猪呼吸道、消化道内细菌质粒的提取

使用多种选择培养基,通过菌落形态、革兰氏染色、镜检和生化反应,对猪呼吸道、消化道中常规菌群进行初步分类,并使用碱变性法提取质粒。结果从健康猪呼吸道和消化道中分离培养出66株菌株（兼性厌氧菌）,获得了长沙地区猪呼吸道、消化道中菌群的基本数据。为相关基础研究和模型应用提供了重要的参考数据;获得了丰富的质粒DNA库,为进一步...     

实时荧光定量PCR检测猪病料中的PRRSV与CSFV

根据GenBank发表的PRRSV、CSFV基因核苷酸序列,应用Primer 5.0软件分别设计了2对特异性引物.以重组质粒作为阳性标准品,应用SYBR Green I real-time PCR检测两种病毒的核酸含量.在样品稀释到10.1～10<'-11>拷贝时,能得出良好的线性关系,相关系数为R<'2>=0.999...     

猪场环境大肠埃希菌耐药质粒消除研究

为了解耐药质粒消除对大肠埃希菌耐药性及其他生理特性的影响,参考前期试验分离出的8株携带aac(6')-Ib质粒耐药基因的大肠埃希菌的药敏试验.选取1株耐药性最强菌株用高温及SDS进行耐药质粒消除,PCR检测aac(6')-Ib基因.结果显示,耐药质粒成功消除,耐药性消失,且细菌在不含抗生素条件下培养,耐药性消除状态可稳...     

p15基因真核表达重组体及人宫颈癌细胞转染的研究

将含人p15cDNA质粒pBS-SK-p15以EcoRI和XhoI进行双酶切，再与真核表达载体pCR^TM3经相同酶切点连接，转化感受态细菌，筛选，鉴定得到可在真核细胞中表达人p15基因的重组质粒PCR-hp15。以脂质体介导法转染人宫颈癌细胞，用G418筛选，得到转染的人宫颈癌细胞，转染细胞的恶变程度有所改善。     

煮沸制备质粒DNA的方法完善

为制备质量和数量都较高的质粒DNA,在提取方法和程序上,完善出一套用煮沸裂解法大量提取质粒DNA的方法,该方法提取步骤简单,经电泳检测和定量分析,提取效果好,易于推广使用。     

α-半乳糖苷酶基因Mel1在毕赤酵母中的组成型表达

用PCR方法从酵母(Saccharomycescerevisiae)AH109中扩增出α-半乳糖苷酶的Mel1基因,将其克隆至整合型载体pGAPZαA中构建成组成型分泌表达酶产物的重组质粒pGAPZα-Mel1。将线性化的重组质粒pGAPZα-Mel1电击转化至毕赤酵母(Pichiapastoris)KM71,在含有100mg/mLzeocin和预先涂布有X-α-gal的YPDS平板上选择蓝色阳性菌落。发酵培养酵母的上清经SDS-PAGE分析,在53kD处有特异带;经非变性PAGE凝胶电泳,与显色底物的反应,检测到α-半乳糖苷酶活性带。重组菌pGAPZα-Mel1/KM71摇瓶发酵6d后,培养液α-半乳糖苷酶粗酶活性为12U/mL。     

导入外源GRF基因质粒对犊牛生长性能的影响

为了研究导入GRF基因质粒对犊牛生长性能的影响,选取36头体重为约102kg西门塔尔杂交牛,随机分成四组每组9头,分别注射含有0mg,3.37mg,6.74mg,10.11mg质粒的5ml生理盐水。在试验过程中,定期进行增重,饲料采食量和生长激素水平的测定。试验结果表明,各处理组均在一定程度上提高了动物的日增重和饲料转化率,其中6.74mg处理组效果最好,日增重比对照组高出17.33%(P<0.01),饲料转化率提高18.05%(P<0.01)。屠宰后进行组织质粒残留检测,未发现有残留。     

禽传染性支缺管炎病毒四川分离株M基因的克隆及真核表达载体构建

膜蛋白是禽传染性支气管炎病毒的主要结构蛋白,可能存在着具有重要免疫作用的抗原决定簇,能诱导细胞介导的免疫反应,但其免疫生物学功能尚不清楚.本研究选择禽传染性支气管炎病毒中国分离株SAIBWJ,通过RT-PCR扩增获得其膜蛋白基因M基因并插入到PGEM-T载体中,获得重组质粒PGEM-M,将重组质粒中的克隆片段进行序列测定及分析.对PGEM-M进行双酶切获得M基因片段,克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,通过菌落PCR、双酶切证明获得了M基因的真核表达质粒.利用DNAstar软件将IBV SAIBwj株的膜蛋白基因的核苷酸序列与GenBank中的国内外参考毒株进行比较,其核苷酸序列的同源率为91.6%～98.8%,氨基酸序列的同源率为91.6%～99.6%.糖基化位点的增加和减少对M蛋白的抗原性产生很大的影响.在M蛋白近N端含有两个糖基化位点,第一个跨膜疏水区距离亲水区大约20个氨基酸.SAIBwjM基因核苷酸、氨基酸进化关系可以看出,SAIBwjM与国内外参考株的同源性均较高,因此可能具有交叉保护性抗原,可望用于制备诊断试剂及制备基因工程疫苗.由于IBV变异较大,常规疫苗不能产生完全保护力.在IBV的免疫保护机制中,细胞免疫起着关键的作用,近年来一些研究者已经进行了IBVDNA疫苗的研究,并取得了一定的进展.IBV的S1基因真核表达质粒可同时诱导机体形成针对IBV的细胞免疫和体液免疫反应,由于S1基因经骨骼肌细胞内源性表达后主要通过MHCI类分子提呈抗原,特别有利于CD8+细胞毒T淋巴细胞的激活,对IBV免疫保护极有意义.陈洪岩等将鸡传染性支气管炎病毒肾型T株S1基因cDNA连接于pcDNA3构建了真核表达质粒,经肌肉注射免疫SPF鸡后血清IgG抗体逐渐升高,至35日龄左右达到高峰,但血清IgG抗体升高幅度不及IB油苗.质粒DNA免疫攻毒后有40%的鸡可耐过强毒的攻击,说明S1基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力.刘思国等将鸡传染性支气管炎HB株的核蛋白基因(N基)亚克隆到pcDNA3,构建了真核表达质粒pcDNA-N.用该质粒两次免疫SPF雏鸡一周后进行攻毒试验,结果保护率为40%,表明N蛋白介导的细胞免疫在抗感染中发挥了作用.现在的DNA疫苗研究主要集中在免疫原性较高的N基因和S基因,对免疫原性较低的M基因的研究,国内未见报道.国外有报道M蛋白也能刺激机体产生低水平的抗体,M蛋白上可能存在着具有重要免疫作用的抗原决定簇,本研究将为进一步研究M基因的免疫原性及其在IBV中的作用基础材料.     

“彭家39”蜜桔选育及其栽培特性

一、选育经过及株系表现“彭家39”是1977年原新余县经作站根据农林部《农、林、牧、渔业1976年农业科技发展规划（草案）》和全国柑桔资源协作会议及省柑桔资源座谈会精神，在柑桔资源调查中发现的本地早优变单株。该单株是在姚圩乡彭家村发现的，当时调查编号为39号，本地早别名天台山蜜桔，故暂称这个优株为彭家39蜜桔。该株系源于本地早，优于本地早，除保持原品种质优、抗寒，适于加工制罐等优点外，在丰产性和品质上有了进一步提高，1977～1980年连续三年获宜春地区和全省柑桔鉴评会同类品种第一名。1979年省果树所分析其果实内质：固…     

鸡痘病毒282E_4株TK基因重组载体质粒的构建

应用已克隆的鸡痘病毒（ＦＰＶ）２８２Ｅ＿４株基因组ＴＫ基因，在ＮｃｏⅠ部位引入痘苗病毒Ｐ７．５启动子和Ｐ１１启动子控制下的大肠杆菌ＬａｃＺ基因，经酶切鉴定，成功地构建了用于ＦＰＶ重组的载体质粒。与亲本毒株在鸡胚成纤维细胞内共转染，产生了表达ＬａｃＺ基因的重组鸡痘病毒。经传代筛选、纯化，重组病毒较稳定。实验结果表明，以ＴＫ基因构建的重组载体质粒可用于外源基因的重组表达研究。