棘孢木霉葡聚糖酶基因Glu1的克隆及原核表达

从棘孢木霉(Trichoderma asperellum)ACCC30536中克隆获得一个葡聚糖酶基因Glu1,其cDNA全长984bp,编码327个氨基酸。该葡聚糖酶属于Glyco-hydro-12家族,推测为β-1,4-葡聚糖酶,与深绿木霉IMI 206040的Glycohydro-12家族蛋白(XP_013940397.1)有91%相似性,且亲缘关系较近。运用qRT-PCR技术检测9种诱导条件下棘孢木霉Glu1基因的表达水平,结果表明,Glu1基因能参与棘孢木霉对山新杨(Populus davidiana×P.alba var.pyramidlis)或杨树病原菌的识别。构建原核表达载体并获得重组蛋白rGlu1。酶活特性分析结果表明,该酶最适pH为4.5,最适温度为45℃,且酶活性随诱导时间延长逐渐升高,在5h达到稳定。     

2017年北京市猪伪狂犬病血清学调查

为了解北京市猪伪狂犬病野毒感染情况,2017年从北京市7个区157个养猪场（户）,采集5 469份猪血清样品,采用猪伪狂犬病病毒（PRV）gE抗体酶联免疫检测试剂盒进行血清学调查。结果显示：北京市7个区均有不同程度的PRV野毒感染,平均样品阳性率为53.36%。其中：经产母猪阳性率最高（58.28%）,其次是育成猪（57.55%）、育肥猪（54.49%）,后备母猪阳性率最低（37.46%）;散养户的样品阳性率较高,为66.42%,规模猪场的阳性率较低,为47.71%。调查结果表明,北京市PRV野毒感染较为严重,对猪场采取伪狂犬病净化和综合防控措施势在必行。     

牛磺酸对老龄大鼠睾丸组织生精功能的影响

为探讨牛磺酸对老龄雄性大鼠睾丸组织生精功能的影响及可能的作用机制,本试验在老龄雄性大鼠饮水中添加1%牛磺酸和1%β-丙氨酸(牛磺酸转运抑制剂)后,对其睾丸组织标志酶(ACP、SDH、LDH、γ-GT、GPT和GOT)活性进行测定,并通过半定量RT-PCR方法对睾丸组织精子发生关键调控基因CREM m RNA表达水平进行测定。结果是牛磺酸可显著提高老龄大鼠睾丸组织标志酶(ACP、SDH、LDH和γ-GT)的活性,明显降低GPT和GOT活性;显著提高睾丸组织中CREM m RNA表达量。表明牛磺酸可提高老龄大鼠睾丸组织的生精功能。     

全细胞催化剂pelB⁃Xln⁃DT构建及其在水解三七皂苷R1中的应用

设计带有EcoRV和XhoI酶切位点的上下游引物PCR扩增嗜热菌Dictyoglomus thermophilum DSM 3960的GH39家族的β-木糖苷酶Xln-DT编码基因,利用基因拼接技术将其重组至p ET-20b质粒中pelB信号肽基因的下游,重组质粒转化大肠杆菌表达宿主Escherichia coli BL21,构建分泌融合表达型基因工程菌pelB-Xln-DT。经异苯基-β-D-硫代半乳糖苷诱导,pelB-Xln-DT酶活为2.1 U/m L。粗酶液pelB-Xln-DT的最适温度为85℃,较原酶提高了10℃,最适p H为5.5,比原酶降低了0.5; pelB-Xln-DT在85℃下的热稳定性比原酶有了一定提高,保温1 h后酶活基本不变,保温2 h其剩余酶活为82.0%,而Xln-DT在85℃下保温1 h后其剩余酶活为70.4%;在p H 4.0～7.0的范围内,pelB-Xln-DT具有良好的p H稳定性。引入pelB信号肽后不但能够提高蛋白的可溶性表达,还能提高酶蛋白的热稳定性。以pelB-Xln-DT作为全细胞催化剂转化三七皂苷R1生成人参皂苷Rg1,研究了转化温度、转化时间、三七皂苷R1添加量、重复次数等因素对转化效率的影响。结果表明,全细胞催化剂用量1.0 U/m L,在温度37℃下,3 g/L的三七皂苷R1反应3 h后的摩尔转化率达到91.6%,重复利用10次后,转化率仍能达到46.7%,显示出pelB-Xln-DT良好的重复催化性能。     

牦牛胎盘肽抗氧化作用的研究

为了探讨牦牛胎盘肽的抗氧化作用,试验将20只小鼠随机分为药物组和对照组,连续15 d分别注射牦牛胎盘肽和生理盐水,0.2 m L/d,然后处死小鼠,取其心肌、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏,制成组织匀浆,测定各组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量。结果表明:药物组心肌和肝脏SOD活性显著高于对照组(P0.05);药物组心肌、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏GSH-Px活性显著高于对照组(P0.05);药物组心肌、肝脏和脾脏MDA含量显著低于对照组(P0.05)。说明牦牛胎盘肽具有一定抗氧化能力。     

国际科技资讯

丹麦研究遗传变异和翻译后修饰影响牛乳凝乳过程中酪蛋白巨肽的释放干酪生产过程中凝乳酶促作用的第1个阶段是凝乳酶切割κ-酪蛋白(κ-casein,κ-CN),释放出亲水性C端-酪蛋白肽——酪蛋白巨肽(caseino-macropeptide,CMP)进入乳清。由于遗传变异以及磷酸化、O-连接的糖基化一系列翻译后加工的原因,κ-酪蛋白的成分很不均一。丹麦研究人员利用液相串联质谱法分析牛乳中添加凝乳酶后总蛋白谱和各种酪     

产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌检测方法研究进展

抗生素的不合理使用使得细菌耐药性快速产生及传播，细菌耐药性已然成为重大公共卫生问题。碳青霉烯类抗生素在临床治疗中表现良好，常作为治疗多重耐药菌感染的最后一道防线，碳青霉烯耐药菌的出现对公共卫生安全产生了极大的威胁。产碳青霉烯酶是碳青霉烯耐药菌耐药的主要机制，因此，对产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的检测至关重要。目前，对于碳青霉烯酶的检测手段以表型检测和分子生物学检测方法为主。表型检测一般易于操作，成本低廉，便于在临床进行，但在检测效率和检测用时方面差强人意。分子生物学及其他新型技术在保持高特异性和敏感性的基础上能做到快速、高通量检测，但试验检测的成本高，需专业设备和人员，部分技术在碳青霉烯酶检测领域仍有待开发。当前，多种碳青霉烯酶的检测方法可针对不同的需求和目的，并没有一项检测能满足所有情况。进行检测时，试验所需时间、操作难度、经济成本等都需列入考量，应根据实际情况选择合适的检测方法。笔者通过结合当前背景，归纳总结产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的检测方法，从试验特异性与敏感性、可操作性、检测时间、试验成本等方面分析比较各个方法特点，以期为之后新的检测方法的开发及现有方法的改良研究提供切入点，为临床监测与检测方案的制定和实行提供思路。     

兔水疱性口炎的血清学诊断

1液相阻断酶联免疫吸附实验 样品采集为被检兔的血清样品。固相载体用pH值9.6的碳酸盐（CBS）缓冲液将兔抗血清作适当稀释,包被ELISA反应板,4℃过夜。然后用含0.05%吐温-20的磷酸盐缓冲液（PBST）洗板3次,再用2%卵白蛋白室温封闭1小时。洗板3次后备用。     

蝴蝶兰切花花被不同开放阶段酶活性的变化

以蝴蝶兰鲜切花为试材,对切花花被不同生理阶段3种酶活性的变化进行测量分析,以期为蝴蝶兰切花寿命的延长提供参考依据。结果表明:萼片和花瓣中的过氧化物酶(POD)从花苞期到半开期酶活性变化不明显,从半开期到衰老期酶活性显著升高。花瓣中的超氧化物歧化酶(SOD)从花苞期到半开期酶活性升高,从半开期到衰老期酶活性显著降低;萼片中的超氧化物歧化酶活性变化不显著但也呈先上升后下降趋势。花瓣中的中性蛋白酶(NP)从花苞期到半开期酶活性呈上升趋势,半开期到盛开期呈下降趋势,盛开期到衰老期呈上升趋势;花萼中的中性蛋白酶从花苞期到盛开期酶活性呈下降趋势,从盛开期到衰老期呈上升趋势;总体来看中性蛋白酶的活性呈先下降后上升趋势。     

硫酸对过氧化氢-乙酸预处理巨龙竹酶解和发酵的影响

以巨龙竹(DS)为研究对象，对其进行过氧化氢-乙酸(PA)预处理，探讨预处理中硫酸添加量对竹材化学组成、酶解效率和乙醇产率的影响。研究结果表明：随着预处理过程中硫酸用量的增加，竹材中的木质素质量分数不断降低，而纤维素和半纤维素的质量分数有所增加。在预处理中，添加硫酸作为反应助剂，能够使酶解效率提升，当硫酸体积分数为0.5%时，72 h的葡萄糖和木糖得率分别为84.77%和85.05%,与未添加硫酸的过氧化氢-乙酸预处理的巨龙竹相比，分别增加了42.40%和33.72%;其水解液经酵母发酵后的乙醇质量浓度为13.52 g/L,比未添加硫酸的过氧化氢-乙酸预处理水解液增加了73.33%。在巨龙竹过氧化氢-乙酸预处理过程中以硫酸作为助剂，能够降低底物的疏水性和表面木质素覆盖率，增加结晶度和比表面积，添加0.5%硫酸，纤维素酶可及度从未添加硫酸时的282.15 mg/g增加到500.12 mg/g,进而增加了纤维素酶与纤维素之间的生产性吸附，因此使巨龙竹的酶解效率和发酵产率得到提升。