猪圆环病毒2型cap基因与猪γ-干扰素基因双表达载体的构建及稳定表达

通过PCR方法分别从含有猪圆环病毒2型(PCV-2)核衣壳蛋白(Cap)基因和猪,γ-干扰素(PoIFN-γ)基因的重组克隆载体pMD18-PCV-2Cap和pMD18-PoIFN-γ中扩增出Cap和PoIFN-γ的基因,将两基因亚克隆到真核表达载体pBudCE4.1中,构建重组真核双表达载体pBud-IFNPCV。重组质粒转染BHK-21细胞后进行Zeocin~(TM)抗性筛选建立细胞系,阳性细胞通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测cap和PoIFN-γ在BHK-21细胞中的表达。结果显示,试验中筛选出1株Zeocin~(TM)抗性阳性BHK-21细胞,cap和PoIFN-γ均在该细胞中获得稳定高效表达,这将为猪圆环病毒病的防治提供新的方法。     

伊氏锥虫HGPRT基因cDNA的克隆及其在E.coli中的表达

根据引物设计的一般原则，参照伊氏锥虫HGPRT基因的核苷酸序列设计、合成一对引物，PCR扩增伊氏锥虫HGPRT基因cDNA。低熔点琼脂糖回收：PCR产物，并将其克隆至pGEM—T Easy载体中，经酶切、PCR鉴定和序列分析，获得重组中间质粒pGEM／HGPRT。重组中间质粒pGEM／HGPRT经Nco I和Sal I双酶切，回收目的片段HGPRT，以非融合形式插入原核表达质粒pBV220构建表达质粒pBV／HGPRT，转化大肠杆菌DH5a，42℃诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描分析，表达产物HGPRT的分子量约为23kD，与理论推算值相符，表达率占总菌体蛋白的19％，经间接ELISA检测，表达产物能被伊氏锥虫阳性血清所识别。     

反向遗传学技术在新型疫苗研制中的应用

随着分子生物学等学科的发展,出现了许多可以应用于疫苗研制的新方法和新技术,并在某些方面已经开始逐步取代传统的疫苗研制技术。其中,反向遗传学技术发展迅速,倍受国内外研究者关注。这项技术不仅为解析病毒蛋白在病毒复制周期和致病性中的作用提供了有效的研究工具,而且为研发RNA病毒为载体疫苗提供了新的思路和策略[1-4]。     

专利展示

◆专利名称：通过给药非复制型载体化疫苗而进行的对禽类的免疫 专利申请号：CN200680038344.5 公开号：CN101365484 申请日：2006.08.15 公开日：2009.02.11 申请人：美国瓦克辛公司;奥本大学本发明通常涉及免疫学领域和疫苗技术领域。     

稳定转化家蚕BmN细胞表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

为了建立稳定转化家蚕细胞持续表达外源基因的技术体系,构建了基于piggyBac转座子的带有人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因(hGM-CSF)和新霉素抗性基因(neo)表达元件的转基因载体pigA3GFP-IE-neo-FH-hGM-CSF-polyA-fib-L-intron1,以及带有hGM-CSF和吉欧霉素(zeocin)抗性基因的昆虫细胞转化载体pIZT-IE-hGM-CSF,分别转染家蚕卵巢BmN细胞,并以含相应抗生素G418或zeocin的培养液筛选,得到稳定的转化细胞系FH-hGM-CSF和IE-hGM-CSF。ELISA检测结果显示,hGM-CSF在FH-hGM-CSF和IE-hGM-CSF转化细胞系的表达水平分别为1.534 55 fg/个细胞和2.227 38 fg/个细胞。     

加强母猪管理减缓品种退化

<正>当前我国核心育种工作陷入加速引种、反复引种、过度引种和品种退化加速的怪圈,母猪普遍出现遗传表达有限和繁殖性能下降等问题,诸如:发情和静立反应不明显,发情配种率普遍下降,分娩延期、产程过长、产后感染,产后无乳和乳腺炎现象严重等。这些问题的发生与母猪饲养管理过程中出现的乱象有很大关系,笔者将在本文中作出具体叙述。1热衷引种和盲目选种加快品种退化2013年是我国养猪业引种最频繁的一     

兰州熊蜂(Bombus lantschouensis)SMPD基因原核表达诱导条件的优化

兰州熊蜂(Bombus lantschouensis)是我国优良熊蜂蜂种,已成功实现人工饲养并应用于设施作物授粉。鞘磷脂磷酸二酯酶(SMPD)是一种水解酶,参与鞘磷脂代谢过程并起关键作用。本研究从诱导温度、IPTG浓度及诱导时间三个因素对SMPD基因的原核表达进行优化,以期获得最佳原核表达条件。结果表明:诱导温度与诱导时间是影响SMPD蛋白表达量的主要因素,而诱导剂IPTG浓度影响较小。当温度为10℃,IPTG终浓度为0.1 mM,诱导时间为32 h时,目的蛋白表达量高,特异性好,能够满足该蛋白后续纯化实验要求。本研究结果为进一步开展SMPD蛋白功能研究奠定重要基础。     

宇宙时空论之超光速原理与宇宙起源

本篇理论对于超光速原理,宇宙的起源进行物理性的分析,并从多个角度去论证两者之间的关系。从而得出了万物的永恒运动都源于物质的最基本结构为超光速。能量是物质运动的量度,因此能量就为超光速,光速,为先天物质时空子、虚子的存在形式。     

梁启超的趣味说

近年来,我国多组调查数据显示,随着物质财富的增加,国民生活水平的不断提高,国民幸福指数反而有减无增,富而不乐的现象普遍存在。真正的幸福和快乐又是什么呢?人怎样才能获得真正的幸福和快乐?梁启超先生的趣味学说无疑给我们提供了一些有益的启示。本文就趣味于生活的意义和价值以及趣味学说的现实意义两方面进行探讨。     

猪鸡致病菌β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测与药敏试验

 对分离的猪鸡致病菌，分别进行了?－内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测，并用试管二倍稀释法测定了β－内酰胺环类抗生素或β－内酰胺环类抗生素与抑制剂舒巴坦联用对非产酶菌、产?－内酰胺酶菌、产ESBLs菌的抗菌活性。结果表明，43株分离菌的大多数可产生?－内酰胺酶，3株鸡志贺氏菌为ESBLs阳性菌株。30株分离产酶菌均对阿莫西林、氨苄西林耐药（MIC≥32 ?g/ml），16株非产酶菌（标准菌株及分离株）中的15株对阿莫西林、氨苄西林敏感，只有一株非产酶分离菌耐药。氨苄西林与舒巴坦以2∶1、4∶1配比联用时，其对分离产酶菌的MIC值分别降低10~40倍、10~20倍。临床致病菌对三代头孢均敏感，与舒巴坦以2∶1、4∶1配比联用时，三代头孢的MIC值不变。当头孢噻呋、头孢曲松与舒巴坦以2∶1配比联用时，其对产ESBLs菌的MIC值降低2～4倍。