高粱花叶病毒Hcpro、CP和PIPO基因酵母双杂交载体构建及自激活验证

采用同源克隆技术获得侵染甘蔗高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)的Hcpro、CP、PIPO基因片段.将该基因片段连接至pGBKT7载体,分别构建酵母双杂交诱饵载体pGBKTT-Hcpro、pGBKT7-CP和pGBKTT-PIPO,经PCR、酶切及测序鉴定,证明重组诱饵载体构建成功后,将重组质粒导入Y2H Gold酵母菌株,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用.结果表明,含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性.含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade和SD/-Trp/-His营养缺陷平板上不能生长,表明重组诱饵质粒表达产物对ADE2、HIS3报告基因无自激活作用.研究结果为下一步利用酵母双杂交系统检测与高粱花叶病毒Hcpro、CP、PIPO蛋白相互作用的甘蔗蛋白提供基础.     

特效钓鱼诱饵配方

用山奈、白芷、丁香、广木香、小茴香、大黄、辛夷、桂皮各30克，放入2公斤65度左右的白酒中，然后密封半个月或更长时间。     

家白蚁高效诱饵的研制及诱效试验

为了研制白蚁高效诱饵剂，在室内用胶卷盒装各种锯木粉及添加剂，置于干燥器内，测定家白蚁对各种饵料的趋性，在室外把饵料盒埋在诱集箱外，42d后称重，室内试验，松木粉及杉木粉中加入添加剂后，对白蚁的引诱力提高7.9及24.9倍；室外试验，饵料中加入添回剂后，可提高白蚁对其取食量1.22-6.48倍，含萜类物过多的松、杉木的锯木粉，经烘，煮等处理后也可提高白蚁对它们的喜食程度。     

果树白蚁防治技术

我省危害果树主要白蚁是土栖白蚁 (黑翅土白蚁、黄翅大白蚁 )和家白蚁。危害种类几乎包括所有常绿和落叶果树 (梨树、桃树、板栗、猕猴桃、柑桔类等 )。甚至草本果园也遭受其害 (西瓜、甜瓜、草莓等 ) ,白蚁危害造成部分或成片果树生长衰弱 ,甚至枯死 ,严重影响果树正常生长发育 ,果品产量和质量下降 ,每年给国家、集体、个人带来巨大的经济损失。本人在近几年实际工作中 ,根据我省果树白蚁危害和白蚁防治具体实例 ,总结探索出一套比较完善的果树白蚁防治技术 ,现将结果整理报告如下 :1　土栖白蚁防治技术　土栖白蚁主要危害活果树的根系、…     

氟铃脲在家白蚁诱饵中最适量的室内外试验

氟铃脲是灭蚁灵被禁用后诱饵剂中的取代药品,它是昆虫几丁质合成的抑制剂.2002～2003年室内试验表明,以松锯木粉为基本原料的饵料中,氟铃脲与饵料的质量分数为0.50%时,对家白蚁均无拒食作用;野外试验质量分数为0.25%时,无拒食作用,0.50%时有拒食作用;野外试验还显示家白蚁对该药的敏感程度远高于黑翅土白蚁及黄翅大白蚁对药剂的敏感性.据此建议在生产中用诱饵法防治家白蚁时,氟铃脲与饵料的质量分数以0.25%为宜.     

稻瘟菌蛋白激发子在酵母双杂交系统中的自激活检测

利用PCR方法扩增稻瘟菌蛋白激发子基因pemG1,并在其上下游分别引入酶切位点EcoRI和XhoI,经双酶切后与诱饵质粒载体pLexA连接构建重组诱饵质粒pLexA-PEMG1,将该重组诱饵质粒转入酵母菌株EGY48[p8op-lacZ]中进行β-半乳糖苷酶整板分析检测自激活。结果表明,成功构建了重组诱饵质粒pLexA-PEMG1,并且其无自激活报告基因作用,对酵母菌株也无毒性作用。这说明该重组诱饵质粒可用于酵母双杂交系统,为筛选番茄cDNA文库获得诱饵蛋白PemG1的相互作用蛋白奠定了基础。     

PnsICE1基因酵母双杂交诱饵载体构建及转录自激活检测

为了更好地研究与Pns ICE1基因互作的蛋白,利用PCR方法扩增含有p GBKT7载体同源序列的Pns ICE1基因片段,构建酵母双杂交载体。测序结果表明,构建的目标基因序列正确。将诱饵载体质粒转化酵母菌株Y2H感受态细胞,Pns ICE1转化菌在SD/-Trp营养缺陷型培养基中正常生长,在SD/-Trp/X-a-Gal筛选培养基上长出蓝色的酵母单菌落,说明Pns ICE1转录因子具有转录自激活活性。