鸡痘病毒282E_4株TK基因重组载体质粒的构建

应用已克隆的鸡痘病毒（ＦＰＶ）２８２Ｅ＿４株基因组ＴＫ基因，在ＮｃｏⅠ部位引入痘苗病毒Ｐ７．５启动子和Ｐ１１启动子控制下的大肠杆菌ＬａｃＺ基因，经酶切鉴定，成功地构建了用于ＦＰＶ重组的载体质粒。与亲本毒株在鸡胚成纤维细胞内共转染，产生了表达ＬａｃＺ基因的重组鸡痘病毒。经传代筛选、纯化，重组病毒较稳定。实验结果表明，以ＴＫ基因构建的重组载体质粒可用于外源基因的重组表达研究。     

伊氏锥虫HGPRT基因cDNA的克隆及其在E.coli中的表达

根据引物设计的一般原则，参照伊氏锥虫HGPRT基因的核苷酸序列设计、合成一对引物，PCR扩增伊氏锥虫HGPRT基因cDNA。低熔点琼脂糖回收：PCR产物，并将其克隆至pGEM—T Easy载体中，经酶切、PCR鉴定和序列分析，获得重组中间质粒pGEM／HGPRT。重组中间质粒pGEM／HGPRT经Nco I和Sal I双酶切，回收目的片段HGPRT，以非融合形式插入原核表达质粒pBV220构建表达质粒pBV／HGPRT，转化大肠杆菌DH5a，42℃诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描分析，表达产物HGPRT的分子量约为23kD，与理论推算值相符，表达率占总菌体蛋白的19％，经间接ELISA检测，表达产物能被伊氏锥虫阳性血清所识别。     

猪瘟病毒E2基因与报告基因lacZ双表达质粒的构建及体外表达

利用反转录和套式PCR技术，从猪瘟病毒(CSFV)石门血毒中扩增出了E2基因，将其用N0tⅠ和XhoⅠ双酶切后，与同样处理的真核表达载体pBudCE4．1相连，获得了pBudCE Es2-22的阳性质粒。对后者再以HindⅢ和XbaⅠ双酶切，并与来自质粒pBudCE lacZ／CAT的lacZ基因片段连接，获得了含CSFV E2基因与lacZ报告基因的真核双表达质粒pBudCE lacZ／Es2—22。该质粒转染BHK21细胞后，用β-Gal Staining试剂盒原位染色可见许多着染蓝色的细胞；用CSFV Antigen试剂盒检测转染细胞的上清液和细胞沉淀，均可检测到含CSFV E2抗原。结果表明，构建的真核质粒pBudCE lacZ／Es2—22实现了2个外源基因的共表达。     

鸡痘病毒282E4株2.2kbTK基因序列分析

将鸡痘病毒２８２Ｅ４弱毒株基因组中的３．７ｋｂＨｉｎｄⅢ片段克隆到ＫＳ（－）质粒中，亚克隆后，获得含ＴＫ基因正反方向插入的２．２ｋｂＨｉｎｄⅢ－ＣｌａＩ片段的质粒ｐＫＦＡ和ｐＫＦＢ，进而构建出正反方向的系列嵌套缺失质粒。用Ｔ７、Ｔ３引物所做的核苷酸序列分析表明，２．２ｋｂＨｉｎｄⅢ－ＣｌａＩ ＴＫ基因序列长为２１５９ｂｐ，含有两个完整的读码框架（ＯＲＥ）Ｘ和ＴＫ，并确证了ＴＫ基因内存在单一酶切点Ｎ     

两系杂交粳稻"云光十二号"优质高产栽培技术

陆良县在2000年引试云光系列品种的基础上,于2002年开始引入“云光十二号”示范种植。在省农科院粮作所与陆良县种子管理站的共同协作下,至2004年示范种植面积已达508hm2(3年累计示范种植面积1008.7hm2)。由于良种良法配套种植,“云光十二号”平均每公顷产量11373kg,最高产量每     

遥感和地理比较综合分析法在高原山区的应用

利用航片、假彩色合成卫片对四川三州及西藏东南部地区的土地类型建立解译标志,用此标志和地理比较的综合分析法对一级地类的判出率和判准率达100％;二级地类判准率达100％,判出率达88.5％。勾绘的地类界线位移量均小于0.3毫米,比直接利用地形图的精度高2—3倍,转绘后的面积量算精度亦高。比单独使用地形图或航片进行全野外调绘节省资金20—80％。     

应用碱性抽提法和羟基磷灰石柱层析法提纯质粒DNA

用碱性抽提法和羟基磷灰石柱层析法,加以改进,总结出一套简便易行、低花费的质粒提纯方法。此法适用于一般条件试验室,可进行质粒的批量制备,所提纯质粒经限制性内切酶消解和转化试验,其产量(900μg/500 ml)、纯度和生物学活性均可满足重组DNA的需要。     

NOS/HuIFNa嵌合基因的构建及其与Ti质粒载体的拼接

将人α干扰素(HuIFNa)基因的全长cDNA克隆到nos启动子的下游,并在3＇端加上nos的3＇末端片段,得到人α干扰素基因插入方向同nos启动子一致的重组质粒pLQP24和方向相反的重组质粒pLQN2,并分别同Ti栽体pARCl2拼接。将NOS/HuIFNa引入到pARCl2的T区端臂内,构建成重组质粒pLPP3和pLNP20通过接合转移将这两个重组质粒引入到根癌土壤杆菌LBA4404。     

伪狂犬病病毒Fa株gp63（gI） 基因核苷酸序列测定及分析

对我国最早分离的伪犬病病毒（pseudorabies virus,PRV)Fa株糖蛋白gp63(gI)基因核苷酸序列及的氨基酸序列作了测定与分析，完整的gp63(gI)结构基因从起始密码子ATG到终止密码子TGA共有1050个核苷酸残基，编码由439个氨基酸残基构成的多肽链，4种核苷酸残基的构成比分别为：G35．9％，11.33%,T11.81%,C40.95%,G C含量达76．85％，PRV Fa株gp63基因核苷酸序列与Nice株的相比，两者同源性达98．13％，仅存在3个核苷酸残基的缺失变异，氨基酸推导序列分析表明，糖蛋白gp63具有典型膜蛋白特征，与Nice株相比，同源性为97．42％，gp63基因起始密码子由3个连续的ATG组成，ATG上游区域内无启动子调控区序列。