南江黄羊LHβ基因序列测定及分析

参照GenBank中发表的奶牛、绵羊和猪LHβ基因序列设计引物，以35只南江黄羊为研究对象，利用PCR技术扩增并测定了山羊LHβ基因部分序列（GenBank登录号：AY853264），并利用GenBank中不同物种LHβ基因的部分编码区序列进行了系统发育分析。结果表明：在测定出的929bp序列中，包含LHβ基因5’侧翼区（136bp）、2个内含子全序列（分别为297bp和235bp）、第1和第2外显子全序列（分别为26bp和168bp）以及第3外显子部分序列（67bp）。除第1外显子前11bp为5’非翻译区外，其余外显子序列共编码83个氨基酸，前20个氨基酸为信号肽序列。山羊LHβ基因序列富含GC。在测定的35个个体中共检测到8个单碱基突变位点，位于外显子中的2个突变位点均为同义突变，其余6个突变位点位于5’侧翼区和内含子。系统发育分析结果与物种实际的演化顺序不完全相符，可能是由物种间LHβ基因GC含量的较大差异引起。本研究首次报道了山羊LHβ基因序列，为进一步探明山羊繁殖性能的遗传机理奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株GF1107株ORF7基因的克隆与表达

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ATCC VR2332株的核衣壳蛋白基因的核苷酸序列，设计并合成1对特异性引物。应用RT-PCR方法扩增PRRSV GF 1107株（GenBank登陆号：AY684124）的ORF7片段。将扩增片段克隆入pMD18-T载体中获得含有相应片段的重组质粒pMDHB-ORF7。对质粒中的插入片段进行测序，应用DNAstar序列分析软件对所测序列与GenBank中PRRSV毒株进行同源性比较。将0RF7基因克隆入原核表达载体pET-32a（＋）中，在IPTG的诱导下成功获得表达，经Western blotting分析表明。表达蛋白能够与PRRSV的阳性血清发生特异性反应，为PRRSV新型诊断试剂的研究奠定了基础。     

传染性支气管炎病毒的分离及其S1基因高变区Ⅰ的遗传变异性分析

鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis，IB）是国际兽疫局（OIE）及我国规定的家禽B类／二类传染病之一。病原IBV血清型众多，各血清型IBV之间仅有部分或完全没有交叉保护作用，变异株又不断出现，因此免疫鸡群也会暴发疾病。     

水稻黄单胞菌致病相关基因插入突变体系的建立

 水稻白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae, Xoo）和条斑病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzicola, Xoc）是水稻上的模式病原菌,分别引起水稻白叶枯病（bacterial blight, BB）和细菌性条斑病（bacterial leaf streak, BLS）。为了精确和高效地实现目的基因的突变,本研究利用pK18mobGⅡ载体,建立了一套适于Xoo和Xoc目的基因定点插入的突变体系。通过同源片段与目的基因间的同源重组,成功获得了Xoo和Xoc的hrcV和hrpF突变体。PCR和Southern杂交证实：pK18mobGⅡ携带不同大小的同源片段,能够整合于hrcV和hrpF的特定位点;200～400 bp的同源片段能够获得最佳的突变效率;两亲接合的转化效率是电转化的5～100倍。毒性测定结果显示,hrcV基因决定着Xoo在水稻上的致病性。致病相关基因插入突变体系的建立为研究水稻黄单胞菌与水稻互作中致病相关基因的功能奠定了遗传学研究基础。     

乳铁蛋白在动物防御系统中的作用

<正>乳铁蛋白(LF)最初在牛乳中发现,后来发现这种蛋白质也广泛地存在于猪、鼠、人及其它哺乳动物的唾液、泪液、支气管粘液、胆汁、胰液等外分泌液以及嗜中性粒细胞次级颗粒和血浆中。正常生理条件下LF在血浆中含量很低,而富含于各种外分泌液和嗜中性粒细胞的次级颗粒中。     

禽呼肠孤病毒σB和σC蛋白在昆虫细胞中的共表达

本研究旨在获得具有天然构象和活性良好的禽呼肠孤病毒（ARV）σB和σC蛋白,采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中共表达σB和σC蛋白,并对其活性进行鉴定。根据NCBI数据库中ARV σB和σC基因序列设计引物,将两个基因克隆至pFast-Dual载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭杆粒。通过转染sf9细胞,筛选到含有σB和σC基因的重组病毒。将重组病毒感染sf9细胞,通过优化接毒量和收获时间等参数,确定最佳表达条件,在sf9细胞中高效共表达σB和σC蛋白。Western blotting和间接免疫荧光（IFA）检测结果表明,成功在sf9细胞中共表达了ARV σB和σC蛋白,并具有很好的生物学活性。本试验结果为开发鉴别诊断试剂以及ARV颗粒疫苗的研究奠定了基础。     

奶牛乳腺组织乳房炎抗性基因反向Northern杂交鉴定

通过反向Northern对构建的文库进行进一步筛选,发现了43个ESTs,测序后得到40个质量合格的EST序列.EST分为3类,第1类代表已知基因,指与GenBank中的基因同源性大于80%、同源片段长度大于100 bp的EST,其中主要是蛋白编码序列,研究中发现的37个为已知基因;第2类代表已知EST,指与已知基因无同源性或同源性较低,但与dbEST库中的序列同源性大于95%、同源性长度大于100 bp的EST,研究中发现的3个为已知EST;达不到上述标准的EST归入第3组即全新的EST,研究未发现新的EST.对检索出的已知基因,从其功能上看主要参与细胞结构、代谢、凋亡、转运、信号传导、转录和翻译调控、机体防御等生命过程,表明这些基因涉及到抗病反应的全过程,包括病原识别的抗性基因、与信号传导和转录调控有关的基因、抗凋亡的基因.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒HB-3（cz）杉ORF5基因序列分析及原核表达

从河北沧州分离到1株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒,接种Marc-145细胞,经过4代盲传后,出现细胞病变,经鉴定为PRRSV,命名为H13-3（cz）株。根据GenBank公布的PRRSV CH—1a株ORF5基因的核苷酸序列,设计合成一对特异性引物（P1／P2）,用RT-PCR方法扩增完整ORF5基因,将扩增产物连接到pGM-T载体并转化克隆菌,阳性重组质粒进行序列测定与分析。再设计另一对引物（P3／P4）从重组载体pGM—ORF5中扩增出缺失了N端28个氨基酸残基的tGP5的编码序列tORF5,克隆入原核表达载体pGEX-6P-1,并成功获得表达,经Western-blotting分析表明,表达蛋白与阳性血清发生特异性反应。为研制PRRSV新型疫苗及诊断试剂奠定了基础。     

家蚕（Bombyxmori）全基因组框架图

我们在此报告了家蚕（Bombyxmori）的基因组序列框架图,它覆盖了所有已知家蚕基因的90．9％。我们估计的基因数是18510,超过黑腹果蝇报道的13379个基因。我们将家蚕基因组与果蝇、蚊子、蜘蛛和蝴蝶等进行了比较分析,揭示了它们在基因组成上同时具有相似性和差异性。     

Cloning and Sequence Analysis of Major Histocompatibility Complex Ⅰ Gene from Goose F1 of Fast-growth Lines

According to the multiple alignments identified major histocompatibility complex Ⅰ (MHC Ⅰ) gene conserved sequence registered in GenBank from the family ducks (Anatidae) anser waterfowl, a pairs of specific primers for the fragments of MHCⅠgene of goose F1 from fast-growth lines were designed and synthesized by Primer Premier 5.0. Using the genome DNA of goose F1 from fast-growth lines, the target gene fragment was obtained by PCR. To conduct sequencing of the fragments of MHCⅠgene of goose F1 from fast-growth lines and make sequence alignment and analysis of protein structure and function by bioinformatics, and research the characteristics of MHCⅠgene of goose F1 and the physicochemical properties of the protein. Bioinformatics was analyzed the nucleic acid data, deduced amino acid sequence and phylogenetic trees. The result of sequence analysis showed that the fragments of MHCⅠgene of goose F1 from fast-growth lines was 1036 bp in length, which coded 96 amino acids polyprotein. The homology were 93% and 83% with MHC Ⅰ gene and coding sequence of Wulong goose in NCBI respectively. There were 72 different bases sequence and 16 amino acids change. There also was higher homology with other poultry, and existed genetic relationship of Siji goose > chickens > ducks.The homology segment sequences corresponding to the fragments of MHCⅠ gene of goose F1 coded 96 amino acids protein, which molecular weight, PI, positively or negatively charged amino acid, estimated half-life, instability index, aliphatic index and average hydrophobicity were 11.342 ku, 5.32, 14, 17, 2.8 h, 34.92, 42.81, -1.066, respectively, and appeared 9 B cell epitopes, but contained no signal peptide. These results indicated that the protein for hydrophilic non-secreted proteins, had the high immunogenicity. In addition, The protein structure study indicated that alpha-helix, beta-sheet, beta-turn and random coil were 31.25%,16.67%, 14.58% and 37.50%, respectively. There existed amino terminal domain and carboxyl terminal domain in the tertiary structure. Therefore, MHC gene had significant difference between species and populations of individuals by the pathogen pressure in environment, and there were the interaction between polymorphism of MHC molecules and the diversity of antigenic peptide. MHC determined the differences of individual susceptibility to disease, and could be treated as a candidate gene for disease resistance.