的调控作用。本文从miRNA的相关技术、鹿茸组织中miRNA的鉴定、miRNA对生长因子的调控作用、miRNA对鹿茸细胞增殖的作用以及miRNA对鹿茸再生调控的研究几个方面就现有miRNA对鹿茸生长发育的研究进行总结和展望,为今后鹿茸生长发育机理的诠释具有一定的意义。     

梅花鹿鹿茸软骨细胞的培养及X型胶原的克隆和序列分析

型胶原是肥大软骨细胞的标志物,据GenBank中收录的人、鼠、牛、猪型胶原基因的序列,进行同源性分析,在同源性高的相对保守区域设计了1对特异性引物。建立梅花鹿鹿茸软骨细胞的分离培养方法,培养鹿茸软骨细胞。提取细胞的总RNA,以总RNA为模板,用RT-PCR方法克隆了梅花鹿的型胶原基因序列为877的片段,此片段全部位于编码区,与已报道的牛的型胶原基因的序列比较,同源性达到96%。共有35个碱基发生变异。DNAStar软件分析表明,二者推导的氨基酸序列同源性为95.5%。