几丁质酶在植物抗真菌病害中的作用

几丁质酶对于植物抗真菌病害有重要作用,它可水解真菌细胞壁的重要组成成分———几丁质。正常情况下,植物体内几丁质酶的含量很低,如果将外源几丁质酶基因导入植物,可增强植物抗真菌病害的能力,而将几丁质酶基因与其他防卫蛋白基因一同导入植物,植物抗真菌病害的能力将会大大提高。     

水果裂果研究进展

综述了国内外对鲜食水果裂果的研究进展，从果实的形态解剖特性、环境因子、栽培措施、矿质营养元素与平衡等方面阐述了裂果发生的机理。认为表皮细胞大、果实角质层薄易于裂果；果实生长前期，土壤含水量不足，果皮发育受到影响，果实发育后期，久旱逢雨，果肉细胞迅速增大可造成裂果；缺钙、钾等矿质元素，易产生裂果。提出了预防裂果的几项措施。     

小黑杨转抗真菌病基因的初步研究

以小黑杨为受体材料,在对传统的农杆菌介导的叶盘转化法改进的基础上进行了转化外源几丁质酶基因。试验表明,菌液浓度为0.3~0.4是小黑杨遗传转化的适宜浓度,0.3时分化率最高(24.75),菌液浓度超过0.45时,分化率逐渐下降。经过对转化子的PCR及PCR-Sothern鉴定,结果呈阳性,证明外源几丁质酶基因导入并整合进小黑杨基因组中。     

中西药治疗家犬咽炎

<正>笔者近年来采用中西医结合治疗家犬咽炎6例,取得了满意疗效,现介绍如下。1病因家犬咽炎是其咽黏膜和黏膜下表皮组织的炎症。发病多因机械性、化学性和温热性刺激,如粗硬食、热食、刺激性气体物等引起所致;或受寒感冒和疲劳诱发咽炎。2临床症状精神郁闷,食欲废绝,体温升高40℃以上,吞咽困难,颌下、咽喉淋巴结肿胀,咳嗽,呼吸困难,触摸     

虾壳加速猪的生长虾

亚洲某国研究机构开发出了一个将废弃龙虾和海鲜贝壳变成可控制肠道健康的高级人类食品和动物饲料的创新方法。它是一种新型几丁质寡糖,可能会替代仍在该国广泛使用的抗生素。早期的试验证实,猪使用该寡糖后日增重平均提高了18%左右,这一水平领先其他任何寡糖产品。亚洲某国研究机构开发出了一个将废弃龙虾和海鲜贝壳变成可的创新方法。它是一种新型几丁质寡糖,可能会替代仍在该国广泛使用18%左右,这一水平领先其他任何寡糖产品     

加拿大:拟减少新烟碱类杀虫剂使用

<正>加拿大安大略省最近宣布将减少新烟碱类杀虫剂使用量。新烟碱类杀虫剂广泛应用于玉米和大豆等作物的种子处理,减少病虫害。这类杀虫剂在种子表皮形成膜,随着种子萌发逐渐释放到空气中,对蜜蜂、蝴蝶和鸟类等传粉昆虫有害。安大略苹果种植者协会会长史蒂文斯(Charles Stevens)指出,加政府希望到2017年将新烟碱类杀虫剂处理的作物面积减少至目前的     

三种新型化合物对草地贪夜蛾海藻糖与几丁质代谢及生长发育的影响

[目的]几丁质是昆虫外骨骼和围食膜的主要成分,其合成始于海藻糖酶(trehalase,TRE),终于几丁质合成酶(chitin synthase,CHS),蜕皮与外表皮重塑过程则需要依靠几丁质酶(chitinase,CHT)完成.本研究通过注射3种新型化合物,检测草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)...     

重组毕赤酵母表达棘孢木霉几丁质酶gene02524的酶学性质及抑菌活性

几丁质酶是催化降解几丁质的水解酶,在防治植物真菌病害与虫害方面的应用越来越广泛,是一种重要的生防蛋白。棘孢木霉TD3104是一株优良的植物病害生防菌,几丁质酶在抑菌防病过程中发挥重要作用。为克隆表达棘孢木霉TD3104几丁质酶基因gene02514,明确酶学性质和抑菌活性,利用毕赤酵母表达系统对目的蛋白进行表达,并通过SephadexG-100凝胶进行纯化,对序列进行分析并研究其酶学性质及进行体外抑菌试验。本研究成功地构建了pPIC9K/gene02524重组载体,并且经过比对发现其包含GH18家族的特征氨基酸序列,获得了毕赤酵母转几丁质酶基因工程菌,表达的重组几丁质酶表观分子量44.4 ku,K_m=2.048 2 g/L,V_max=0.635 5×10³μmol/（L·min）,最适反应温度为50℃,最适pH值为5.0,在pH值为3.5时稳定性最高;金属离子Cu²⁺、Hg²⁺可强烈抑制酶活性;可抑制金黄壳囊孢菌等病原真菌的生长。研究结果为解析棘孢木霉几丁质酶在生防中的作用及功...     

昆虫几丁质合成关键酶功能及其RNAi技术在害虫防治中的研究进展

几丁质对昆虫的生长发育至关重要,且不存在于植物和哺乳动物中,因此其合成途径的关键酶是较为理想的杀虫剂靶标。近年来,多种害虫的几丁质合成关键酶基因被克隆和鉴定,通过RNAi技术应用于一些重要害虫的防治研究工作中。本文较为系统的总结了近些年害虫几丁质合成关键酶的基因克隆及功能研究进展,重点阐述了几丁质合成酶、海藻糖酶基因基于RNAi技术应用于害虫防治取得的研究进展,分析了RNAi技术通过转基因植物表达dsRNA（RNAi抗虫作物）以及作为核酸农药（dsRNA）直接进行作物喷施的两种应用途径,文章最后还探讨了RNAi在害虫防治中面临的主要瓶颈问题以及主要应对策略。上述较为系统的归纳和总结,目的是为今后基于几丁质合成关键酶的RNAi技术应用于害虫绿色防控研究提供有价值的理论指导。     

飞蝗表皮蛋白LmKnk3-5′的抗体制备及组织定位

【目的】LmKnickkopf3-5′(LmKnk3-5′)是飞蝗（Locusta migratoria）蜕皮发育中重要的表皮蛋白。本文旨在制备LmKnk3-5′特异抗体并对其进行组织定位,为LmKnk3-5′生物学功能研究提供蛋白水平的证据,同时为进一步深入探究LmKnk3-5′与其他表皮蛋白在飞蝗表皮形成过程中的协同作用打下基础。【方法】首先比对飞蝗Knickkopf(Knk)家族4个基因LmKnk、LmKnk2、LmKnk3-FL和LmKnk3-5′的氨基酸序列,选取LmKnk3-5′的3段特异抗原序列R1、R2和R3,设计包含BamH I、Hind III酶切位点的引物,以LmKnk3-5′全长cDNA为模板,PCR获得LmKnk3-5′的特异抗原片段;然后将特异抗原片段与pET-32a经双酶切、T4连接酶连接、测序验证、成功构建重组质粒后,转入BL21（DE3）表达菌株中,加入IPTG（终浓度0.5 mmol·L^-1）低温（16℃）诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况;接着扩大培养可在菌体裂解液的上清中表达重组融合蛋白的大肠杆菌,提取蛋白并用Ni-NTA对其进行纯化,之后再用纯化后的重组特异抗原免疫小鼠4次,获得anti-LmKnk3-5′多克隆抗体,ELISA法对其进行效价检测,并用Western blot法检测其特异性。取飞蝗5龄若虫第8天表皮,制备石蜡切片,通过免疫组化法对LmKnk3-5′蛋白进行组织定位。【结果】通过氨基酸序列比对,选取LmKnk3-5′的特异抗原区域R1、R2和R3,分别包含208、147和131个氨基酸残基,蛋白理论分子量分别为24.0、17.0和14.8 kD。酶切连接后,成功获得 pET-32a-R1、pET-32a-R2 和pET-32a-R3重组质粒。诱导表达检测,发现只有含pET-32a-R2的表达菌在菌体裂解液的上清液中大量表达重组蛋白。将其扩大培养纯化后获得 R2重组融合蛋白,免疫小鼠取抗血清进行效价检测,抗体效价高达1﹕512 000,可满足抗体使用需求。Western blot结果表明,注射dsLmKnk3-5′后飞蝗体壁LmKnk3-5′的蛋白表达显著减少,表明anti-LmKnk3-5′抗体特异性良好。免疫组化试验结果表明,表皮蛋白LmKnk3-5′在飞蝗腹部体壁皮细胞及新表皮中均有分布,特别是新合成的外表皮顶端。【结论】成功获得飞蝗LmKnk3-5′多克隆抗体,证明其特异性良好。LmKnk3-5′在飞蝗腹部体壁新合成的外表皮顶端分布较多。研究结果为飞蝗表皮蛋白LmKnk3-5′功能研究提供了蛋白水平的证据。