10株鸡源奇异变形杆菌的质粒消除及耐药性研究

为建立SDS消除奇异变形杆菌质粒的方法,了解奇异变形杆菌的质粒与奇异变形杆菌耐药性表型之间的关系,采用正交设计的试验方法研究奇异变形杆菌的消除条件,并采用琼脂糖凝胶电泳的方法进行验证,筛选出质粒消除效果最佳的试验条件。采用微量稀释法进行质粒消除前后奇异变形杆菌对13种抗生素的药敏性测定。结果显示,消除效果最好的条件为消除剂SDS浓度0.2%,温度42℃,消除72 h。将该组消除后不含质粒的奇异变形杆菌与原含质粒奇异变形杆进行耐药性试验,结果表明,10株鸡源奇异变形杆菌消除质粒后,其中9株对头孢噻呋的药物敏感性由耐药变为敏感。     

海南木豆丛枝植原体质粒全序列测定及分析

提取木豆叶片基因组总DNA,通过克隆,测序木豆丛枝植原体海南株系质粒(pPPWB-Hn)的完整DNA序列,并使用生物信息学软件对该质粒全长序列进行分析。分析结果显示:pPPWB-Hn质粒全长4 218 bp,含有4个开放阅读框,分别编码Rep、dnaG、threonine synthase和未知蛋白。其中,Rep是2次跨膜蛋白,dnaG是单次跨膜蛋白,Rep和dnaG均与质粒自主复制有关。Rep和未知蛋白可能分布在细胞质中,dnaG可能定位到细胞膜上或膜外,Threonine synthase可能定位到线粒体膜上或线粒体内腔。系统进化树显示:pPPWB-Hn与植原体16SrⅡ组的pPNWB(AY270152),pTBBperi(DQ119297)及pTBBcap(DQ119296)处在同一进化分支。     

牛生发泡期裸卵体外成熟培养体系的建立

本研究通过牛(Bos taurus)卵母细胞体外成熟培养不同时间(0和10 h),剥除卵母细胞外周的颗粒细胞后继续培养,观察其与不脱颗粒细胞正常体外成熟培养卵母细胞之间的差异.研究结果显示:成熟培养0脱颗粒细胞的卵母细胞,与正常成熟培养的卵母细胞在成熟率(19.51%vs.80.14%,P<0.05)、卵裂率(27.08%vs.82.61%,P<0.05)和孤雌激活胚胎囊胚率(7.69%vs.21.71%,P<0.05)差异显著;成熟培养10 h后脱颗粒细胞的牛卵母细胞,与正常体外成熟培养的卵母细胞相比,在成熟率(82.71%vs.80.14%,P>0.05)、卵裂率(83.01%vs.82.61%,P>0.05)和孤雌激活胚胎囊胚率(19.30%vs.21.71%,P>0.05)无显著差异.向成熟培养10h脱颗粒细胞的卵母细胞内注射pVenus-Hlfoo mRNA,pVenus,pDsRed1-N1和重组质粒pDsRedl-Hle都能够得到表达.非功能标记基因显微注射组与对照组在卵母细胞成熟率(81.42%vs.82.03%,P>0.05)、卵裂率(75.24%vs.78.15%,P>0.05)和孤雌激活胚胎囊胚率(17.42%vs.18.82%,P>0.05)上差异不显著.研究结果提示:在成熟培养10 h,剥离颗粒细胞不会影响牛卵母细胞的发育潜能,这一技术平台可以用于牛卵母细胞体外成熟分子机制的研究.     

重组MBP-GnRH6融合蛋白的表达与鉴定

将人工合成促性腺激素释放激素(GnRH)六聚体基因片段连接至pMAL-c4x载体,获得的pMAL-c4x-GnRH6重组质粒转化到大肠杆菌TB1中进行表达.采用SDS-PAGE,Western blot进行鉴定,并通过动物实验对表达产物的免疫原性进行检测.获得了分子量大小约为50 kD的麦芽糖结合蛋白-GnRH六聚体(MBP-GnRH6),且融合蛋白与GnRH抗体的反应性较好,并能使睾丸萎缩、变性.表明重组MBP-GnRH6融合蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,可用于小鼠的免疫去势.     

早籼稻中早39的特征特性及栽培技术

介绍中早39的特征特性,总结其栽培技术,包括播种期确定、育秧、移栽、施肥、灌溉、病虫草防治、收割等方面内容,以供参考。     

猪布氏杆菌S2株BvrR基因的克隆与分析

布氏杆菌病是由布氏杆菌(Brucella)引起的人兽共患传染病,引起流产、不育和各种组织的局部病灶,严重地威胁着人和多种动物的身体健康[1]。布氏杆菌感染人畜后,可进入机体细胞内生存发育。研究发现,BvrR/BvrS双组分调节系统(TCS BvrRS)和Ⅳ分泌系统VirB(T4SS VirB)在其细胞内生存和致病能力     

DHF65—39/450型沸腾炉的大件安装

文内介绍了DHF65—39/450型沸腾锅炉安装中主要部件的吊装办法及程序。对同类或近似的锅炉安装具有一定的参考价值。     

基因重组番茄方法及安全性评价

1．1 土壤杆菌与二元载体。目前，基因重组番茄的最好方法是使用土壤杆菌，这种细菌有Ti质粒，能够感染许多双子叶植物，诱导冠状瘤。在Ti质粒上的T-DNA领域通过对存在于Ti质粒上的yjr领域感染的基因群和存在于染色体上的基因作用，编人植物细胞染色体。并且，在T-DNA上存在植物生长素与细胞激肽分裂素等植物激素，     

Construction of Recombinant Expression Plasmid pYELmleA of mleA Gene and Expression in Saccharomyces cerevisiae

苹果酸-乳酸酶是进行MLF的功能酶。笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因重组表达质粒的构建。利用来自重组质粒pLmleA的，mleA基因，以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件。以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体，构建了重组表达质粒pYELmleA，并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58。酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定。SDS—PAGE检测表明获得的转化子表达了约60KD的目标蛋白。斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中。获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d；取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量，采用t检验进行差异显著性分析，结果表明mleA基因进行了功能性的表达，将L-苹果酸转化成L-乳酸，L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著，L-乳酸的生成量为1002—1106mg／L。苹果酸的相对降低率为19．16—22．34％。